专利名称：款冬花药材指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱的制作方法
技术领域：
本发明涉及中药材指纹图谱的建立方法，尤其是款冬花药材高效液相色谱(HPLC) 指纹图谱的建立方法，以及由此方法所得到的款冬花药材标准指纹图谱，属于药物分析技术领域。
背景技术：
中药指纹图谱特指中药样本经光谱或色谱等现代分析技术得到的中药各组分群体特征的图谱或图象。目前指纹图谱已成为国内外公认的鉴别中药品种或评价中药质量的最有效手段之一。美国食品药品管理局在1996年制定的《FDA关于植物制品的指南》中，要求对植物原料、植物药中间品和植物药产品提供相应的指纹图谱。英国草药典、印度草药典以及加拿大药用及芳香植物学会、德国药用植物学会也接受色谱指纹图谱。中国国家药品监督管理部门于2000年发布了《中药注射剂的指纹图谱研究的技术要求(暂行)》，明确要求对新申报的中药注射剂和已上市的中药注射剂实行指纹图谱标准。中药指纹图谱经过数十年的研究，使用了包括紫外、红外、气相、高效液相、薄层、 核磁共振、扫描电子显微镜、计算机图像分析、电泳技术、同工酶分析法、分子生物学技术、 聚类分析技术等许多现代分析测试手段，为中药的物质鉴定和成分分析积累了大量的数据。但从中药全面质量控制的角度看，还远未达到有效地反映和控制中药的整体质量的目的。高效液相色谱(HPLC)指纹图谱在国际上容易获得认可，包括美国、英国、法国、加拿大、 德国、日本和印度在内的许多国家更愿意接受HPLC指纹图谱。因此，为中药材建立相应的 HPLC指纹图谱，是现阶段控制中药内在质量的有效手段。款冬花为菊科款冬属植物款冬的花蕾，具有润肺下气，止咳化痰之功效。临床上主要用于新久咳嗽，咳喘痰多，劳嗽咳血。本品已报道的化学成分包括萜类，黄酮类，生物碱， 挥发油等。由于受产地、气候和生态环境等的影响，不同款冬花药材所含的成分也存在一定差异。《中国药典》对款冬花药材的质量控制仅限于款冬酮的含量测定，不能系统、完整地反映款冬花的内在质量。
发明内容
本发明的目的是提供一种款冬花药材指纹图谱的建立方法，以及由此方法所得到的款冬花药材标准指纹图谱。为实现此目的，本发明通过对款冬花药材高效液相色谱指纹图谱的研究，提出了一种更好的款冬花药材质量控制方法，弥补了现有质量控制技术的不足，使款冬花药材的质量控制更加完善和科学。本发明的款冬花药材高效液相色谱指纹图谱的建立方法，包括如下步骤
(1)供试品溶液的制备取款冬花药材粉末1.0 g，精密称定，置具塞容器中，精密加入 KTlOOmL乙醇，超声处理1小时，冷却后上清液用0. 45 μ m微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。(2)高效液相色谱分析色谱分离柱填料5 μ m Diamonsil- C18，250X4. 6mm ；流动相0. 1%磷酸-乙腈；采用梯度洗脱方式0min — 30min — 40min — 50min — 60min,乙腈 10% — 25% — 75% — 100% — 100% ；流速 0. 5 1. 5mL/min ；检测波长 240nm ；柱温:20^40 °C。
在此条件下分析供试品溶液，得到款冬花药材的指纹图谱。按照本发明提供的方法，对10批款冬花药材建立了 HPLC指纹图谱，通过分析， 确定了 13 个共有峰，保留时间分别为3. 9min、10. Omin,21. Omin,22. 3min、25. Omin、 26. lmin、28. 8min、37. lmin、38. 6min、45. 6min、48. 7min、51. lmin、54. 5min,这些共有特征峰构成了款冬花药材的指纹特征，可作为款冬花药材的标准指纹图谱。本发明具有如下显著的优点和用途
(1)将款冬花药材作为一个整体对待，通过比较其共有峰可以找出不同药材之间的细微差异；
(2)供试品制作简便，色谱条件容易实现；
(3)方法的稳定性和重现性都比较好；
(4)适用于对款冬花药材真伪、产地和品质的鉴别和控制。
图1是本发明提供的款冬花药材的标准指纹图谱。图中从左到右分别标出了其共有特征峰1至13号。
具体实施例方式
本发明的优选实施例如下 (1)仪器和药品使用Waters高效液相色谱仪；款冬花药材共10批，购于药店或药材市场；其它试剂为色谱纯或分析纯。(2)供试品溶液的制备取款冬花药材粉末1.0 g，精密称定，置具塞容器中，精密加入50 mL乙醇，超声处理1小时，冷却后上清液用0. 45 μ m微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。(3)高效液相色谱分析色谱分离柱填料5 μ m Diamonsil- C18，250X4. 6mm ；流动相0. 1%磷酸-乙腈；采用梯度洗脱方式Omin — 30min — 40min — 50min — 60min,乙腈 10% — 25% — 75% — 100% — 100% ；流速 0. 5 1. 5mL/min ；检测波长 240nm ；柱温:20^40 °C。 在此条件下分析供试品溶液，得到款冬花药材的指纹图谱。(4)按照本发明提供的方法，对10批款冬花药材建立了 HPLC指纹图谱，通过分析，确定了 13 个共有峰，保留时间分别为3. 9min、10. Omin,21. Omin,22. 3min、25. Omin、 26. lmin、28. 8min、37. lmin、38. 6min、45. 6min、48. 7min、51. lmin、54. 5min,这些共有特征峰构成了款冬花药材的指纹特征，可作为款冬花药材的标准指纹图谱。
权利要求
1. 一种款冬花药材高效液相色谱指纹图谱的建立方法，包括以下步骤(1)供试品溶液的制备取款冬花药材粉末1g，精密称定，置具塞容器中，精密加入 10^100 mL乙醇，超声处理1小时，冷却后上清液用0.45 μ m微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液；(2)指纹图谱的制作色谱分离柱填料5μπιDiamonsil- Cw柱，250 X 4. 6mm ；流动相0. 1%磷酸-乙腈；采用梯度洗脱方式0min — 30min — 40min — 50min — 60min,乙腈 10% — 25% — 75% — 100% — 100% ；流速 0. 5 1. 5mL/min ；检测波长 240nm ；柱温:20^40°C, 在此条件下分析供试品溶液，得到款冬花药材的指纹图谱；(3)标准指纹图谱的确定确定了13个共有特征峰，保留时间分别为3. 9min、10. Omin, 21. 0min>22. 3min>25. 0min>26. lmin>28. 8min>37. lmin>38. 6min、45. 6min、48.7min、 51. lmin、54. 5min，这些共有特征峰构成了款冬花药材的指纹特征，作为款冬花药材的标准指纹图谱。
全文摘要
本发明提供了一种款冬花药材HPLC指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱。首先，取款冬花药材粉末，加入乙醇，超声提取，将上清液用微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液。然后，进行高效液相色谱分析，色谱柱为Diamonsil-C18柱(5μm，250×4.6mm)；流动相为0.1%磷酸-乙腈，采用梯度洗脱方式；检测波长240nm；柱温30℃。吸取供试品溶液进样，得到款冬花药材的HPLC指纹图谱。通过对10批次款冬花药材HPLC指纹图谱的比对，确定其共有指纹特征，得到标准指纹图谱。利用标准指纹图谱可以有效监控款冬花药材的质量，保持其稳定、均一、可控。
文档编号G01N30/88GK102520102SQ201110422348
公开日2012年6月27日 申请日期2011年12月16日 优先权日2011年12月16日
发明者曹娟, 王福刚 申请人:泰山医学院