专利名称：一种参附注射制剂的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种中药注射制剂的质量控制方法，特别是涉及一种参附注射制剂的质量控制方法。
背景技术：
参附汤是古代的验方，更是中医急症治疗中的经典配方。在现有技术中已经将传统的汤剂改进制成了参附注射液，参附注射液因其在治疗缺血性休克、心脑血管疾病当中疗效确切、起效迅速而成为急症科必备药物。进一步开发质量稳定、可控、有效成分含量更高的参附注射制剂不仅是医疗实践的需要，也是中药药学发展的需要。
发明内容
本发明目的在于提供一种参附注射制剂的质量控制方法本发明目的是通过如下技术方案实现的本发明质量控制方法包括下述鉴别和/或含量测定，其中含量测定包括下述人参皂苷Re和/或乌头类生物碱的含量测定。
乌头碱鉴别取制备好的参附注射制剂5ml，用氨试液调PH至8-11；用氯仿提取2-3次，每次用氯仿10-20ml，挥干氯仿；用甲醇溶解成1ml为供试品溶液；另称取对照品乌头碱，用甲醇溶解成2mg/ml的溶液为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl和对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G板上，以11-13∶6-8∶1-3的正己烷-醋酸乙酯-95％乙醇为展开剂，用氨试液饱和8-15分钟，展开10-14cm，取出，晾干，喷以碘化铋钾溶液，稍后，再喷以5％亚硝酸钠乙醇液；供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上出现的斑点应小于对照品或者不出现斑点；含量测定人参总皂苷，对照品溶液的制备，精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；标准曲线的制备，精密量取对照品溶液0.08-0.1，0.1-0.3，0.3-0.5，0.5-0.7，0.7-0.9，0.9-1.1ml，分置8-12ml量瓶中，挥干溶剂，放冷，精密加入1-3∶6-9的5％香草醛冰醋酸溶液—高氯酸的混合溶液2.0ml，摇匀，置50-70℃水浴中加热10-20分钟，取出，置冰水浴中冷却，加冰醋酸至刻度，摇匀，以相应试剂同法操作为空白，照分光光度法，立即在545nm波长处测定吸收度；以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法，取装量差异项下的制备好的参附注射制剂内容物0.1g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇振摇使溶解，并加甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液0.4ml，置10ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“挥干溶剂”起，依法测定，计算，即得；被检测参附注射剂每ml含人参总皂苷以人参皂苷Re(C48H82O18)计，不得少于2.4mg；乌头类生物碱，对照品溶液的制备，精密称取乌头碱对照品适量，加0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml含0.15mg的溶液，即得；标准曲线的制备，精密量取对照品溶液0.1-0.2、0.2-0.4、0.4-0.8、0.8-1.2、1.2-1.6、1.6-2.0ml，分别置分液漏斗中，各依次加入0.01mol/L盐酸溶液1.6-1.8、1.2-1.6、0.8-1.2、0.4-0.8、0.2-0.4、0.1-0.2ml，各精密加醋酸-醋酸钠缓冲液8-12ml，溴甲酚绿液1-3ml，氯仿8-12ml，振摇2-4分钟，静置，分取氯仿液，用氯仿浸泡处理过的脱脂棉滤过，取续滤液，以0.01mol/L盐酸溶液1-3.0ml同法操作为空白，照分光光度法，在416nm波长处测定吸收度；以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法，取装量差异项下的制备好的参附注射剂内容物0.15g，精密称定，加氯化钠饱和溶液15ml溶解，用氨试液调节pH值10～11，用氯仿提取3-5次，每次15ml，合并氯仿提取液，蒸干，残渣加0.01mol/L盐酸溶液溶解并转入25ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置分液漏斗中，以0.01mol/L盐酸溶液2.0ml同法操作为空白，照标准曲线制备项下的方法，自“各精密加醋酸-醋酸钠缓冲液10ml”起，依法测定，计算，即得；制备好的参附注射制剂每ml含乌头类生物碱以乌头碱(C24H47NO11)计，应为0.3～0.6mg。
本发明参附注射制剂的质量控制方法中所述的醋酸-醋酸钠缓冲液的制备取0.1-0.3mol/L醋酸溶液，用0.1-0.3mol/L醋酸钠溶液调pH值至2-4；本发明参附注射制剂的质量控制方法中所述的溴甲酚绿液的制备取溴甲酚绿，加0.03-0.06mol/L氢氧化钠液研磨使溶解，加水至溴甲酚绿50mg/100ml，用氯仿提取2-4次，每次20-40ml，弃去氯仿液，即得。
本发明质量控制方法中乌头碱的限量以标准品作为对照，直接比较斑点的大小，使操作更为简便、直观；对人参、附子均作含量测定，使质量更加稳定，检测更为科学；原参附注射液在测定人参含量其对照品为Rb1，现参附注射剂在测定人参含量时其对照品为Re。
符合本发明质量标准的参附注射制剂具有如下药效一、强心作用1.对离体蛙心的影响注射用参附(冻干)各剂量组(2.5、5.0、10.0、15.0、20.0mg)对蛙心心率无显著性影响；2.5、5.0mg能显著地促进心肌收缩力(P＜0.05～0.01)。
2.对家兔在体心脏的影响注射用参附(冻干)各剂量组(n＝4，0.5、1.0、2.0g/kg)，结果，2.0g/kg能显著增加心肌收缩力，振幅幅度明显加大(P＜0.05～0.01)，并能显著性的对抗乌头碱所致心肌衰竭(P＜0.01)。
二、对失血性休克动物的治疗作用1.对失血性休克大鼠的影响在给药10min内，注射用参附(冻干)各剂量组对大鼠血压的影响与对照组一致，未见明显影响，20min后，注射用参附(冻干)大、中剂量组表现出显著的升压作用，表明升压作用比较缓和，小剂量也有一定的升压作用，但无显著性；中剂量在60min时能显著性拮抗心率的降低，其余剂量组无显著性差异，表明对心率的复苏并无明显影响。
2.对失血性休克猫血压的影响注射用参附(冻干)(0.25、0.5、1.0、2.0g/kg)输入后有轻微的降压作用，再注入0.5g/kg、1.0g/kg或2.0g/kg时均出现不同的升压作用，可明显升高收缩压(1.0g/kg)、平均压(0.5g/kg和1.0g/kg)、舒张压(0.5g/kg和2.0g/kg)，具有较明显的抗休克作用。
三、对创伤性休克小鼠生存率的影响结果表明，注射用参附(冻干)(n＝20，1.25、2.5、5.0g/kg)对肢体缺血再灌注损伤引起的创伤性休克小鼠具有显著性的防治作用(P＜0.05～0.01)。
四、抗心率失常作用1.对氯仿所致小鼠心律失常的影响注射用参附(冻干)(n＝20，1.25、2.5、5.0g/kg)，对氯仿诱发小鼠心律失常有非常显著性的对抗作用(P＜0.05～0.001)。
2.对乌头碱所致大鼠心律失常的影响注射用参附(冻干)(n＝10，0.25、0.5、1.0g/kg)，大、中剂量能显著性的推迟乌头碱所致大鼠心律失常的出现时间(min)(P＜0.05～0.01)。
3.对哇巴因所致豚鼠心律失常的影响注射用参附(冻干)(0.5、1.0、2.0g/kg)，对哇巴因所致豚鼠心律失常有不同程度的对抗作用，大、中、小剂量使VP(室早)、VT(室速)出现的时间推迟，与对照组比较无显著性差异(P＞0.05)；大、中剂量对VF(室颤)、CA(心肌停搏)出现时间显著推迟(P＜0.05～0.01)。
五、对动物耐缺氧和急性心肌缺血的影响1.对小鼠常压耐缺氧的影响注射用参附(冻干)(1.25、2.5、5.0g/kg)能明显提高小鼠耐缺氧的能力，使生存时间显著延长(P＜0.05～0.01)。
2.对异丙肾上腺素负荷小鼠耐缺氧生存时间的影响注射用参附(冻干)(n＝12，1.25、2.5、5.0g/kg)各剂量组均显著性延长小鼠生存时间(P＜0.05～0.01)。
3.对大鼠心肌缺血的影响结果表明，注射用参附(冻干)(0.5、1.0、2.0g/kg)对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血有一定改善作用。
实施例乌头碱限量取制备好的参附注射制剂5ml，用氨试液调PH至10左右；用氯仿提取3次，用氯仿20、20、10ml，挥干氯仿；用甲醇溶解成1ml为供试品溶溶液；另称取对照品乌头碱，用甲醇溶解成2mg/ml的溶液为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl和对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G板上，以12.8∶7.2∶2的正己烷-醋酸乙酯-95％乙醇为展开剂，用氨试液饱和10分钟，展开12cm，取出，晾干，喷以碘化铋钾溶液，稍后，再喷以5％亚硝酸钠乙醇液；供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上出现的斑点应小于对照品或者不出现斑点。
含量测定人参总皂苷，对照品溶液的制备，精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；标准曲线的制备，精密量取对照品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分置10ml量瓶中，挥干溶剂，放冷，精密加入2∶8的5％香草醛冰醋酸溶液-高氯酸的混合溶液2.0ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取出，置冰水浴中冷却，加冰醋酸至刻度，摇匀，以相应试剂同法操作为空白，照分光光度法，立即在545nm波长处测定吸收度；以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法，取装量差异项下的制备好的参附注射制剂内容物0.1g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇振摇使溶解，并加甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液0.4ml，置10ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“挥干溶剂”起，依法测定，计算，即得；被检测参附注射剂每ml含人参总皂苷以人参皂苷Re(C48H82O18)计，不得少于2.4mg；乌头类生物碱，对照品溶液的制备精密称取乌头碱对照品适量，加0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml含0.15mg的溶液，即得；标准曲线的制备，精密量取对照品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分别置分液漏斗中，各依次加入0.01mol/L盐酸溶液1.8、1.6、1.2、0.8、0.4、0.2ml，各精密加醋酸-醋酸钠缓冲液10ml，溴甲酚绿液2ml，氯仿10ml，振摇3分钟，静置，分取氯仿液，用氯仿浸泡处理过的脱脂棉滤过，取续滤液，以0.01mol/L盐酸溶液2.0ml同法操作为空白，照分光光度法，在416nm波长处测定吸收度；以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法，取装量差异项下的制备好的参附注射制剂内容物0.15g，精密称定，加氯化钠饱和溶液15ml溶解，用氨试液调节pH值10～11，用氯仿提取4次，每次15ml，合并氯仿提取液，蒸干，残渣加0.01mol/L盐酸溶液溶解并转入25ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置分液漏斗中，以0.01mol/L盐酸溶液2.0ml同法操作为空白，照标准曲线制备项下的方法，自“各精密加醋酸-醋酸钠缓冲液10ml”起，依法测定，计算，即得；制备好的参附注射剂每ml含乌头类生物碱以乌头碱(C24H47NO11)计，应为0.3～0.6mg。
本方法中所述的醋酸-醋酸钠缓冲液的制备取0.2mol/L醋酸溶液，用0.2mol/L醋酸钠溶液调pH值至3.1；本方法中所述的溴甲酚绿液的制备取溴甲酚绿50mg，加0.05mol/L氢氧化钠液1.6ml研磨使溶解，加水至100ml，用氯仿提取3次，每次30ml，弃去氯仿液，即得。
权利要求
1.一种参附注射制剂的质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法为取制备好的参附注射制剂5ml，用氨试液调PH至8-11；用氯仿提取2-3次，每次用氯仿10-20ml，挥干氯仿；用甲醇溶解成1ml为供试品溶液；另称取对照品乌头碱，用甲醇溶解成2mg/ml的溶液为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl和对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G板上，以11-13∶6-8∶1-3的正己烷-醋酸乙酯-95％乙醇为展开剂，用氨试液饱和8-15分钟，展开10-14cm，取出，晾干，喷以碘化铋钾溶液，稍后，再喷以5％亚硝酸钠乙醇液；供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上出现的斑点应小于对照品或者不出现斑点。
2.如权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法为取制备好的参附注射制剂5ml，用氨试液调PH至10左右；用氯仿提取3次，用氯仿20、20、10ml，挥干氯仿；用甲醇溶解成1ml为供试品溶溶液；另称取对照品乌头碱，用甲醇溶解成2mg/ml的溶液为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl和对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G板上，以12.8∶7.2∶2的正己烷-醋酸乙酯-95％乙醇为展开剂，用氨试液饱和10分钟，展开12cm，取出，晾干，喷以碘化铋钾溶液，稍后，再喷以5％亚硝酸钠乙醇液；供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上出现的斑点应小于对照品或者不出现斑点。
3.一种参附注射制剂的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定方法选自如下方法中的一种或几种人参总皂苷，对照品溶液的制备，精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；标准曲线的制备，精密量取对照品溶液0.08-0.1，0.1-0.3，0.3-0.5，0.5-0.7，0.7-0.9，0.9-1.1ml，分置8-12ml量瓶中，挥干溶剂，放冷，精密加入1-3∶6-9的5％香草醛冰醋酸溶液—高氯酸的混合溶液2.0ml，摇匀，置50-70℃水浴中加热10-20分钟，取出，置冰水浴中冷却，加冰醋酸至刻度，摇匀，以相应试剂同法操作为空白，照分光光度法，立即在545nm波长处测定吸收度；以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法，取装量差异项下的制备好的参附注射制剂内容物0.1g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇振摇使溶解，并加甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液0.4ml，置10ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“挥干溶剂”起，依法测定，计算，即得；被检测参附注射剂每ml含人参总皂苷以人参皂苷Re计，不得少于2.4mg；乌头类生物碱，对照品溶液的制备，精密称取乌头碱对照品适量，加0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml含0.15mg的溶液，即得；标准曲线的制备，精密量取对照品溶液0.1-0.2、0.2-0.4、0.4-0.8、0.8-1.2、1.2-1.6、1.6-2.0ml，分别置分液漏斗中，各依次加入0.01mol/L盐酸溶液1.6-1.8、1.2-1.6、0.8-1.2、0.4-0.8、0.2-0.4、0.1-0.2ml，各精密加醋酸-醋酸钠缓冲液8-12ml，溴甲酚绿液1-3ml，氯仿8-12ml，振摇2-4分钟，静置，分取氯仿液，用氯仿浸泡处理过的脱脂棉滤过，取续滤液，以0.01mol/L盐酸溶液1-3.0ml同法操作为空白，照分光光度法，在416nm波长处测定吸收度；以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法，取装量差异项下的制备好的参附注射剂内容物0.15g，精密称定，加氯化钠饱和溶液15ml溶解，用氨试液调节pH值10～11，用氯仿提取3-5次，每次15ml，合并氯仿提取液，蒸干，残渣加0.01mol/L盐酸溶液溶解并转入25ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置分液漏斗中，以0.01mol/L盐酸溶液2.0ml同法操作为空白，照标准曲线制备项下的方法，自“各精密加醋酸-醋酸钠缓冲液10ml”起，依法测定，计算，即得；制备好的参附注射制剂每ml含乌头类生物碱以乌头碱计，应为0.3～0.6mg。
4.如权利要求3所述的的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定方法选自如下方法中的一种或几种人参总皂苷，对照品溶液的制备，精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；标准曲线的制备，精密量取对照品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分置10ml量瓶中，挥干溶剂，放冷，精密加入2∶8的5％香草醛冰醋酸溶液-高氯酸的混合溶液2.0ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取出，置冰水浴中冷却，加冰醋酸至刻度，摇匀，以相应试剂同法操作为空白，照分光光度法，立即在545nm波长处测定吸收度；以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法，取装量差异项下的制备好的参附注射制剂内容物0.1g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇振摇使溶解，并加甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液0.4ml，置10ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“挥干溶剂”起，依法测定，计算，即得；被检测参附注射剂每ml含人参总皂苷以人参皂苷Re计，不得少于2.4mg；乌头类生物碱，对照品溶液的制备精密称取乌头碱对照品适量，加0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml含0.15mg的溶液，即得；标准曲线的制备，精密量取对照品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分别置分液漏斗中，各依次加入0.01mol/L盐酸溶液1.8、1.6、1.2、0.8、0.4、0.2ml，各精密加醋酸-醋酸钠缓冲液10ml，溴甲酚绿液2ml，氯仿10ml，振摇3分钟，静置，分取氯仿液，用氯仿浸泡处理过的脱脂棉滤过，取续滤液，以0.01mol/L盐酸溶液2.0ml同法操作为空白，照分光光度法，在416nm波长处测定吸收度；以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法，取装量差异项下的制备好的参附注射制剂内容物0.15g，精密称定，加氯化钠饱和溶液15ml溶解，用氨试液调节pH值10～11，用氯仿提取4次，每次15ml，合并氯仿提取液，蒸干，残渣加0.01mol/L盐酸溶液溶解并转入25ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置分液漏斗中，以0.01mol/L盐酸溶液2.0ml同法操作为空白，照标准曲线制备项下的方法，自“各精密加醋酸-醋酸钠缓冲液10ml”起，依法测定，计算，即得；制备好的参附注射剂每ml含乌头类生物碱以乌头碱计，应为0.3～0.6mg。
5.一种参附注射制剂的质量控制方法，其特征在于该方法包括下述鉴别和含量测定取制备好的参附注射制剂5ml，用氨试液调PH至8-11；用氯仿提取2-3次，每次用氯仿10-20ml，挥干氯仿；用甲醇溶解成1ml为供试品溶液；另称取对照品乌头碱，用甲醇溶解成2mg/ml的溶液为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl和对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G板上，以11-13∶6-8∶1-3的正己烷-醋酸乙酯-95％乙醇为展开剂，用氨试液饱和8-15分钟，展开10-14cm，取出，晾干，喷以碘化铋钾溶液，稍后，再喷以5％亚硝酸钠乙醇液；供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上出现的斑点应小于对照品或者不出现斑点；人参总皂苷，对照品溶液的制备，精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；标准曲线的制备，精密量取对照品溶液0.08-0.1，0.1-0.3，0.3-0.5，0.5-0.7，0.7-0.9，0.9-1.1ml，分置8-12ml量瓶中，挥干溶剂，放冷，精密加入1-3∶6-9的5％香草醛冰醋酸溶液—高氯酸的混合溶液2.0ml，摇匀，置50-70℃水浴中加热10-20分钟，取出，置冰水浴中冷却，加冰醋酸至刻度，摇匀，以相应试剂同法操作为空白，照分光光度法，立即在545nm波长处测定吸收度；以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法，取装量差异项下的制备好的参附注射制剂内容物0.1g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇振摇使溶解，并加甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液0.4ml，置10ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“挥干溶剂”起，依法测定，计算，即得；被检测参附注射剂每ml含人参总皂苷以人参皂苷Re计，不得少于2.4mg；乌头类生物碱，对照品溶液的制备，精密称取乌头碱对照品适量，加0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml含0.15mg的溶液，即得；标准曲线的制备，精密量取对照品溶液0.1-0.2、0.2-0.4、0.4-0.8、0.8-1.2、1.2-1.6、1.6-2.0ml，分别置分液漏斗中，各依次加入0.01mol/L盐酸溶液1.6-1.8、1.2-1.6、0.8-1.2、0.4-0.8、0.2-0.4、0.1-0.2ml，各精密加醋酸-醋酸钠缓冲液8-12ml，溴甲酚绿液1-3ml，氯仿8-12ml，振摇2-4分钟，静置，分取氯仿液，用氯仿浸泡处理过的脱脂棉滤过，取续滤液，以0.01mol/L盐酸溶液1-3.0ml同法操作为空白，照分光光度法，在416nm波长处测定吸收度；以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法，取装量差异项下的制备好的参附注射剂内容物0.15g，精密称定，加氯化钠饱和溶液15ml溶解，用氨试液调节pH值10～11，用氯仿提取3-5次，每次15ml，合并氯仿提取液，蒸干，残渣加0.01mol/L盐酸溶液溶解并转入25ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置分液漏斗中，以0.01mol/L盐酸溶液2.0ml同法操作为空白，照标准曲线制备项下的方法，自“各精密加醋酸-醋酸钠缓冲液10ml”起，依法测定，计算，即得；制备好的参附注射制剂每ml含乌头类生物碱以乌头碱计，应为0.3～0.6mg。
6.如权利要求5所述的质量控制方法，其特征在于该方法包括下述鉴别和含量测定乌头碱限量取制备好的参附注射制剂5ml，用氨试液调PH至10左右；用氯仿提取3次，用氯仿20、20、10ml，挥干氯仿；用甲醇溶解成1ml为供试品溶溶液；另称取对照品乌头碱，用甲醇溶解成2mg/ml的溶液为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl和对照品溶液5μ1，分别点于同一硅胶G板上，以12.8∶7.2∶2的正己烷-醋酸乙酯-95％乙醇为展开剂，用氨试液饱和10分钟，展开12cm，取出，晾干，喷以碘化铋钾溶液，稍后，再喷以5％亚硝酸钠乙醇液；供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上出现的斑点应小于对照品或者不出现斑点；含量测定人参总皂苷，对照品溶液的制备，精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；标准曲线的制备，精密量取对照品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分置10ml量瓶中，挥干溶剂，放冷，精密加入2∶8的5％香草醛冰醋酸溶液-高氯酸的混合溶液2.0ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取出，置冰水浴中冷却，加冰醋酸至刻度，摇匀，以相应试剂同法操作为空白，照分光光度法，立即在545nm波长处测定吸收度；以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法，取装量差异项下的制备好的参附注射制剂内容物0.1g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇振摇使溶解，并加甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液0.4ml，置10ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“挥干溶剂”起，依法测定，计算，即得；被检测参附注射剂每ml含人参总皂苷以人参皂苷Re计，不得少于2.4mg；乌头类生物碱，对照品溶液的制备 精密称取乌头碱对照品适量，加0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml含0.15mg的溶液，即得；标准曲线的制备，精密量取对照品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分别置分液漏斗中，各依次加入0.01mol/L盐酸溶液1.8、1.6、1.2、0.8、0.4、0.2ml，各精密加醋酸-醋酸钠缓冲液10ml，溴甲酚绿液2ml，氯仿10ml，振摇3分钟，静置，分取氯仿液，用氯仿浸泡处理过的脱脂棉滤过，取续滤液，以0.01mol/L盐酸溶液2.0ml同法操作为空白，照分光光度法，在416nm波长处测定吸收度；以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法，取装量差异项下的制备好的参附注射制剂内容物0.15g，精密称定，加氯化钠饱和溶液15ml溶解，用氨试液调节pH值10～11，用氯仿提取4次，每次15ml，合并氯仿提取液，蒸干，残渣加0.01mol/L盐酸溶液溶解并转入25ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置分液漏斗中，以0.01mol/L盐酸溶液2.0ml同法操作为空白，照标准曲线制备项下的方法，自“各精密加醋酸-醋酸钠缓冲液10ml”起，依法测定，计算，即得；制备好的参附注射剂每ml含乌头类生物碱以乌头碱计，应为0.3～0.6mg。
7.如权利要求3、4、5或6所述的质量控制方法，其特征在于该方法中的醋酸-醋酸钠缓冲液是取0.1-0.3mol/L醋酸溶液，用0.1-0.3mol/L醋酸钠溶液调pH值至2-4制成的；溴甲酚绿液是取溴甲酚绿，加0.03-0.06mol/L氢氧化钠液研磨使溶解，加水至溴甲酚绿50mg/100ml，用氯仿提取2-4次，每次20-40ml，弃去氯仿液制成的。
8.如权利要求7所述的质量控制方法，其特征在于该方法中的醋酸-醋酸钠缓冲液是取0.2mol/L醋酸溶液，用0.2mol/L醋酸钠溶液调pH值至3.1制成的；溴甲酚绿液是取溴甲酚绿50mg，加0.05mol/L氢氧化钠液1.6ml研磨使溶解，加水至100ml，用氯仿提取3次，每次30ml，弃去氯仿液制成的。
全文摘要
本发明公开了一种参附注射制剂的质量控制方法，该质量控制方法包括鉴别和/或含量测定，其中鉴别指乌头类碱的鉴别，含量测定包括人参皂苷Re和/或乌头类生物碱的含量测定。本发明质量控制方法中乌头碱的限量以标准品作为对照，直接比较斑点的大小，使操作更为简便、直观；对人参、附子均作含量测定，使质量更加稳定，检测更为科学。
文档编号G01N33/15GK1501079SQ02149369
公开日2004年6月2日 申请日期2002年11月13日 优先权日2002年11月13日
发明者曾晓春 申请人:雅安三九药业有限公司