本发明属于土壤生物修复技术领域，具体涉及一种农药多菌灵降解微生物菌剂及其制备方法。
背景技术：
化学农药作为保障农业丰收的重要手段，在农业生产中发挥着重要的作用。化学农药使用存在的主要问题是化学农药不合理使用、农产品中农药残留严重超标、防治成本高，对生态环境造成了严重污染，产生了大面积药害。微生物修复是利用特定微生物体的代谢吸收、转化、清除或降解化学农药成分，实现环境净化、生态效应恢复的生物措施。具有高效经济、无二次污染等特点。该技术已应用于各类污染领域，表现出了较高的应用价值，国内外有关行业部门专家认为是生态环境保护领域最有价值和最具生命力的处理技术，是农业污染修复的主要发展方向，也是解决化学农药污染土壤生态修复的有效手段。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种农药多菌灵降解微生物菌剂及其制备方法，通过生物修复的方式对农药残留土壤进行有效修复。
本发明所采用的技术方案为：
农药多菌灵降解微生物菌剂的制备方法，其特征在于：
包括以下步骤：
步骤一：发酵：
调节液体发酵培养基a的ph至6.5-7.0，并进行常规无菌处理，按液体质量6-9%无菌操作接入人苍白杆菌wnpa2，恒定温度30±1℃，搅拌速度180-200rpm，通风量0.27-0.30m3/min，罐压0.07-0.08mpa，持续发酵72-76hr，显微镜检测计数发酵液中细胞数达1.5-2.0×109个/ml时终止发酵；
步骤二：菌体细胞分离：
收集步骤一液体发酵培养基a的人苍白杆菌wnpa2发酵液，用酵母分离离心机离心分离除去发酵液中水份，获得乳白色粘稠状菌体细胞；
步骤三：制剂制取：
在步骤二获得的乳白色粘稠状菌体细胞中，按照菌体：甘油体积比1:（0.6-1.2）的比例加入甘油，并搅拌混合均匀，再按照菌体：硅藻土体积比1：（0.8-1.5）的比例加入细度为300目硅藻土，搅拌混合均匀，获得白色固体制剂即目的产品。
步骤一中的人苍白杆菌wnpa2于2014年11月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmccno.9943。
步骤一中的液体发酵培养基a的配方如下：
葡萄糖15-20g/l，mgso4·7h2o0.5-0.7g/l，nh4no31.0-1.5g/l，(nh4)2so41.5-2.0g/l，nacl1.0-1.5g/l，k2hpo4·3h2o0.5-1.0g/l，mnso4·2h2o0.4-0.6mg/l，余量水定容至1l。
如所述的制备方法制得的农药多菌灵降解微生物菌剂。
本发明具有以下优点：
本发明是一种高效、经济的环境友好型土壤修复技术，核心技术是高效降解菌株的筛选和功能菌剂的制备，本发明使用的人苍白杆菌wnpa2的多菌灵降解率均可达到50%以上。本发明是操作简单、修复效果好、成本费用低、不影响农业生产的土壤修复技术，相比其他方法具有处理成本低、施工简单、无二次污染、对环境影响小等优点。对恢复农业土壤的生态平衡和生产力具有良好效果。生物修复技术在化学农药污染治理的应用，能有效改善农田土壤环境，同时，对于保护农产品安全，推动农产品的绿色化、有机化及农田土壤的可持续发展具有良好的经济、社会效益。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行详细的说明。
本发明涉及的农药多菌灵降解微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：发酵：
调节液体发酵培养基a的ph至6.5-7.0，并进行常规无菌处理，按液体质量6-9%无菌操作接入人苍白杆菌wnpa2，恒定温度30±1℃，搅拌速度180-200rpm，通风量0.27-0.30m3/min，罐压0.07-0.08mpa，持续发酵72-76hr，显微镜检测计数发酵液中细胞数达1.5-2.0×109个/ml时终止发酵；
步骤二：菌体细胞分离：
收集步骤一液体发酵培养基a的人苍白杆菌wnpa2发酵液，用酵母分离离心机离心分离除去发酵液中水份，获得乳白色粘稠状菌体细胞；
步骤三：制剂制取：
在步骤二获得的乳白色粘稠状菌体细胞中，按照菌体：甘油体积比1:（0.6-1.2）的比例加入甘油，并搅拌混合均匀，再按照菌体：硅藻土体积比1：（0.8-1.5）的比例加入细度为300目硅藻土，搅拌混合均匀，获得白色固体制剂即目的产品。
步骤一中的人苍白杆菌（ochrobactrumanthropi）wnpa2于2014年11月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为cgmccno.9943。
步骤一中的液体发酵培养基a的配方如下：
葡萄糖15-20g/l，mgso4·7h2o0.5-0.7g/l，nh4no31.0-1.5g/l，(nh4)2so41.5-2.0g/l，nacl1.0-1.5g/l，k2hpo4·3h2o0.5-1.0g/l，mnso4·2h2o0.4-0.6mg/l，余量水定容至1l。
实施例1：
步骤一：发酵：
调节液体发酵培养基a的ph至6.0，并进行常规无菌处理，按液体质量9%无菌操作接入人苍白杆菌wnpa2，恒定温度29℃，搅拌速度180rpm，通风量0.27m3/min，罐压0.08mpa，持续发酵74hr，显微镜检测计数发酵液中细胞数达2.0×109个/ml时终止发酵；
液体发酵培养基a的配方如下：
葡萄糖18g/l，mgso4·7h2o0.5g/l，nh4no31.0g/l，(nh4)2so41.5g/l，nacl1.0g/l，k2hpo4·3h2o0.5g/l，mnso4·2h2o0.4mg/l，余量水定容至1l。
步骤二：菌体细胞分离：
收集步骤一液体发酵培养基a的人苍白杆菌wnpa2发酵液，酵母分离离心机离心分离除去发酵液中水份，获得乳白色粘稠状菌体细胞。
步骤三：制剂制取：
在步骤二获得的乳白色粘稠状菌体细胞中，按照菌体：甘油体积比1:0.8的比例加入甘油，并搅拌混合均匀，再按照菌体：硅藻土体积比1：1的比例加入细度为300目硅藻土，搅拌混合均匀，获得淡粉色固体制剂即目的产品。
实施例2：
步骤一：发酵：
调节液体发酵培养基a的ph至6.2，并进行常规无菌处理，按液体质量6%无菌操作接入人苍白杆菌wnpa2，恒定温度31℃，搅拌速度190rpm，通风量0.28m3/min，罐压0.08mpa，持续发酵76hr，显微镜检测计数发酵液中细胞数达1.8×109个/ml时终止发酵；
液体发酵培养基a的配方如下：
葡萄糖15g/l，mgso4·7h2o0.6g/l，nh4no31.5g/l，(nh4)2so42.0g/l，nacl1.0g/l，k2hpo4·3h2o0.8g/l，mnso4·2h2o0.5mg/l，余量水定容至1l。
步骤二：菌体细胞分离：
收集步骤一液体发酵培养基a的人苍白杆菌wnpa2发酵液，用酵母分离离心机离心分离除去发酵液中水份，获得乳白色粘稠状菌体细胞；
步骤三：制剂制取：
在步骤二获得的乳白色粘稠状菌体细胞中，按照菌体：甘油体积比1:1.2的比例加入甘油，并搅拌混合均匀，再按照菌体：硅藻土体积比1：0.8的比例加入细度为300目硅藻土，搅拌混合均匀，获得淡粉色固体制剂即目的产品。
实施例3：
步骤一：发酵：
调节液体发酵培养基a的ph至6.5，并进行常规无菌处理，按液体质量8%无菌操作接入人苍白杆菌wnpa2，恒定温度30℃，搅拌速度180rpm，通风量0.29m3/min，罐压0.2mpa，持续发酵72hr，显微镜检测计数发酵液中细胞数达1.5×109个/ml时终止发酵；
液体发酵培养基a的配方如下：
葡萄糖15g/l，mgso4·7h2o0.7g/l，nh4no31.5g/l，(nh4)2so42.0g/l，nacl1.5g/l，k2hpo4·3h2o1.0g/l，mnso4·2h2o0.6mg/l，余量水定容至1l。
步骤二：菌体细胞分离：
收集步骤一液体发酵培养基a的人苍白杆菌wnpa2发酵液，用酵母分离离心机离心分离除去发酵液中水份，获得乳白色粘稠状菌体细胞；
步骤三：制剂制取：
在步骤二获得的乳白色粘稠状菌体细胞中，按照菌体：甘油体积比1:1.1的比例加入甘油，并搅拌混合均匀，再按照菌体：硅藻土体积比1：0.9的比例加入细度为300目硅藻土，搅拌混合均匀，获得淡粉色固体制剂即目的产品。
采用上述方法制得的菌剂对多菌灵降解率可达到50%以上。
本发明的内容不限于实施例所列举，本领域普通技术人员通过阅读本发明说明书而对本发明技术方案采取的任何等效的变换，均为本发明的权利要求所涵盖。