专利名称：一种中药有效成分的检测方法
技术领域：
本发明属于中药有效成分的检测方法，具体为利用活性细胞与中药中有效成分的相互作用检测出中药有效成分的方法。
背景技术：
传统的中药活性成分的研究，通常是采用植物化学的方法提取其中的有效部位化合物群或单体化合物，再经药理实验进行确定。中药成分复杂，一味中药就含有几十甚至数百个化合物，而一个由多种中药组成的复方，其中化学成分就更多了，再经过煎煮过程后，其中化学成分又可能产生化合或分解等新的变化。在众多的化学成分中，而有效成分往往含量低微，因此其分离分析操作烦琐，工作量大，周期长，成功率低，并且不能完全阐明中药多成分，多靶点的作用特点。
生物色谱是用于考察药物对细胞膜、受体、酶等结合情况的一种较新的方法，该方法是以硅胶或凝胶为载体，其上涂敷或键合上活性细胞膜或受体、酶等制备而成色谱固定相，根据药物与细胞膜或受体、酶的相互作用的强弱不同而将不同的药物分离开来。该方法亦可用于从中药中筛选与生物膜或受体、酶等有相互作用的化学成分，但其在实际使用中存在诸多缺憾。例如1、细胞膜、受体、酶与硅胶等载体结合后其生物学特征会受到一定的影响。2.细胞膜、受体、蛋白等是从细胞上分离出来的，生物学特征可能受到一定的影响。3、该方法对色谱流动相有着严格的限制，即只能以生理缓冲液或极低浓度的有机溶剂作为流动相，否则会破坏生物膜，这样使色谱利用不同流动相而实现不同性质的化合物的分离的特点难以发挥，化合物在生物色谱上难以实现彼此的相互分离。4，生物色谱的制备程序因为增加了硅胶介质与细胞膜、受体、酶等的结合过程，过程复杂，条件严格，成本较高，如市售的蛋白柱高达上万元一个。参见汪海林等，分子生物膜色谱用于中药活性成分筛选及质量控制方法的研究，色谱，1999，17(2)123-124；赵惠如等，用细胞膜色谱筛选当归中的有效成分，中国药学杂志，2000；35(1)13-15；孔亮等，以人血清白蛋白为固定相的分子生物色谱分析几种中药活性成分的研究，高等学校化学学报，2000，21(1)36。贺浪冲等固定在硅胶表面细胞膜的酶活性及其色谱特性科学通报，1999(6)633-637。赵小娟等，淫羊藿根与叶活性成分的分析和比较，分析化学，2002 30(2)195-197。高琨等用细胞膜色谱法筛选研究红毛七中的有效成分中国药学杂志，2003(1)14-16。
上述所有文章提供的图谱对药物的分离效果都不好，所有的流动相是用缓冲液，不能与LC-MS联用，硅胶介质价格较高。在毛希琴等，三种色谱模式联用在中药活性成分初步筛选中的应用，分析化学2003，31(8)992-995.的文献中，有川芎在模拟生物膜色谱柱、蛋白色谱柱和反相柱上的分离图谱，显而易见生物膜色谱的分离效能不理想，不如反相色谱柱。
发明人曾研究利用生物膜与中药中有效成分的相互作用检测出中药有效成分。药物进入人体后发挥作用，主要是药物分子与细胞上的靶点即生物大分子包括酶、受体、通道等特异性的结合，进而影响细胞内第二信使分子产生生物效应，最终发挥药理作用。所以，细胞是绝大部分药物产生作用的靶标。
发明内容
本发明的要解决的问题在于研究一种快捷，准确，体现中药多成分协同作用的检测中药中与活性细胞有相互作用的化学成分的方法，尽可能地避免因细胞的生物学特征受到影响而影响到有效成分的筛选的准确性，提高有效成分的分离效果，并且在筛选有效成分的同时获得其结构信息，以便快速的从中药中寻找可能具有活性的先导化合物或化合物群。同时该方法相对简单、成本较低，并可以作为中药质量控制的补充手段。
为解决上述问题，本发明提供如下技术方案。
一种中药有效成分检测方法，包括如下步骤取待测中药，用溶剂提取，得中药提取液备用；将中药提取液与活性细胞混合，培养后，取上清液；用高效色谱法检测中药提取液的上清液。
所述检测方法中，待测中药是单味中药或中药复方；提取中药的溶剂可以是水和/或有机溶剂；对含有机溶剂提取液，浓缩去除全部有机溶剂后，用缓冲液或低于3％的增溶剂溶解，制成中药提取液备用。具体提取中药的溶剂可选自水、C1-C5的低级醇、乙酸乙酯、乙醚、氯仿、石油醚，或它们的混合物；C1-C5的低级醇是甲醇，乙醇、正丁醇；提取中药的溶剂是中性、酸性或碱性；选用无机酸、无机碱、有机酸或有机碱中和酸性或碱性的中药提取液。按中药提取液的体积加入0.1-3％体积的增溶剂，增溶剂选自吐温、二甲基亚砜、聚乙二醇、曲拉通或它们的混合物。
本发明的检测方法中中药提取液是用水和/或乙醇提取制备的中药提取液；缓冲液是pH7.0-7.4的磷酸盐或醋酸盐缓冲液。
前述检测方法特征在于活性细胞为来自人体或动物组织细胞的细胞，活性细胞是内皮细胞、心肌细胞、平滑肌细胞、肿瘤细胞；细胞培养所需要的细胞量为106以上；将中药提取液与活性细胞在模拟生理条件下的缓冲液或细胞培养液中培养，培养用的模拟生理条件的缓冲液是pH7.0-7.4的磷酸盐或醋酸盐缓冲液或含1-20％小牛血清的细胞培养液；培养后，取上清液，同时将不含细胞的中药提取液作为空白对照，分别用高效色谱法检测上清液和作为空白对照的中药提取液，比较两者指纹图谱，峰面积改变的峰，即是与活性细胞有相互作用的成分。
较好的检测方法中，细胞培养所需要的细胞量为106～109；细胞培养时间为1-12小时，待中药中的有效成分与细胞结合达饱和后离心取上清液，用高效液相色谱分别检测细胞培养后的上清液与空白对照的上清液。而且，用高效色谱法检测中药提取液培养后的上清液，可与液相-质谱和/或核磁共振联用，获得与细胞有相互作用的成分的结构信息。所述检测方法，用高效色谱法检测中药提取液培养后的上清液，与液相-质谱和/或核磁共振联用，获得与细胞有相互作用成分的指纹图谱。
本发明提供了一种快捷，准确，体现中药多成分协同作用的检测中药中与活性细胞有相互作用的化学成分的方法，所述检测包括筛选与测定，避免了因细胞的生物学特征受到影响而影响到有效成分的筛选的准确性，可与LC-MS联用，提高有效成分的分离效果，并且在筛选有效成分的同时获得其结构信息，可以快速的从中药中寻找可能具有活性的先导化合物或化合物群。同时本发明方法相对简单、成本较低，从中药中筛选有效成分的效率显著提高，并且可以作为中药质量控制的补充手段。中药指纹图谱是现在用于中药质量控制的一个关键技术，但现行指纹图谱存在的一个突出问题就是不能提供该中药的药理信息。例如，图1中表示的当归补血汤的红色线图谱(位置在上方)即是当归补血汤的指纹图谱，它仅仅能提供中药材所含成分的化学信息。应用本发明方法将当归补血汤与内皮细胞作用后再做指纹图谱，如图2中当归补血汤的蓝色线图(位置在下方)，可以看出共有5个峰的峰面积发生了明显的变化。药物与活性细胞的相互作用是药物产生药理活性的前提，在用指纹图谱进行中药质量控制时，这些有变化的峰应该是重点控制的对象，因为他们才可能是该药的活性物质基础。本发明方法将生物学技术与液相色谱联用，结果比生物色谱方法更加简便，结论更可靠。
细胞比模拟生物膜的特异性更强。细胞膜是从细胞上分离出来的，其生物学特征可能会受到影响，本发明直接采用活性细胞，并且将活性细胞与药物混合后进行培养，这样与人体的作为药物靶标的细胞更加接近，因此其结果比细胞膜更加可信。如果利用与生物膜有结合的药物不能透过透析膜的特点，将与膜有结合的成分与没有与膜结合的成分分离开来，由于透析达到平衡时需要有一定的时间，即在12小时以上。但是细胞比细胞膜要娇贵，将中药直接提取液特别是含有增溶剂的提取液加入没有血清的细胞悬液中，时间长了容易导致细胞的死亡，所以采用活性细胞与中药中有效成分的相互作用检测出中药有效成分的方法中一般控制时间在1-12小时，但有时也不是不能超过12小时。理论上来说，药物与细胞结合是一个很短暂的过程，即药物加入细胞便会马上结合。透析时一般以4度低温为宜主要是防止药物成分改变，但是对于活性细胞来说，需要在生理条件，即37度为宜，低温会降低细胞的活性，影响实验结果，而对于细胞膜而言低温是没有太大的关系。而且，细胞在生理条件下时，容易堵塞透析膜的小孔，从而使得空白对照(不含细胞)失去对照的齐同可比性，不具有对照价值，所以利用活性细胞与中药中有效成分的相互作用以检测出中药有效成分的方法中不宜使用透析。由于细胞的重量明显大于细胞膜的重量，离心后很容易沉淀下来，因此采用简单的离心方法就可以将与细胞有结合的成分和与细胞没有结合的成分分离开来。
以下是本发明中药有效成分筛选方法的进一步描述
活性细胞的选择所有来自人体和动物的细胞均可作为筛选中药的靶标，如如内皮细胞；心肌细胞；平滑肌细胞；肿瘤细胞等，目前有大量的商品化的细胞株可以买，如内皮细胞，肿瘤细胞等。亦可以自己进行分离培养。具体筛选中药时可根据文献资料和预试验选择合适的细胞，如文献显示当归补血汤能调节内皮细胞的分泌，那么筛选时可以选择内皮细胞作为筛选当归补血汤的靶标。
中药的提取。所述的中药包括单味中药以及由数味中药组成的复方。针对不同中药所含有效成分的理化性质，可以任选合适的溶媒进行提取。但是，将与活性细胞的接触提取液，必须是不会破坏活性细胞。一般以水或者低浓度的增溶剂如二甲基亚砜，吐温为宜，也就是说，对待筛的中药进行提取时可以用任何溶剂。在提取液是水液，可以直接将提取液与活性细胞进行反应。如果是用其它可能破坏细胞结构的有机溶剂提取中药，对该提取液要进行一定的处理，即在去除有机溶剂后加入少量的不破坏细胞结构的增溶剂，如1％的二甲基亚砜等。原则上，加入增溶剂的含量，以不破坏活性细胞为适度，在实际操作中，这种适度通过简单测试是容易掌握的。例如取少量待测提取液与细胞接触，观察细胞的变化，如有破碎现象则表明该提取液需要进一步降低增溶剂的浓度。提取液中提取物的浓度只要达到可以检测的限度就行，浓度对实验效果并无显著影响。
活性细胞与中药提取物的结合。将中药提取液与细胞混合后，按常规的细胞培养方法培养一定的时间，一般可以为1-12小时，同时，用没有加细胞的中药提取液作一平行的空白对照。待中药中的有效成分与细胞结合达饱和后离心取上清，用高效液相色谱分析细胞培养的上清液与空白提取液的上清液。本方法所需的细胞量比常规的药理筛选的量要大，一般106以上，以107～109较好，以保证能够用色谱方法检测出中药中与细胞有结合的有效成分。每一个细胞上能够结合的药物分子是非常有限的，如果细胞量少了，那么总的细胞加起来结合的药物分子也很少，这样与空白对照的时候，即使被结合的成分也可能会看不出其峰面积的变化，多加一些细胞，就是尽可能的保证所有被细胞结合的成分，都可以通过峰面积对照找出来。
色谱检测。用高效色谱法分别检测中药提取液与细胞结合后离心的上清液和作为空白对照的提取液离心的上清液，比较、分析两者图谱的改变。其中峰面积显著减少的峰即是与活性细胞具有相互作用的化学成分，本发明基于的原理是药物与细胞膜上靶点结合具有一定的稳定性，离心时随着细胞一起沉淀下来，从而其在上清液中的浓度降低，或者是中药中的活性成分透过细胞膜进入细胞里，离心时同样随着细胞一起沉淀下来，从而其在上清液中的浓度降低，这种浓度的改变可以用现有的色谱技术检测出来，即表现为峰面积的减少。如果测试样品是整个中药或复方的提取物，那么所得到的就是整个中药中的成分与活性细胞的相互作用情况，如果样品是单一化合物或一类或几类化合物，那么得到的就是单一化合物或一类或几类化合物与活性细胞的相互作用情况。至于单一化合物、一类化合物、几类化合物、单味中药提取物，复方中药提取物他们之间与活性细胞相互作用有何差异，也可以进一步考察，如阿魏酸单体，当归提取液中的阿魏酸，当归补血汤提取液中的阿魏酸分别与活性细胞作用有何差别，及中药中的其它成分对之是否有协同或抑制作用，我们可以通过比较他们与生物膜作用后峰面积的改变是否一致来看出中药中其它成分是否对它与活性细胞的相互作用有影响。由于中药中含有许多成分，由于高效液相具有很高的分离效能，中药提取液通过高效液相会出现许多峰，一般而言，在一种洗脱条件下，一个峰就代表一个成分或者结构相似的几个成分。同时，如果在某种洗脱条件下不能分开的成分，可以换一种洗脱条件将之分开。通过本发明的筛选方法，就能快速、简便地发现在全部的峰中，有的峰与活性细胞有相互作用，有的没有相互作用，本发明要解决的技术问题就是要从中药中寻找与活性细胞有相互作用的峰，因为与细胞发生相互作用是药物发挥作用的前提，对于与细胞没有相互作用的峰，就极有可能是无效成分；在找到与活性细胞具有相互作用的中药成分的同时，制定中药活性指纹图谱，为其质量控制提供重要的参考信息
图1、是当归补血汤提取液与内皮细胞结合后培养12小时与空白对照比较图谱，可见有5个峰的峰面积有显著的改变，这些峰面积有改变的峰是与内皮细胞有相互作用的成分。其中5号峰经用标准品对照可以确定为藁本内酯。
图2是黄芪提取液与内皮细胞结合后与空白对照比较图谱，可见有4个峰的峰面积有显著的改变。
图3是当归提取液与内皮细胞结合后上清液与空白对照比较图谱。可见有2个峰的峰面积有显著的改变，其中2号峰经用标准品对照可以确定为藁本内酯图4 A表示当归提取液与内皮细胞结合后上清液的色谱图，B表示空白对照的色谱图，C表示第5次用2ml磷酸缓冲液洗脱的图谱，可见没有任何峰，D表示用2ml 75％乙醇破碎细胞的图谱，可见在细胞破碎液里面有两个峰，正是当归提取液与内皮细胞结合后上清液中峰面积减少的峰。
图5表示黄芪提取液与巨噬细胞结合后与空白对照比较图谱，可见有2个峰的峰面积有显著的改变。
具体实施例方式
实施例1筛选当归补血汤中与内皮细胞有相互作用的有效成分当归补血汤由当归和黄芪两味药组成，其临床比例为1∶5。临床上主要用于治疗各种贫血症。该方成分极为复杂，含有多糖，皂苷，黄酮，生物碱，挥发油等多种成分，将其一一制备出来进行活性筛选无疑是一个耗时，费力，效率又低的过程。采用本发明筛选方法可以快速的从中寻找其与内皮细胞有相互作用的可能的活性成分。
当归补血汤的提取取粉碎当归(市售)5g，黄芪(市售)25g，加入10倍量的70％甲醇浸泡1h，回流提取1h，提取液在50度条件下用旋转蒸发仪除掉溶剂，剩余部分加入30ml含0.5％二甲基亚砜的pH为7.0的磷酸缓冲液充分溶解，5000rpm/min离心10min，普通滤纸过滤，置负20度冰箱中保存备用。
内皮细胞培养取健康产妇剖腹产术后12小时以内的脐带，立即浸泡在4度无菌脐带采集液中。按Jaffe法加以改良后进行培养。用0.1％的胶原酶消化分离内皮细胞，以2×104/ml细胞接种于96孔培养板中，用含20％小牛血清的M199培养液进行培养。传代至细胞生长稳定后，转入7个500ml的培养瓶中进行培养，合并7瓶细胞，计数细胞为6.0×107吸去上层的培养液，以9ml含0.5％二甲基亚砜的pH7.0磷酸缓冲液制成细胞悬液。
内皮细胞与当归补血汤提取液结合取当归补血汤提取液用0.22μm的膜过滤除菌，然后取1ml加入上法制备的9ml内皮细胞悬液当中；同时另取当归补血汤提取液1ml，加入9ml含0.5％二甲基亚砜的pH7.0磷酸缓冲液当中作为空白对照，置37度培养箱中培养12h，显微镜检测细胞的形态正常，离心取上清，进行色谱检测。
检测条件C18色谱柱，Angilent系列高效液相色谱系统，DAD紫外检测器，流动相甲醇水梯度洗脱。检测波长320nm，标记有阿拉伯数字的峰表示峰面积有改变的峰，即与内皮细胞有结合的成分。
结果图一是当归补血汤提取液与内皮细胞结合后培养12小时与空白对照比较图谱，可见有5个峰的峰面积有显著的改变，这些峰面积有改变的峰是与内皮细胞有相互作用的成分。其中5号峰经用标准品对照可以确定为藁本内酯。藁本内酯是当归挥发油中的主要成分，约占当归挥发油的45％，当归挥发油对子宫具有双向调节作用。
实施例2筛选黄芪中与内皮细胞有相互作用的有效成分黄芪的提取取粉碎的黄芪20g，加入8倍量90％的乙醇浸泡1h，水浴回流提取1h，提取液在45度条件下用旋转蒸发仪除掉溶剂，剩余部分加入20ml pH为7.4的醋酸缓冲液充分溶解，4000rpm/min离心10min，普通滤纸过滤，置负20度冰箱中保存备用。
内皮细胞培养同实施例一，取7瓶内皮细胞，计数细胞为5.0×107吸去上层的培养液，以9ml pH为7.4的含20％小牛血清的M199培养液制成细胞悬液。
内皮细胞与黄芪提取液结合取黄芪提取液用0.22μm的膜过滤除菌，然后取1ml加入上法制备的9ml内皮细胞悬液当中，同时另取黄芪提取液1ml，加入9ml pH7.4含20％小牛血清的M199培养液当中作为空白对照，置37度培养箱中培养1h，显微镜检测细胞的形态正常，离心取上清，进行色谱检测。
检测条件同实施例1结果图2是黄芪提取液与内皮细胞结合后培养1小时与空白对照比较图谱，可见有4个峰的峰面积有显著的改变，这些峰面积有改变的峰是与内皮细胞有相互作用的成分。采用LC-MS技术，测得1，2，3号峰的分子量分别为466、284、268实施例3筛选当归中与内皮细胞有相互作用的有效成分当归的提取取粉碎的当归10g，加入15倍量水浸泡1h，100度油浴回流提取1h，提取液在50度条件下用旋转蒸发仪除掉溶剂，剩余部分加入5ml pH为7.4的磷酸缓冲液充分溶解，4000rpm/min离心10min，普通滤纸过滤，置负20度冰箱中保存备用。
内皮细胞的培养同实施例1内皮细胞与当归提取液的结合取当归提取液1ml加入上法制备的9ml内皮细胞悬液当中，同时另取当归提取液1ml，加入9ml pH7.4磷酸缓冲液当中作为空白对照，置37度培养箱中培养6h，显微镜检测细胞的形态正常，离心取上清，进行色谱检测。为了验证该方法的可靠性，用胰酶将当归提取液与内皮细胞培养后的内皮细胞消化下来，用10ml磷酸缓冲液反复冲洗，离心细胞4次，以洗掉细胞上可能吸附的中药成分，第5次用2ml磷酸缓冲液洗脱，离心取上清，过滤供色谱检测，将第5次离心后的细胞沉淀用2ml 75％的乙醇破碎细胞，离心取上清，过滤供色谱检测。
检测条件同实施例1结果图3是当归提取液与内皮细胞结合后上清液与空白对照比较图谱。可见有2个峰的峰面积有显著的改变，其中2号峰经用标准品对照可以确定为藁本内酯；图4 A表示当归提取液与内皮细胞结合后上清液的色谱图，B表示空白对照的色谱图，C表示第5次用2ml磷酸缓冲液洗脱的图谱，可见没有任何峰，D表示用2ml 75％乙醇破碎细胞的图谱，可见在细胞破碎液里面有两个峰，正是当归提取液与内皮细胞结合后上清液中峰面积减少的峰。
实施例4筛选黄芪中与巨噬细胞有相互作用的有效成分黄芪的提取取粉碎25g，加入6倍量的50％乙醇浸泡1h，回流提取1h，提取液在45度条件下用旋转蒸发仪除掉溶剂，剩余部分加入25ml pH为7.0的磷酸缓冲液充分溶解，4000rpm/min离心10min，普通滤纸过滤，置负20度冰箱中保存备用。
巨噬细胞的分离、培养取白兔1只，麻醉后固定，分次腹腔注射PRMI 1640(含10％小牛血清，青霉素100u.L-1，链霉素)100ml，轻揉后抽取腹腔液，离心，记数巨噬细胞，调整细胞数为1×106/ml，置于细胞培养瓶，37℃、5％CO2培养箱中培养，2h后去上清，以D-Hanks液洗去未贴壁细胞，重新加入培养液培养8h，计数细胞为7.5×106，吸去上层的培养液，以9mlpH7.0磷酸缓冲液制成细胞悬液。
黄芪提取液与巨噬细胞结合取黄芪提取液用0.22μm的膜过滤除菌，然后取1ml加入上法制备的9ml巨噬细胞悬液当中，同时另取黄芪提取液1ml，加入9ml pH7.0磷酸缓冲液当中作为空白对照，置37度培养箱中培养5h，显微镜检测细胞的形态正常，离心取上清，进行色谱检测。
检测条件C18色谱柱，Angilent系列高效液相色谱系统，DAD紫外检测器，流动相甲醇水梯度洗脱。检测波长280nm，标记有阿拉伯数字的峰表示峰面积有改变的峰，即与内皮细胞有结合的成分。
结果图5表示黄芪提取液与巨噬细胞结合后与空白对照比较图谱，可见有2个峰的峰面积有显著的改变。
权利要求
1.一种中药有效成分检测方法，包括如下步骤取待测中药，用溶剂提取，得中药提取液备用；将中药提取液与活性细胞混合，培养后，取上清液；用高效色谱法检测中药提取液的上清液。
2.权利要求1的检测方法，其特征在于待测中药是单味中药或中药复方；提取中药的溶剂可以是水和/或有机溶剂；对含有机溶剂提取液，浓缩去除全部有机溶剂后，用缓冲液或低于3％的增溶剂溶解，制成中药提取液备用。
3.权利要求2的检测方法，其特征在于提取中药的溶剂选自水、C1-C5的低级醇、乙酸乙酯、乙醚、氯仿、石油醚，或它们的混合物；按中药提取液的体积加入0.1-3％体积的增溶剂。
4.权利要求3的检测方法，其特征在于C1-C5的低级醇是甲醇，乙醇、正丁醇；提取中药的溶剂是中性、酸性或碱性；选用无机酸、无机碱、有机酸或有机碱中和酸性或碱性的中药提取液；增溶剂选自吐温、二甲基亚砜、聚乙二醇、曲拉通或它们的混合物。
5.权利要求4的检测方法，其特征在于中药提取液是用水和/或乙醇提取制备的中药提取液；缓冲液是pH7.0-7.4的磷酸盐或醋酸盐缓冲液。
6.权利要求1的检测方法，其特征在于活性细胞为来自人体或动物组织细胞的细胞；将中药提取液与活性细胞在模拟生理条件下的缓冲液或细胞培养液中培养后，取上清液，同时将不含细胞的中药提取液作为空白对照，分别用高效色谱法检测上清液和作为空白对照的中药提取液，比较两者指纹图谱，峰面积改变的峰，即是与活性细胞有相互作用的成分。
7.权利要求6的检测方法，其特征在于活性细胞是内皮细胞、心肌细胞、平滑肌细胞、肿瘤细胞；细胞培养所需要的细胞量为106以上，培养用的模拟生理条件的缓冲液是pH7.0-7.4的磷酸盐或醋酸盐缓冲液或含1-20％小牛血清的细胞培养液。
8.权利要求7的检测方法，其特征在于细胞培养所需要的细胞量为106～109；细胞培养时间为1-12小时，待中药中的有效成分与细胞结合达饱和后离心取上清液，用高效液相色谱分别检测细胞培养后的上清液与空白对照的上清液。
9.权利要求1的检测方法，其特征在于用高效色谱法检测中药提取液培养后的上清液，与液相-质谱和/或核磁共振联用，获得与细胞有相互作用的成分的结构信息。
10.权利要求9的检测方法，用高效色谱法检测中药提取液培养后的上清液，与液相-质谱和/或核磁共振联用，获得与细胞有相互作用成分的指纹图谱。
全文摘要
一种利用活性细胞与中药中有效成分的相互作用测出中药有效成分的方法，包括将中药提取液与细胞混合进行培养，同时进行空白对照，用高效色谱法分别检测中药提取液与细胞结合后与空白中药对照液，比较两者指纹图谱的改变，峰面积改变的峰，即是与活性细胞有相互作用的成分，运用LC－MS，NMR等技术，获得与细胞有相互作用成分的结构信息，该方法快捷，准确，相对简单，成本较低，从中药中筛选有效成分的效率显著提高，并且可以作为中药质量控制的补充手段。
文档编号G01N30/00GK1595142SQ20041004111
公开日2005年3月16日 申请日期2004年6月30日 优先权日2004年6月30日
发明者李萍, 盛亮洪, 李睿岩, 李松林, 王伟 申请人:中国药科大学