专利名称：：免疫球蛋白g检测试剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种用于测定人体体液成份的试剂组合，特别是测定人体血清中的免疫球蛋白G(IgG)的检测试剂，可广泛应用在医学及生物化学
技术领域：
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背景技术：
：免疫球蛋白是一组具有抗体活性的蛋白质，主要存在于血浆中，也见于其他体液、组织和一些分泌液中。人血浆内的免疫球蛋白大多数存在于丙种球蛋白(Y-球蛋白)中。可分为五类，即免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D(IgD)和免疫球蛋白E(IgE)。IgG是最主要的免疫球蛋白，约占人血浆丙种球蛋白的70%，分子量约15万，含糖23%。IgG分子由4条肽链组成。其中分子量为2.5万的肽链，称轻链，分子量为5万的肽链，称重链。轻链与重链之间通过二硫键(一S—S—)相连接。免疫球蛋白是机体受抗原(如病原体)刺激后产生的，其主要作用是与抗原起免疫反应，生成抗原-抗体复合物，从而阻断病原体对机体的危害，使病原体失去致病作用。另一方面，免疫球蛋白有时也有致病作用。临床上的过敏症状如花粉引起的支气管痉挛，青霉素导致全身过敏反应，皮肤荨麻疹(俗称风疹块)等都是由免疫球蛋白制剂能增强人体抗病毒的能力，可作药用。如注射人血清或人胎盘中提取的丙种球蛋白制剂可防治麻疹、传染性肝炎等传染病。已知测定免疫球蛋白G(IgG)的方法有免疫扩散法、免疫电泳法、放射免疫分析法、这些方法都存在着操作繁琐，需要特殊的设备，样品需要预处理，不能进行批量样本分析和不能直接上全自动生化分析仪检测等缺点。
发明内容本发明针对现有技术的不足，提供一种IgG检测试剂，其具有样本无需稀释、操作简单、采用血清型液体恒定值校准剂后不需每批更改参数、准确度高、重复性好、抗干扰能力强、并且适用于各种类型的全自动生化分析仪的优点。为了达到上述目的，本发明公开了一种免疫球蛋白G检测试剂，主要包括以下成分a、一种使样品中IgG抗原位点充分暴露、从而有利于与抗IgG抗体试剂充分结合的IgG反应剂，包括占其质量百分比为0.01-1%防腐剂、0.05-1%稳定剂、0.1-10%电解质、2-8%高分子加速剂、0.1-10%表面活性剂和0.1-0.5%反应促进剂，还包括5-200mmol/L缓冲剂；b、一种与人血清中的IgG抗原有高度特异反应性的抗IgG抗体试剂，包括占其质量百分比为5-50%抗IgG抗体、0.001-0.5%抗氧化剂和0.05-20%稳定剂，还包括0.01-1%防腐剂、0.1-10°/0电解质、2-8%高分子加速剂、0.1-10%表面活性剂，还包括5-200mmol/L缓冲剂；c、一种用来与样品比较、进行结果计算的液体血清型恒定值校准剂，包括占其质量百分比为0.01-1%防腐剂和0.1-1%稳定剂、0.36.0%IgA抗原和0.05-0.1%防霉剂，还包括20-100mmol/L缓冲剂。本发明中的抗IgG抗体来自羊、马、鼠或兔等哺乳动物。本发明中的抗IgG抗体试剂中的稳定剂可以由乙二胺四乙酸二钠、氯化镁、牛或人血清白蛋白乙二醇、甘露糖醇、海藻糖中的一种或多种构成。本发明中的缓冲液选自磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲垸缓冲液、PIPES缓冲液、HEPES缓冲液、TAPS缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸缓冲液，PH值为5-10。本发明中的缓冲液优选磷酸盐缓冲液，缓冲液的PH值为7.4-8.1。本发明中的表面活性剂选自非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂或两性离子表面活性剂。本发明中的表面活性剂优选非离子表面活性剂。本发明中的电解质可以是阴离子或阳离子。本发明中的电解质优选阳离子中的氯化钠。本发明中的防腐剂选自叠氮钠、乙基汞硫代硫酸钠、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、苯酚、广谱杀菌剂。本发明的原理是利用抗原抗体反应，加入反应剂，即样品稀释液，解除样本中抗原周围的电子层和水化层，使抗原位点充分暴露，然后加入抗IgG抗体试剂；高特异反应性的抗IgG抗体试剂与样本中相应的IgG抗原反应，形成不溶性的抗原-抗体复合物，产生一定的浊度，其浊度高低与样本中的IgG含量成正比，在规定波长下测定该不溶性抗原-抗体复合物的吸光度值，与已知恒定的校准剂比较，通过公式△AuIgG含量(g/L)=-XCs(g/L)△As式中AAu为以空白管吸光度为对照的样品管吸光度AAS为以空白管吸光度为对照的校准管吸光度Cs为校准剂中IgG的浓度可计算出样本中IgG的含量。本发明方法及试剂操作简单、样本不用预稀释，采用血清型液体恒定值校准液后不需每批更改参数，准确度高、重复性好、抗干扰能力强。并且还适用于各种类型的全自动生化分析仪。具体实施例方式本发明所提供一种免疫球蛋白G检测试剂，包括a、一种使样品中IgG抗原位点充分暴露、从而有利于与抗IgG抗体试剂充分结合的IgG反应剂，包括占其质量百分比为0.01-1%防腐剂、0.05-1%稳定剂、0.1-10%电解质、2-8%高分子加速剂、0.1-10%表面活性剂和0.1-0.5%反应促进齐1」，还包括5-200mmol/L缓冲剂；缓冲剂可以是磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲垸缓冲液、PIPES缓冲液、HEPES缓冲液、TAPS缓冲液、甘氨酸缓冲液或硼酸缓冲液等，本发明优选磷酸盐缓冲液，缓冲液的PH值为5-10，本发明优选PH值为7.4-8.1，在此范围内反应效果最好；防腐剂可以是叠氮钠、乙基汞硫代硫酸钠、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、苯酚或广谱杀菌剂，本发明从环保角度考虑，优选广谱杀菌剂；稳定剂的可以是乙二胺四乙酸二钠、氯化镁、牛或人血清白蛋白乙二醇、甘露糖醇或海藻糖；电解质的可以是阴离子或阳离子，本发明优选阳离子中的氯化钠(NaCl);加速剂可以是聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000或聚乙二醇8000，本发明优选聚乙二醇6000;表面活性剂可以是非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂或两性离子表面活性剂，本发明优选非离子表面活性剂，包括Theist、Tween系列、聚氧乙烯月桂醚系列、聚氧乙烯苯基醚、聚氧乙烯辛基苯醚、聚氧乙烯垸基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚等，这些表面活性剂可以单独使用，也可以两种或两种以上混合使用；反应促进剂可以是溴化己二甲胺或聚凝胺；b、一种与人血清中的IgG抗原有高度特异反应性的抗IgG抗体试剂，包括占其质量百分比为5-50。/。抗IgG抗体、0.001-0.5%抗氧化剂和0.05-20%稳定剂，还包括0.01-1%防腐剂、0.1-10%电解质、2-8%高分子加速剂、0.1-10%表面活性剂，还包括5-200mmol/L缓冲剂；抗IgG抗体可以是羊抗人IgG抗血清、马抗人IgG抗血清、鼠抗人IgG抗血清、兔抗人IgG抗血清等，这些血清均可外购获得，也可自制；抗氧化剂可以是丁基羟基茴香醚、硫代二丙酸二月桂酯、二丁基羟基甲苯、苯多酚、甘草抗氧化物、磷脂等。抗氧化剂可以先溶解在10-100ml丙二醇或乙醇中，然后加入到抗IgG抗体试剂中；缓冲剂可以是磷酸盐缓冲液、三轻甲基氨基甲垸缓冲液、PIPES缓冲液、HEPES缓冲液、TAPS缓冲液、甘氨酸缓冲液或硼酸缓冲液等，本发明优选磷酸盐缓冲液，缓冲液的PH值为5-10，本发明优选PH值为7.4-8.1，在此范围内反应效果最好；防腐剂可以是叠氮钠、乙基汞硫代硫酸钠、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、苯酚或广谱杀菌剂，本发明从环保角度考虑，优选广谱杀菌剂；稳定剂的可以是乙二胺四乙酸二钠、氯化镁、牛(人)血清白蛋白乙二醇、甘露糖醇或海藻糖；电解质的可以是阴离子或阳离子，本发明优选阳离子中的氯化钠(NaCl);加速剂可以是聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000或聚乙二醇8000，本发明优选聚乙二醇6000;表面活性剂可以是非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂或两性离子表面活性剂，本发明优选非离子表面活性剂，包括Theist、Tween系列、聚氧乙烯月桂醚系列、聚氧乙烯苯基醚、聚氧乙烯辛基苯醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚等，这些表面活性剂可以单独使用，也可以两种或两种以上混合使用；C、一种用来与样品比较、进行结果计算的液体血清型恒定值校准剂，包括占其质量百分比为0.01-1%防腐剂和0.1-1%稳定剂、0.36.0%IgG抗原和0.05-0.1%防霉剂，还包括20-100mmol/L缓冲剂。缓冲剂可以是PBS、Tris、TAPS、、HEPPS、CHES、CAPS、CAPSO、POPSO、Tricie、甘氨酸、双甘氨肽、二甘氨酸、硼酸盐等；防腐剂可以是叠氮钠、乙基汞硫代硫酸钠、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、苯酚、广谱杀菌剂等，可以单独使用或几种混合使用；防霉剂可以是丙酸钠、脱氧乙酸等，也可单独使用或几种混合使用；稳定剂可以是乙二胺四乙酸二钠、氯化镁、牛(人)血清白蛋白、丙三醇、单糖、多糖等，可以单独使用或几种混合使用。以上所述的所有生化原料和试剂均可外购获得。作为双试剂使用时，IgG反应剂和抗IgG抗体试剂可以按3:1的体积比例进行组合搭配，也可以是4:1、5:1、或7:1。本发明中IgG浓度值有以下几个选择第1点为Omg/L，用生理盐代替；第2点为3.0-8.0g/L，本发明优选6.0g/L;第3点10.0-15.0g/L,本发明优选12.0g/L;第4点15.0-30.0g/L，本发明优选20.0g/L;第5点25.0-60.0g/L;本发明优选30.0g/L。液体血清型IgG恒定值校准剂按照上述不同的IgG浓度值加入相应的的IgG抗原。IgG抗原可直接外购，或者自制。本发明的标准配置为每个上述双试剂和/或单试剂配置有4瓶IgG浓度相异的校准剂。以下是本发明中IgG检测试剂的制备方法，产品在28-C避光条件下有效期为一年。实施例一1、IgG反应剂(Rl)磷酸盐(缓冲剂)100mmol/L聚氧乙烯月桂醚(表面活性剂)5%NaCL(电解质)20%PEG-6000(高分子加速剂)4%广谱杀菌剂(防腐剂)3%溴化己二甲胺(反应促进剂)0.3%乙二胺四乙酸二钠(稳定剂)0.5%2、抗lgG抗体试剂(R2)磷酸盐(缓冲剂)100mmol/L聚氧乙烯月桂醚(表面活性剂)5%NaCL(电解质)10%PEG-6000(高分子加速剂)4%广谱杀菌剂(防腐剂)0.4%乙二胺四乙酸二钠(稳定剂)0.05%兔抗人IgG抗血清5%丁基羟基茴香醚(抗氧化剂)0.01%甘露糖醇(稳定剂)5%3、液体血清型IgG恒定值校准剂CAPSO(缓冲剂)10Ommol/L广谱杀菌剂(防腐剂)0.06%乙二胺四乙酸二钠(稳定剂)0.5%牛血清白蛋白(稳定剂)0.5%.丙酸钠(防霉剂)0.8%将IgG抗原按照第1点为Og/L，第2点为6.0g/L;第3点为12.0g/L;第4点为20.0g/L;第5点为30.0g/L加入上述溶液中，然后用0.22ym的滤膜抽滤除菌,放2-8"C保存。也可将(R1)与(R2)按3:l的比例混合，以作为单一试剂使用。实施例二1、IgG反应剂(Rl)磷酸盐缓冲液5mmol/L聚氧乙烯月桂醚(表面活性剂)0.1%NaCL(电解质)0.1%PEG-6000(高分子加速剂)20%广谱杀菌剂(防腐剂)0.1%聚凝胺(反应促进剂)0.1%乙二胺四乙酸二钠(稳定剂)0.1%2、抗lgG抗体试剂(R2)磷酸盐(缓冲剂)10mmol/L聚氧乙烯月桂醚(表面活性剂)0.1%NaCL(电解质)0.1%PEG-6000(高分子加速剂)7%广谱杀菌剂(防腐剂)0.01%乙二胺四乙酸二钠(稳定剂)2%羊抗人IgG抗血清40%丁基羟基茴香醚(抗氧化剂)0.5%氯化镁(稳定剂)1%3、液体血清型恒定值IgG校准剂CAPSO(缓冲剂)100mmol/L广谱杀菌剂(防腐剂)0.01%乙二胺四乙酸二钠(稳定剂)0.1%牛血清白蛋白(稳定剂)0.5%丙酸钠(防霉剂)0.05%将IgG抗原按照第1点为Og/L，第2点为6.0g/L;第3点为12.0g/L;第4点为20.0g/L;第5点为30.0g/L加入上述溶液中，然后用0.22um的滤膜抽滤除菌,放2-8"C保存。也可将(R1)与(R2)按3:l的比例混合，以作为单一试剂使用。实施例三1、IgG反应剂(Rl)磷酸盐缓冲液200mmol/L聚氧乙烯月桂醚(表面活性剂)10%NaCL(电解质)40%PEG-6000(高分子加速剂)80%广谱杀菌剂(防腐剂)5%聚凝胺(反应促进剂)0.5%乙二胺四乙酸二钠(稳定剂)1%2、抗lgG抗体试剂(R2)磷酸盐(缓冲剂)200mmol/L聚氧乙烯月桂醚(表面活性剂)10%NaCL(电解质)5%PEG-6000(高分子加速剂)2%广谱杀菌剂(防腐剂)1%乙二胺四乙酸二钠(稳定剂)0.05%马抗人IgG抗血清20%二丁基羟基甲苯(抗氧化剂)0.3%丙三醇(稳定剂)10%3、液体血清型恒定值IgG校准剂CAPSO(缓冲剂)20mmol/L广谱杀菌剂(防腐剂)1%丙三醇(稳定剂)1%牛血清白蛋白(稳定剂)1%脱氧乙酸(防霉剂)0.1%将IgG抗原按照第1点为Og/L，第2点为6.0g/L;第3点为12.0g/L;第4点为20.0g/L;第5点为30.0g/L加入上述溶液中，然后用0.22um的滤膜抽滤除菌,放2-8t保存。也可将(R1)与(R2按3:l的比例混合，以作为单一试剂使用。以下描述测定的具体操作步骤一、双试剂基本操作:<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>混匀，37"C孵育5分钟，在波长340nm处以空白管调零，读取各管的吸光度值A1。(仪器具有340nm波长，37"恒温装置的生化分析仪)结果计算样本中IgG含量(g/L)■=-XCs(g/L)AAs式中AAu以空白管吸光度为对照的样品管吸光度AAS以空白管吸光度为对照的校准管吸光度Cs校准液中IgG的浓度二、单试剂基本操作:加入物空白管校准管样品管R(Hi)500500500蒸馏水(U1)5校准液(Ul)待测样品(lU)混匀，37。C孵育5分钟，在波长340nm处以空白管调零，读取各管的吸光度值A。(仪器具有340nm波长，37'C恒温装置的生化分析仪)结果计算样本中IgG含量(g/L)=-^——XCs(g/L)AAs式中AAu以空白管吸光度为对照的样品管吸光度AAs以空白管吸光度为对照的校准管吸光度Cs校准液中IgG的浓度。权利要求1.一种免疫球蛋白G检测试剂，包括a、一种使样品中IgG抗原位点充分暴露、从而有利于与抗IgG抗体试剂充分结合的IgG反应剂，包括占其质量百分比为0.01-1％防腐剂、0.05-1％稳定剂、0.1-10％电解质、2-8％高分子加速剂、0.1-10％表面活性剂和0.1-0.5％反应促进剂，还包括5-200mmol/L缓冲剂；b、一种与人血清中的IgG抗原有高度特异反应性的抗IgG抗体试剂，包括占其质量百分比为5-50％抗IgG抗体、0.001-0.5％抗氧化剂和0.05-20％稳定剂，还包括0.01-1％防腐剂、0.1-10％电解质、2-8％高分子加速剂、0.1-10％表面活性剂，还包括5-200mmol/L缓冲剂；c、一种用来与样品比较、进行结果计算的液体血清型恒定值校准剂，包括占其质量百分比为0.01-1％防腐剂和0.1-1％稳定剂、0.3～6.0％IgG抗原和0.05-0.1％防霉剂，还包括20-100mmol/L缓冲剂。2.根据权利要求1所述的免疫球蛋白G检测试剂，其特征为所述抗IgG抗体来自羊、马、鼠或兔等哺乳动物。3.根据权利要求1所述的免疫球蛋白G检测试剂，其特征为所述抗IgG抗体试剂中的稳定剂可以由乙二胺四乙酸二钠、氯化镁、牛或人血清白蛋白乙二醇、甘露糖醇、海藻糖中的一种或多种构成。4.根据权利要求1所述的免疫球蛋白G检测试剂，其特征为所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、PIPES缓冲液、HEPES缓冲液、TAPS缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸缓冲液，PH值为5-10。5.根据权利要求4所述的免疫球蛋白G检测试剂，其特征为所述缓冲液为磷酸盐缓冲液，缓冲液的PH值为7.4-8.1。6.根据权利要求1所述的免疫球蛋白G检测试剂，其特征为所述表面活性剂选自非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂或两性离子表面活性剂。7.根据权利要求6所述的免疫球蛋白G检测试剂，其特征为-所述表面活性剂为非离子表面活性剂。8.根据权利要求1所述的免疫球蛋白G检测试剂，其特征为所述电解质可以是阴离子或阳离子。9.根据权利要求8所述的免疫球蛋白G检测试剂，其特征为所述电解质为阳离子中的氯化钠。10.根据权利要求1所述的免疫球蛋白G检测试剂，其特征为所述防腐剂选自叠氮钠、乙基汞硫代硫酸钠、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、苯酚、广谱杀菌剂。全文摘要本发明公开了一种免疫球蛋白G检测试剂，成分包括一种能使样品中IgG抗原位点充分暴露、从而有利于与抗IgG抗体试剂充分结合的IgG反应剂，一种与人血清中的IgG抗原有高度特异反应性的抗IgG抗体试剂和一种用来与样品比较、进行结果计算的液体血清型恒定值校准剂。所述抗IgG抗体来自羊、马、鼠或兔等哺乳动物。IgG反应剂和抗IgG抗体试剂可以作为两个单独的试剂构成产品的双试剂形式，也可以按一定比例混合构成产品的单试剂形式。文档编号G01N33/53GK101430329SQ200810121278公开日2009年5月13日申请日期2008年9月24日优先权日2008年9月24日发明者王贤理,凯蒙,蔡其浩申请人:王贤理