本发明涉及荧光染料技术领域，具体是一种安全的荧光染料及其制备方法。
背景技术：
荧光染料是指吸收某一波长的光波后能发射出另一波长大于吸收光的光波的物质。它们大多是含有苯环或杂环并带有共轭双键的化合物。在吸收紫外线或可见光后，能把短波长的光转变为波长较长的可见光波而反射出来，呈闪亮的鲜艳色彩。例如，酸性曙红、荧光黄、红汞以及某些分散染料等。它们大多是含有苯环或杂环并带有共轭双键的化合物。荧光染料可以单独使用，也可以组合成复合荧光染料使用。其中复合荧光染料是利用荧光共振能量转移技术合成的荧光染料，由距离非常近、能量可以在彼此间传递的一个供体及一个受体荧光物分子所组成。复合染料在受体分子的激发波长被激发，在供体分子的发射波长发射一个光子。荧光染料发展非常迅速，已开发的用于科研和临床应用的荧光染料已基本覆盖了由紫外到可见光及红外的整个光谱范围。
荧光染料，由于灵敏度高，操作方便，逐渐取代了放射性同位素作为检测标记，其广泛应用于荧光免疫，荧光探针，细胞染色等。包括特异性的dna染色，用于染色体分析、细胞周期、细胞凋亡等相关研究。另有很多核酸染料在多色染色系统中是非常有用的复染剂，可作为背景对照，标记细胞核使细胞内结构的空间关系一目了然。现有技术中，检测体内巯基化合物的荧光探针使用的荧光染料效果差，而且副作用多，性能不稳定，不安全。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种安全的荧光染料及其制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种安全的荧光染料，按照重量份的原料包括：罗丹明b20-80份、无水乙醇40-180份、乙二醛3-25份、水杨醛5-35份、邻氨基苯酚3-25份、胱氨二盐酸盐3-35份、二碳酸二叔丁酯3-25份、甲醇20-100份、n，n-二环己基碳二亚胺3-25份、二甲氨基吡啶1-20份、二氯甲烷20-80份。
作为本发明进一步的方案：所述安全的荧光染料，按照重量份的原料包括：罗丹明b20-70份、无水乙醇45-170份、乙二醛4-22份、水杨醛8-32份、邻氨基苯酚4-22份、胱氨二盐酸盐4-32份、二碳酸二叔丁酯3-22份、甲醇25-90份、n，n-二环己基碳二亚胺4-22份、二甲氨基吡啶1-18份、二氯甲烷25-75份。
作为本发明进一步的方案：所述安全的荧光染料，按照重量份的原料包括：罗丹明b20-65份、无水乙醇50-150份、乙二醛5-20份、水杨醛10-30份、邻氨基苯酚5-20份、胱氨二盐酸盐5-30份、二碳酸二叔丁酯5-20份、甲醇30-80份、n，n-二环己基碳二亚胺5-20份、二甲氨基吡啶1-15份、二氯甲烷30-70份。
一种安全的荧光染料的制备方法，包括以下步骤：
1）将胱氨二盐酸盐、二碳酸二叔丁酯、甲醇混合搅拌均匀，制得混合物a；
2）将罗丹明b与乙二醛、水杨醛、无水乙醇混合搅拌4-10h，制得混合物b；
3）将混合物a与混合物b、邻氨基苯酚混合，加热至60-90℃下搅拌2-10h，冷却至室温，再加入n，n-二环己基碳二亚胺、二甲氨基吡啶、二氯甲烷混合搅拌0.3-5h，冷却析出固体、过滤、洗涤、干燥即得荧光染料。
作为本发明进一步的方案：步骤2）中，混合搅拌6-8h。
作为本发明进一步的方案：步骤3）中，将混合物a与混合物b、邻氨基苯酚混合，加热至70-85℃下搅拌4-8h。
作为本发明进一步的方案：步骤3）中，再加入n，n-二环己基碳二亚胺、二甲氨基吡啶、二氯甲烷混合搅拌0.5-2h。
作为本发明进一步的方案：步骤3）中，搅拌速度为60-300r/min。
作为本发明进一步的方案：步骤3）中，冷却析出固体、过滤、洗涤是冷却后将析出固体抽滤，依次用大量水和无水乙醇洗涤。
作为本发明进一步的方案：干燥后还进行以下步骤：以石油醚-乙酸乙酯作为洗脱剂采用层析柱分离取固体物；其中，石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝5:1。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明采用上述原料及制备方法制得的荧光染料，用于检测体内巯基化合物时，具有检测效果好、副作用少、性能稳定、安全等特点。本发明制备工艺简单、操作简便，成本低，产率高（产率在88%以上，较优的是实施例3-6，产率在91%以上，最优的是实施例5-6，产率在94%以上），安全环保，适于工业化生产。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本发明实施例中，一种安全的荧光染料，按照重量份的原料包括：罗丹明b20份、无水乙醇40份、乙二醛3份、水杨醛5份、邻氨基苯酚3份、胱氨二盐酸盐3份、二碳酸二叔丁酯3份、甲醇20份、n，n-二环己基碳二亚胺3份、二甲氨基吡啶1份、二氯甲烷20份。
上述安全的荧光染料的制备方法，包括以下步骤：
1）将胱氨二盐酸盐、二碳酸二叔丁酯、甲醇混合搅拌均匀，制得混合物a；
2）将罗丹明b与乙二醛、水杨醛、无水乙醇混合搅拌4h，制得混合物b；
3）将混合物a与混合物b、邻氨基苯酚混合，加热至60℃下搅拌2h，冷却至室温，再加入n，n-二环己基碳二亚胺、二甲氨基吡啶、二氯甲烷混合、以60r/min的搅拌速度搅拌0.3h，冷却析出固体、过滤、洗涤是冷却后将析出固体抽滤，依次用大量水和无水乙醇洗涤，干燥即得荧光染料。
实施例2
本发明实施例中，一种安全的荧光染料，按照重量份的原料包括：罗丹明b80份、无水乙醇180份、乙二醛25份、水杨醛35份、邻氨基苯酚25份、胱氨二盐酸盐35份、二碳酸二叔丁酯25份、甲醇100份、n，n-二环己基碳二亚胺25份、二甲氨基吡啶20份、二氯甲烷80份。
上述安全的荧光染料的制备方法，包括以下步骤：
1）将胱氨二盐酸盐、二碳酸二叔丁酯、甲醇混合搅拌均匀，制得混合物a；
2）将罗丹明b与乙二醛、水杨醛、无水乙醇混合搅拌10h，制得混合物b；
3）将混合物a与混合物b、邻氨基苯酚混合，加热至90℃下搅拌10h，冷却至室温，再加入n，n-二环己基碳二亚胺、二甲氨基吡啶、二氯甲烷混合、以300r/min的搅拌速度搅拌5h，冷却析出固体、过滤、洗涤是冷却后将析出固体抽滤，依次用大量水和无水乙醇洗涤，干燥即得荧光染料。
实施例3
本发明实施例中，一种安全的荧光染料，按照重量份的原料包括：罗丹明b20份、无水乙醇45份、乙二醛4份、水杨醛8份、邻氨基苯酚4份、胱氨二盐酸盐4份、二碳酸二叔丁酯3份、甲醇25份、n，n-二环己基碳二亚胺4份、二甲氨基吡啶1份、二氯甲烷25份。
上述安全的荧光染料的制备方法，包括以下步骤：
1）将胱氨二盐酸盐、二碳酸二叔丁酯、甲醇混合搅拌均匀，制得混合物a；
2）将罗丹明b与乙二醛、水杨醛、无水乙醇混合搅拌6h，制得混合物b；
3）将混合物a与混合物b、邻氨基苯酚混合，加热至70℃下搅拌4h，冷却至室温，再加入n，n-二环己基碳二亚胺、二甲氨基吡啶、二氯甲烷混合、以100r/min的搅拌速度搅拌0.5h，冷却析出固体、过滤、洗涤是冷却后将析出固体抽滤，依次用大量水和无水乙醇洗涤，干燥，以石油醚-乙酸乙酯作为洗脱剂采用层析柱分离取固体物，即得荧光染料；其中，石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝5:1。
实施例4
本发明实施例中，一种安全的荧光染料，按照重量份的原料包括：罗丹明b70份、无水乙醇170份、乙二醛22份、水杨醛32份、邻氨基苯酚22份、胱氨二盐酸盐32份、二碳酸二叔丁酯22份、甲醇90份、n，n-二环己基碳二亚胺22份、二甲氨基吡啶18份、二氯甲烷75份。
上述安全的荧光染料的制备方法，包括以下步骤：
1）将胱氨二盐酸盐、二碳酸二叔丁酯、甲醇混合搅拌均匀，制得混合物a；
2）将罗丹明b与乙二醛、水杨醛、无水乙醇混合搅拌8h，制得混合物b；
3）将混合物a与混合物b、邻氨基苯酚混合，加热至85℃下搅拌8h，冷却至室温，再加入n，n-二环己基碳二亚胺、二甲氨基吡啶、二氯甲烷混合、以200r/min的搅拌速度搅拌2h，冷却析出固体、过滤、洗涤是冷却后将析出固体抽滤，依次用大量水和无水乙醇洗涤，干燥，以石油醚-乙酸乙酯作为洗脱剂采用层析柱分离取固体物，即得荧光染料；其中，石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝5:1。
实施例5
本发明实施例中，一种安全的荧光染料，按照重量份的原料包括：罗丹明b20份、无水乙醇50份、乙二醛5份、水杨醛10份、邻氨基苯酚5份、胱氨二盐酸盐5份、二碳酸二叔丁酯5份、甲醇30份、n，n-二环己基碳二亚胺5份、二甲氨基吡啶1份、二氯甲烷30份。
上述安全的荧光染料的制备方法，包括以下步骤：
1）将胱氨二盐酸盐、二碳酸二叔丁酯、甲醇混合搅拌均匀，制得混合物a；
2）将罗丹明b与乙二醛、水杨醛、无水乙醇混合搅拌7h，制得混合物b；
3）将混合物a与混合物b、邻氨基苯酚混合，加热至75℃下搅拌5h，冷却至室温，再加入n，n-二环己基碳二亚胺、二甲氨基吡啶、二氯甲烷混合、以150r/min的搅拌速度搅拌1h，冷却析出固体、过滤、洗涤是冷却后将析出固体抽滤，依次用大量水和无水乙醇洗涤，干燥，以石油醚-乙酸乙酯作为洗脱剂采用层析柱分离取固体物，即得荧光染料；其中，石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝5:1。
实施例6
本发明实施例中，一种安全的荧光染料，按照重量份的原料包括：罗丹明b65份、无水乙醇150份、乙二醛20份、水杨醛30份、邻氨基苯酚20份、胱氨二盐酸盐30份、二碳酸二叔丁酯20份、甲醇80份、n，n-二环己基碳二亚胺20份、二甲氨基吡啶15份、二氯甲烷70份。
上述安全的荧光染料的制备方法，包括以下步骤：
1）将胱氨二盐酸盐、二碳酸二叔丁酯、甲醇混合搅拌均匀，制得混合物a；
2）将罗丹明b与乙二醛、水杨醛、无水乙醇混合搅拌7h，制得混合物b；
3）将混合物a与混合物b、邻氨基苯酚混合，加热至80℃下搅拌7h，冷却至室温，再加入n，n-二环己基碳二亚胺、二甲氨基吡啶、二氯甲烷混合、以250r/min的搅拌速度搅拌1.5h，冷却析出固体、过滤、洗涤是冷却后将析出固体抽滤，依次用大量水和无水乙醇洗涤，干燥，以石油醚-乙酸乙酯作为洗脱剂采用层析柱分离取固体物，即得荧光染料；其中，石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝5:1。
本发明利用上述实施例1-6制得的荧光染料能够制得利用荧光共振能量转移原理来检测体内巯基化合物的荧光探针，而且试验结果显示本发明荧光染料检测效果好、副作用少。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。