专利名称：金莲花药材指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱的制作方法
技术领域：
本发明涉及中药材指纹图谱的构建方法，尤其是金莲花药材高效液相色谱(HPLC)指 纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱。属于药物分析技术领域。
背景技术：
中药指纹图谱特指中药样本经光谱或色谱等现代分析技术得到的中药各组分群体特 征的图谱或图象。目前指纹图谱已成为国内外公认的鉴别中药品种和评价中药质量的最有 效手段之一。美国食品药品管理局在1996年制定的《FDA关于植物制品的指南》中，要求 对植物原料、植物药中间品和植物药产品提供相应的指纹图谱。英国草药典、印度草药典 以及加拿大药用及芳香植物学会、德国药用植物学会也接受色谱指纹图谱。中国国家药品 监督管理部门于2000年发布了《中药注射剂的指纹图谱研究的技术要求(暂行)》，明确要 求对新申报的中药注射剂和已上市的中药注射剂实行指纹图谱标准。
中药指纹图谱经过了数十年的研究，使用了包括紫外、红外、气相、高效液相、薄层、 核磁共振、扫描电子显微镜、计算机图像分析、电泳技术、同功酶分析法、分子生物学技 术、聚类分析技术等许多现代分析测试手段，为中药的物质鉴定和成分分析积累了大量的 数据。但从中药全面质量控制的角度看，还远未达到有效地反映和控制中药的整体质量的 目的。高效液相色谱(HPLC)指纹图谱在国际上容易获得认可，包括美国、英国、法国、 加拿大、德国、日本和印度在内的许多国家更愿意接受HPLC指纹图谱。因此，为中药材建 立相应的HPLC指纹图谱，是现阶段控制中药内在质量的有效手段。
金莲花为毛茛科植物金莲花的干燥花，广泛分布于我国东北、华北和内蒙古地区。 金莲花有抑菌和清热解毒的作用，常用于急、慢性扁桃体炎，急性中耳炎，急性鼓膜炎，急性结膜炎，急性淋巴管炎。文献报道对金莲花药材的研究多以总黄酮为定量指标，但是 在大部活性成分尚不清楚的情况下，测定一两个化学成分的量还不能真正反映原药材质量 的稳定性。
发明内容
本发明的目的是提供一种金莲花药材指纹图谱的构建方法，以及由此方法所得到的金 莲花药材标准指纹图谱。为实现此目的，本发明通过对金莲花药材高效液相色谱指纹图谱 的研究，提出了一种较好的金莲花药材质量控制方法，弥补了现有质量控制技术的不足， 使金莲花药材的质量控制更加完善和科学。
本发明的金莲花药材高效液相色谱指纹图谱的构建方法，包括如下步骤
(1) 供试品溶液的制备精密称取药材粉末10g，置于具塞容器中，加入60 100%的甲
醇100 700mL，浸泡24h，超声震荡30min，冷却后定容，取上清液用O. 45 n m微孔 滤膜过滤，滤液作为供试品溶液。
(2) 高效液相色谱分析色谱分离柱填料为5um Kromasil-C18, 250X4. 6mm;流动相为 甲醇-水；采用梯度洗脱方式Omin—25min—60min—85min—120min，甲醇10%— 18%—25%—38%—50%;流速O. 8 1, 2mL/min;检测波长350nm;柱温30 45。C。在 此条件下分析供试品溶液，得到金莲花药材的指纹图谱。
按照本发明提供的方法，对14批金莲花药材建立了HPLC指纹图谱，通过分析比较， 确定了 17个共有特征峰，其保留时间分别为4. 8min、7. 7min、 10. 9min、 17. 6min、28. Omin、 33. 5min、 41.3min、 43.8min、 48.0min、 53.2min、 57.1min、 62.3min、 82.7min、 86,2min、 94.0min、 101.1min、 109.5min，这些共有特征峰构成了金莲花药材的指纹特征，可作为金 莲花药材的标准指纹图谱。
本发明将金莲花药材作为一个整体对待，通过比较其共有峰可以找出不同药材之间的 细微差异，适于对金莲花药材真伪、产地和品质的鉴别和控制。
图1是本发明提供的金莲花药材的标准指纹图谱。图中从左到右分别标出了其共有特 征峰1至17号。
具体实施例方式
本发明的优选实施例如下
(1) 仪器和药品使用岛津LC10A高效液相色谱仪；金莲花药材共14批，均购于中草
药商店；其它试剂为色谱纯或分析纯。
(2) 供试品溶液的制备精密称取药材粉末10g，置于容量瓶中，加入75%的甲醇400mL， 浸泡24h,超声震荡30min,冷却后定容，取上清液用0. 45 y m微孔滤膜过滤，滤 液作为供试品溶液。
(3) 高效液相色谱分析色谱分离柱填料为5u mKromasil-C18, 250X4. 6隱；流动相为 甲醇-水；采用梯度洗脱方式Omin—25min—60min—85min—120min，甲醇10%— 18%—25%—38%—50%;流速1.0mL/min;检测波长350nm;柱温40。C。在此条件下 分析供试品溶液，得到金莲花药材的指纹图谱。
(4) 按照本发明提供的方法，对14批金莲花药材建立了 HPLC指纹图谱，确定了 17个 共有特征峰，其保留时间分别为4. 8min、 7. 7min、 10. 9min、 17. 6min、 28.0min、 33. 5min、 41.3min、 43.8min、 48.0min、 53,2min、 57.1min、 62.3min、 82.7min、 86.2min、 94.0min、 101.1min、 109.5min，这些共有特征峰构成了金莲花药材的指纹特征，可 作为金莲花药材的标准指纹图谱。
权利要求
1、一种金莲花药材高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征包括供试品溶液的制备、指纹图谱的制作和标准指纹图谱的确定。
2、 根据权利要求1所述的金莲花药材高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征是所述的 供试品溶液的制备方法是精密称取药材粉末10g，置于具塞容器中，加入60 100%的 甲醇100 700mL，浸泡24h，超声震荡30min，冷却后定容，取上清液用0. 45 u m微孔滤 膜过滤，滤液作为供试品溶液。
3、 根据权利要求l、 2所述的金莲花药材高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征是所述 的指纹图谱的制作过程为色谱分离柱填料为5ym Kromasil-C18， 250X4. 6mm;流动相 为甲醇-水；采用梯度洗脱方式Omin—25min—60min—85min—120min，甲醇10%—18% —25%—38%—50%;流速O. 8 1.2mL/min;检测波长350nrn;柱温30 45。C。在此条件下 分析供试品溶液，得到金莲花药材的指纹图谱。
4、 根据权利要求1、 2、 3所述的金莲花药材高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征是 所述的标准指纹图谱的确定方法是按照本发明提供的方法，对14批金莲花药材建立了 HPLC指纹图谱，通过分析比较，确定了17个共有特征峰，其保留时间分别为4.8min、 7. 7min、 10. 9min、 17. 6min、 28. Omin、 33. 5min、 41.3min、 43.8min、 48.0min、 53.2min、 57.1min、 62.3min、 82.7min、 86.2min、 94,0min、 101.1min、 109.5min,这些共有特征峰 构成了金莲花药材的指纹特征，可作为金莲花药材的标准指纹图谱。
全文摘要
本发明提供了一种金莲花药材指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱。向金莲花药材粉末中加入适量甲醇浸泡24小时，超声提取30分钟，并将上清液用微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液。对供试品溶液进行高效液相色谱分析，色谱柱为Kromasil-C<sub>18</sub>(5μm，250×4.6mm)，柱温为40℃，流动相为甲醇-水，采用梯度洗脱方式，检测波长350nm，得到金莲花药材的HPLC指纹图谱。通过对14批次金莲花药材HPLC指纹图谱的比对，确定其共有指纹特征，得到标准指纹图谱。利用标准指纹图谱可以有效监控金莲花药材的质量。
文档编号G01N30/00GK101183092SQ20071030693
公开日2008年5月21日 申请日期2007年12月28日 优先权日2007年12月28日
发明者史晓南, 周考文, 王树聪 申请人:北京联合大学生物化学工程学院