专利名称：免疫胶体金试纸及其配合光电传感器定量检测clb的方法
技术领域：
本发明属于单克隆抗体技术、金标抗体技术、竞争免疫层析技术和光电型传感器技术领域，具体涉及一种免疫胶体金试纸及其配合光电传感器定量检测CLB的方法。
背景技术：
盐酸克伦特罗又名为瘦肉精，化学名称为羟甲叔丁肾上腺素，是一种人工合成的 ^ 2-肾上腺素受体激动剂，动物食用后能显著提高瘦肉率，但同时也造成动物性食品中CLB 的残留，从而引起人类中毒事件的发生。世界卫生组织和联合国粮农组织规定CLB在动物可食用组织中最大残留限为0. 01ng/g。胶体金免疫层析试验法利用抗原抗体反应原理，利用胶体金标记示踪物与固定在膜上的抗原或抗体形成复合物被截留而显色，不需要特定的酶和底物显色，也不需要抗原抗体之间的较长时间的物理吸附，而根据显色与否判定阴阳性结果，安全有效，简单方便。但方法的缺陷是不能完全达到定量检测的要求。有效的检测方法是控制CLB滥用的关节环节之一，目前盐酸克伦特罗的常用检测方法主要有色谱分析方法和免疫学分析方法等。但这些方法需要对检测样品进行严格的预处理，所需仪器比较昂贵和不适宜现场检测等缺点。胶体金免疫试纸条可以快速定性检测 CLB的残留，在生产上已被广泛的应用。近年来，光电型传感器已被广泛应用到检测食品和饮用水的重金属中，其具有检测迅速、简便、容易携带、可实现现场检测等优点；目前尚未见到用免疫胶体金技术和光电型传感器定量检测CLB的残留的相关专利报道。经过专利搜索发现，申请号02228104. 5，名为盐酸克伦特罗快速检测试纸条；申请号02202033. 0，名为盐酸克伦特罗试纸条；申请号200510083198. 5，名为一种快速检测盐酸克伦特罗残留的免疫金试纸，这些技术只能定性和半定量检测，不能定量检测CLB。
发明内容
本发明针对现有的盐酸克伦特罗目前样品前处理复杂、检测时间长、需要大型仪器和传统免疫胶体金试纸条不能定量检测的缺陷，提出了一种免疫胶体金试纸及其配合光电传感器定量检测CLB的方法。本发明既达到定量检测的要求，还具有检测迅速、特异性强、操作简便、便于携带、可实现现场检测等优点，具有很好的应用前景。为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案本发明涉及一种免疫胶体金试纸条，包括玻璃纤维、胶体金保护垫、支撑板、NC膜 (硝酸纤维素膜)和吸水纸，所述吸水纸、NC膜、胶体金保护垫、玻璃纤维设置在所述支撑板上并依次相互部分重叠；所述支撑板上设有两个圆孔，所述NC膜上与所述支撑板上的两个圆孔相对应的圆形区域包被有CLB-BSA的T区条带和包被有羊抗鼠二抗的C区条带，所述胶体金保护垫含有胶体金标记的抗盐酸克伦特罗的抗体。所述免疫胶体金试纸条具体结构为以吸水纸为起始端，玻璃纤维为末端，支撑板位于底层，其上自起始端至末端依次为吸水纸、NC膜、胶体金保护垫和玻璃纤维，相邻两部分交界处部分重叠；所述C区条带靠近吸水纸端，所述T区条带靠近胶体金保护垫端。
优选的,所述支撑板为PVC板,所述圆孔为1cm。优选的，所述胶体金保护垫含有的抗盐酸克伦特罗抗体的体积为4 20 ii L。优选的，所述胶体金保护垫的制备方法如下a、制备胶体金溶液；b、将4 20ii L的抗盐酸克伦特罗的抗体加入ImL的Tris-HCl缓冲液中，混合搅拌过程中加入IOml胶体金溶液,搅拌10 60min后,用碳酸钾调pH大于8. 5,而后加入 100 200 ii L牛血清白蛋白(BSA)，静置、离心，弃上清液，用洗涤液洗涤，再离心一次，弃上清液，收集红色沉淀，将其均匀的滴加到保护垫上，即得。优选的，所述步骤a具体为在100 300mL蒸馏水中，加入1%的氯金酸100 500 u L，加热到沸腾时，再加入I %的柠檬酸三钠100 500 u L，继续加热到溶液呈紫红色后低温维持3 IOmin,即得。优选的，所述步骤b中洗涤剂由聚乙二醇200010 100 u L、碳酸钾100 300 U L、 聚乙烯二醇10 100 i! L和Tris-HCl缓冲液10 30ml配制而成。优选的，所述硝酸纤维素膜上包被的CLB-BSA和羊抗鼠二抗的体积为2 20 ii L。优选的，所述硝酸纤维素膜的制备方法如下a、制备 CLB-BSA ;b、在所述硝酸纤维素膜上与支撑板上两圆孔相对应的圆形区域均匀的滴加2 20 u L的羊抗鼠二抗和CLB-BSA，用封阻剂封闭20 60min，蒸馏水冲洗，取出自然晾干，即得。优选的，所述CLB-BSA制备方法如下取CLBlOmg，加入2mL预冷的0. 2mol/L盐酸至全部溶解，冷却至零度，30min后，加入120mg NaNO2溶液，然后将上述溶液加入4mL 0. lmol/L的碳酸盐缓冲液中，混匀后在零度静止lh，以S印hadexG50凝胶纯化，用pH7. 4 的0. 05mol/L的Tris-HCl缓冲液洗脱，_20°C保存备用；所述碳酸盐缓冲液中含有40mg的 BSA。优选的，所述封阻剂由I 10%脱脂奶粉2 10g/L和0. I 0. 5g/L的甘氨酸配制而成。本发明还涉及一种用前述的免疫胶体金试纸条和光电传感器定量检测盐酸克伦特罗(CLB)的方法，包括如下步骤a、经测试后的免疫胶体金试纸条，放在光电传感器的测试区内检测；b、光电型传感器将检测区域反射的光转换成电信号，根据电信号的强度，计算出 CLB的浓度。优选的，步骤a中所述测试后的免疫胶体金试纸条剪切成3cmX0. 9cm大小的条子后再进行检测。本发明的工作原理为用本发明的免疫胶体金试纸条检测盐酸克伦特罗时，当溶液中没有盐酸克伦特罗时，溶液会缓慢的往上层析，胶体金保护垫上的抗盐酸克伦特罗的抗体也会向上层析与硝酸纤维素膜上的抗原结合，在T区显现出条带，结合的抗体抗原会继续往上层析，当遇到二抗时，在C区也会出现一条条带。当溶液中有盐酸克伦特罗时，盐酸克伦特罗会和胶体金保护垫上的单抗竞争与硝酸纤维素膜上的抗原结合，就会在此处显示出没有或颜色较浅的条带，结合的抗体抗原也会继续往上层析，在二抗处也会显现出一条条带，可以定性和半定量检测靶物质；然后将显色后的试纸条剪切成尺寸为3X0. 9cm的条子，到光电型传感器上进行检测，光电型传感器的检测原理为光从光源发出投射到试纸条的测试区后被反射，反射光由电流频率转换器接收并转换为电信号进行传输，经过单片机的数据处理，最终显示在显示器上，且电信号的强度与试纸条的颜色深浅呈反比，光电型传感器读出光电信号值，根据电信号的强度，间接计算出盐酸克伦罗的浓度，从而克服传统免疫金试纸条只能定性和半定量检测的缺陷，实现定量检测盐酸克伦特罗。本发明与现有技术相比，具有如下有益效果I、制备方法简单，可以定量检测盐酸克伦特罗；制备的胶体金免疫试纸条的显色区域为直径为Icm的圆孔增大了显色面积；显色面积增大后，在光电型传感器上检测的准确度和灵敏度更高；2、本发明的方法靶物质针对性强，准确率高，检测速度快，显色后的免疫胶体金试纸条在光电型传感器上检测时间为2min，克服了传统免疫胶体金试纸条检测CLB的缺陷， 可满足出入境、海关和超市等部门机构定量检测CLB的要求；3、具有制备成本低、携带方便、操作简单不需要大型仪器设备等优点；对动物性产品、饲料和食品中盐酸克伦特罗的检测具有良好的应用前景。
图I为免疫胶体金试纸条检测盐酸克伦特罗的示意图；图2为免疫胶体金试纸条测试不同浓度的盐酸克伦特罗的颜色效果示意图；图3为光电型传感器的检测原理图；图4为光电型传感器的样机图；其中，1为PVC板,2为玻璃纤维,3为胶体金保护垫,4为硝酸纤维素膜,5为吸水纸，6为显示屏，7为测试区。
具体实施例方式下面对本发明的实施例作详细说明本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。以下实施例中用到的CLB-BSA的制备方法如下取CLBlOmg,加入2mL预冷的0. 2mol/L盐酸至全部溶解,冷却至零度,30min后,加 A 120mg NaNO2溶液，然后将上述溶液加入4mL 0. lmol/L的碳酸盐缓冲液中(含有40mg的 BSA)，混匀后在零度静止lh，以S印hadexG50凝胶纯化，用pH7. 4的0. 05mol/L的Tris-HCl 缓冲液洗脱，_20°C保存备用。实施例I本实施例的免疫胶体金试纸条的制备及其和光电型传感器相结合定量检测盐酸克伦特罗的方法步骤如下(I)胶体金溶液的制备首先所需要的实验仪器酸泡12h，制备胶体金溶液，用量筒量取IOOmL的蒸馏水， 加入I %氯金酸IOOiI L，加热到沸腾时，再加入I %的柠檬酸三钠IOOiI L，加热到溶液呈紫红色，关小火再烧3min即可。(2)胶体金保护垫的制作用干净的移液管吸取IOmL的胶体金溶液到小烧杯中，吸取4 ii L的抗体加入ImL 的Tris-HCl缓冲液中，将其混合液在搅拌的过程中加入胶体金溶液中，等IOmin后，用碳酸钾调PH大于8. 5，等一段时间后，加入BSA100 u L，等一段时间之后，将其均匀分装到6个离心管中离心，弃其上清液，用洗涤剂(吸取聚乙二醇2000 10 iiL、碳酸钾IOOii L、聚乙烯二醇10 u L，Tris-HCl缓冲液IOmL配制成洗涤剂)洗漆，再离心一次，弃掉上清液，收集红色沉淀，将其均匀的滴加到胶体金保护垫上。(3)在硝酸纤维素膜的圆孔处滴加二抗和抗原将硝酸纤维素膜在封阻剂(取1%脱脂奶粉2g/L，加入0. lg/L的甘氨酸，配制成封阻剂)中摇晃lOmin，用圆规在硝酸纤维素膜上制作两个直径为Icm的圆孔用洗液抢吸取L的羊抗鼠二抗和CLB-BSA偶联物均匀的滴加到制作的圆孔处，用封阻剂进行封闭 20min,蒸馏水反复冲洗三次，取出自然晾干，备用。(4)胶体金免疫试纸条的组装取一定长度的PVC板I，采用机械冲压打孔法，在PVC板I上中部等距离制作两个直径为Icm的圆孔，对齐将硝酸纤维素膜4黏贴上(所述硝酸纤维素膜4上与所述PVC板 I上的两个圆孔相对应的圆形区域包被有CLB-BSA的T带和包被有羊抗鼠二抗的C带，C带靠近吸水纸5端，T带靠近胶体金保护垫3端)；在硝酸纤维素膜4上部的一侧粘贴上吸水纸5，该吸水纸5与硝酸纤维素膜4部分重叠；在硝酸纤维素膜4上部相对于吸水纸5而言的另一侧粘贴上胶体金保护垫3，该胶体金保护垫3与硝酸纤维素膜4部分重叠；在胶体金保护垫3上相对于硝酸纤维素膜4而言的另一侧贴上玻璃纤维2，该玻璃纤维2与胶体金保护垫3部分重叠(如图I所示)。配制不同浓度的CLB标准液进行检测如图2所示，当无盐酸克伦特罗时，T带颜色较深，判断为阴性；而控制线(C带)应一直显色(a);相反，在有盐酸克伦特罗的情况下，盐酸克伦特罗首先会与金标垫上的单抗形成复合物，从而与NC膜上的CLB-BSA偶联物形成竞争，抑制CLB-BSA偶联物捕获盐酸克伦特罗金标单抗的量，T带较浅(b)或消失(C)，判断为阳性，因为二抗结合盐酸克伦特罗抗体的其它结合位点，与盐酸克伦特罗的存在没有关系；所以随着盐酸克伦特罗浓度的增加，试纸条在检测带上的颜色会越来越浅。(5)结合光电型传感器定量检测盐酸克伦特罗将显色后的试纸条剪切成尺寸为3X0. 9cm的条子，到光电型传感器上进行检测
O。光电型传感器的检测原理图如图3所示，光电型传感器的样机如图4所示从光源发出投射到试纸条的测试区7后被反射，反射光由电流频率转换器接收并转换为电信号进行传输，经过单片机的数据处理，最终显示在显示屏6上，且电信号的强度与试纸条的颜色深浅呈反比，从而克服传统免疫金试纸条只能定性和半定量检测的缺陷，可以达到定量进行检测，一般肉眼观测不到的颜色，光电型传感器也读出光电信号值，根据电信号的强度，间接计算出盐酸克伦罗的浓度，从而可以定量检测盐酸克伦特罗。实施例2本实施例的免疫胶体金试纸条的制备及其和光电型传感器相结合定量检测盐酸克伦特罗的方法步骤如下
(I)胶体金溶液的制备在制备免疫胶体金试纸条之前，把所需要的实验仪器酸泡15h，首选制备胶体金溶液，用量筒量取200mL的蒸馏水，加入1%氯金酸200 iiL，加热到沸腾时，再加入1%的柠檬酸三钠300 ii L，加热到溶液呈紫红色，关小火再烧5min即可。(2)胶体金保护垫的制作用干净的移液管吸取IOmL的胶体金溶液到小烧杯中，吸取10 ii L的抗体加入ImL 的Tris-HCl缓冲液中，将其混合液在搅拌的过程中加入胶体金溶液中，等30min后，用碳酸钾条PH大于8. 5，等一段时间后，加入BSA150 u L，等一段时间之后，将其均匀分装到6个离心管中离心，弃其上清液，用洗涤剂(吸取聚乙二醇2000 40111、碳酸钾160111、聚乙烯二醇40 u L，Tris-HCl缓冲液16mL配制成洗涤剂)洗漆，再离心一次，弃掉上清液，收集红色沉淀，将其均匀的滴加到胶体金保护垫上。(3)在硝酸纤维素膜的圆孔处滴加二抗和抗原将硝酸纤维素膜在封阻剂(取4%脱脂奶粉4g/L，加入0. 3g/L的甘氨酸，配制成封阻剂)中摇晃20min，用圆规在硝酸纤维素膜上制作两个直径为Icm的圆孔用洗液抢吸取IOy L的羊抗鼠二抗和CLB-BSA偶联物均匀的滴加到制作的圆孔处，用封阻剂进行封闭 30min,蒸馏水反复冲洗三次，取出自然晾干，备用。(4)胶体金免疫试纸条的组装取一定长度的PVC板，采用机械冲压打孔法，在PVC板上中部等距离制作两个直径为Icm的圆孔，对齐将硝酸纤维素膜黏贴上(所述硝酸纤维素膜上与所述PVC板上的两个圆孔相对应的圆形区域包被有CLB-BSA的T区条带和包被有羊抗鼠二抗的C区条带，C区条带靠近吸水纸端，T区条带靠近胶体金保护垫端)；在硝酸纤维素膜上部的一侧粘贴上吸水纸，该吸水纸与硝酸纤维素膜部分重叠；在硝酸纤维素膜上部相对于吸水纸而言的另一侧粘贴上胶体金保护垫，该胶体金保护垫与硝酸纤维素膜部分重叠；在胶体金保护垫上相对于硝酸纤维素膜而言的另一侧贴上玻璃纤维，该玻璃纤维与胶体金保护垫部分重叠。配制不同浓度的CLB标准液进行检测。(5)结合光电型传感器定量检测盐酸克伦特罗将显色后好的试纸条剪切成尺寸为3X0. 9cm的条子，放到光电型传感器上进行检测，光电型传感器产生电信号强度与试纸条的颜色深浅呈反比，一般肉眼观测不到的颜色，光电型传感器也读出光电信号值，根据电信号的强度，间接计算出盐酸克伦罗的浓度， 从而可以定量检测盐酸克伦特罗。实施例3本实施例的免疫胶体金试纸条的制备及其和光电型传感器相结合定量检测盐酸克伦特罗的方法步骤如下(I)胶体金溶液的制备在制备免疫胶体金试纸条之前，把所需要的实验仪器酸泡20h，首选制备胶体金溶液，用量筒量取IOOmL的蒸馏水，加入1%氯金酸400 iiL，加热到沸腾时，再加入1%的柠檬酸三钠500 y L，加热到溶液呈紫红色，关小火再烧10分钟即可。(2)胶体金保护垫的制作用干净的移液管吸取IOmL的胶体金溶液到小烧杯中，吸取15 ii L的抗体加入ImL的Tris-HCl缓冲液中，将其混合液在搅拌的过程中加入胶体金溶液中，等50min后，用碳酸钾条PH大于8. 5，等一段时间后，加入牛血清白蛋白(BSA) 150 u L，等一段时间之后，将其均匀分装到6个离心管离心，弃其上清液，用洗涤剂(吸取聚乙二醇200070ii L、碳酸钾 220 u L、聚乙烯二醇70 u L，Tris-HCl缓冲液22mL配制成洗涤剂)洗涤，再离心一次，弃掉上清液，收集红色沉淀，将其均匀的滴加到胶体金保护垫上。(3)在硝酸纤维素膜的圆孔处滴加二抗和抗原将硝酸纤维素膜在封阻剂(取7%脱脂奶粉8g/L，加入0. 4g/L的甘氨酸，配制成封阻剂)中摇晃40min，用圆规在硝酸纤维素膜上制作两个直径为Icm的圆孔用洗液抢吸取15y L的羊抗鼠二抗和CLB-BSA偶联物均匀的滴加到制作的圆孔处，用封阻剂进行封闭 50min，蒸馏水冲洗，取出自然晾干，备用。(4)胶体金免疫试纸条的组装取一定长度的PVC板，采用机械冲压打孔法，在PVC板上中部等距离制作两个直径为Icm的圆孔，对齐将硝酸纤维素膜黏贴上(所述硝酸纤维素膜上与所述PVC板上的两个圆孔相对应的圆形区域包被有CLB-BSA的T区条带和包被有羊抗鼠二抗的C区条带，C区条带靠近吸水纸端，T区条带靠近胶体金保护垫端)；在硝酸纤维素膜上部的一侧粘贴上吸水纸，该吸水纸与硝酸纤维素膜部分重叠；在硝酸纤维素膜上部相对于吸水纸而言的另一侧粘贴上胶体金保护垫，该胶体金保护垫与硝酸纤维素膜部分重叠；在胶体金保护垫上相对于硝酸纤维素膜而言的另一侧贴上玻璃纤维，该玻璃纤维与胶体金保护垫部分重叠。配制不同浓度的CLB标准液进行检测。(5)结合光电型传感器定量检测盐酸克伦特罗将显色后的试纸条剪切成尺寸为3X0. 9cm的条子，放到光电型传感器上进行检测，光电型传感器产生的电信号的强度与试纸条的颜色深浅呈反比，一般肉眼观测不到的颜色，光电型传感器也读出光电信号值，根据电信号的强度，间接计算出盐酸克伦罗的浓度，从而可以定量检测盐酸克伦特罗。实施例4本实施例的免疫胶体金试纸条的制备及其和光电型传感器相结合定量检测盐酸克伦特罗的方法步骤如下(I)胶体金溶液的制备在制备免疫胶体金试纸条之前，把所需要的实验仪器酸泡24h，首选制备胶体金溶液，用量筒量取300mL的蒸馏水，加入1%氯金酸500 iiL，加热到沸腾时，再加入1%的柠檬酸三钠400 u L，加热到溶液呈紫红色，关小火再烧8分钟即可。(2)胶体金保护垫的制作用干净的移液管吸取IOmL的胶体金溶液到小烧杯中，吸取20 ii L的抗体加入ImL 的Tris-HCl缓冲液中，将其混合液在搅拌的过程中加入胶体金溶液中，等60min后，用碳酸钾调PH大于8. 5，等一段时间后，加入牛血清白蛋白(BSA) 200 u L，等一段时间之后，将其均匀分装到6个离心管中离心，弃其上清液，用洗涤剂(吸取聚乙二醇2000100U L、碳酸钾 300 u L、聚乙烯二醇100 u L，Tris-HCl缓冲液30mL配制成洗涤剂)洗涤，再离心一次，弃掉上清液，收集红色沉淀，将其均匀的滴加到胶体金保护垫上。(3)在硝酸纤维素膜的圆孔处滴加二抗和抗原
将硝酸纤维素膜在封阻剂(取10%脱脂奶粉10g/L，加入0. 5g/L的甘氨酸，配制成封阻剂)中摇晃60min，用圆规在硝酸纤维素上面制作两个直径为Icm的圆孔用洗液抢吸取20y L的羊抗鼠二抗和CLB-BSA偶联物均匀的滴加到制作的圆孔处，用封阻剂进行封闭 60min，蒸馏水冲洗，取出自然晾干，备用。(4)胶体金免疫试纸条的组装取一定长度的PVC板，采用机械冲压打孔法，在PVC板上中部等距离制作两个直径为Icm的圆孔，对齐将硝酸纤维素膜黏贴上(所述硝酸纤维素膜上与所述PVC板上的两个圆孔相对应的圆形区域包被有CLB-BSA的T区条带和包被有羊抗鼠二抗的C区条带，C区条带靠近吸水纸端，T区条带靠近胶体金保护垫端)；在硝酸纤维素膜上部的一侧粘贴上吸水纸，该吸水纸与硝酸纤维素膜部分重叠；在硝酸纤维素膜上部相对于吸水纸而言的另一侧粘贴上胶体金保护垫，该胶体金保护垫与硝酸纤维素膜部分重叠；在胶体金保护垫上相对于硝酸纤维素膜而言的另一侧贴上玻璃纤维，该玻璃纤维与胶体金保护垫部分重叠。配制不同浓度的CLB标准液进行检测。(5)结合光电型传感器定量检测盐酸克伦特罗将显色后的试纸条剪切成尺寸为3X0. 9cm的条子，放到光电型传感器上进行检测，光电型传感器产生的电信号强度与试纸条的颜色深浅呈反比，一般肉眼观测不到的颜色，光电型传感器也读出光电信号值，根据电信号的强度，间接计算出盐酸克伦罗的浓度， 从而可以定量检测盐酸克伦特罗。综上所述，本发明靶物质针对性强，准确率高，检测速度快，显色后的免疫胶体金试纸条在光电型传感器上检测时间为2min，克服了传统免疫胶体金试纸条检测CLB的缺陷，实现了定量检测盐酸克伦特罗，同时还具有检测迅速、特异性强、操作简便、便于携带、 可实现现场检测等优点，可满足出入境、海关和超市等部门机构定量检测CLB的要求，具有很好的应用前景。
权利要求
1.一种免疫胶体金试纸条，包括玻璃纤维、胶体金保护垫、支撑板、NC膜和吸水纸，其特征在于，所述吸水纸、NC膜、胶体金保护垫、玻璃纤维设置在所述支撑板上并依次相互部分重叠；所述支撑板上设有两个圆孔，所述NC膜上与所述支撑板上的两个圆孔相对应的圆形区域包被有CLB-BSA的T区条带和包被有羊抗鼠二抗的C区条带，所述胶体金保护垫含有胶体金标记的抗盐酸克伦特罗的抗体。
2.根据权利要求I所述的免疫胶体金试纸条，其特征在于，所述支撑板为PVC板，所述圆孔为1cm。
3.根据权利要求2所述的免疫胶体金试纸条，其特征在于，所述胶体金保护垫含有的抗盐酸克伦特罗抗体的体积为4 20 μ L。
4.根据权利要求3所述的免疫胶体金试纸条，其特征在于，所述胶体金保护垫的制备方法如下a、制备胶体金溶液；b、将4 20μ L的抗盐酸克伦特罗的抗体加入ImL的Tris-HCl缓冲液中，混合搅拌过程中加入IOml胶体金溶液,搅拌10 60min后,用碳酸钾调pH大于8. 5,而后加入100 200 μ L BSA,静置、离心，弃上清液，用洗涤液洗涤，再离心一次，弃上清液，收集红色沉淀， 将其均匀的滴加到保护垫上，即得。
5.根据权利要求4所述的免疫胶体金试纸条，其特征在于，所述步骤a具体为在 100 300mL蒸馏水中，加入I %的氯金酸100 500 μ L，加热到沸腾时，再加入1%的柠檬酸三钠100 500 μ L，继续加热到溶液呈紫红色后低温维持3 lOmin，即得。
6.根据权利要求4或5所述的免疫胶体金试纸条，其特征在于，所述步骤b中洗涤剂由聚乙二醇2000 10 100 μ L、碳酸钾100 300 μ L、聚乙烯二醇10 100 μ L和Tris-HCl 缓冲液10 30ml配制而成。
7.根据权利要求2所述的免疫胶体金试纸条，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上包被的CLB-BSA和羊抗鼠二抗的体积为2 20 μ L。
8.根据权利要求7所述的免疫胶体金试纸条，其特征在于，所述硝酸纤维素膜的制备方法如下a、制备CLB-BSA ；b、在所述硝酸纤维素膜上与支撑板上两圆孔相对应的圆形区域均匀的滴加2 20μ L 的羊抗鼠二抗和CLB-BSA，用封阻剂封闭20 60min，蒸馏水冲洗，取出自然晾干，即得。
9.根据权利要求8所述的免疫胶体金试纸条，其特征在于，所述CLB-BSA制备方法如下取CLBlOmg,加入2mL预冷的O. 2mol/L盐酸至全部溶解,冷却至零度，30min后，加入 120mg NaNO2溶液，然后将上述溶液加入4mL O. lmol/L的碳酸盐缓冲液中，混匀后在零度静止Ih,以SephadexG50凝胶纯化，用ρΗ7· 4的O. 05mol/L的Tris-HCl缓冲液洗脱，_20°C保存备用；所述碳酸盐缓冲液中含有40mg的BSA。
10.根据权利要求8或9所述的免疫胶体金试纸条，其特征在于，所述封阻剂由I 10%脱脂奶粉2 10g/L和O. I O. 5g/L的甘氨酸配制而成。
11.一种用如权利要求I所述的免疫胶体金试纸条和光电传感器定量检测CLB的方法， 其特征在于，包括如下步骤a、经测试后的免疫胶体金试纸条，放在光电传感器的测试区内检测；b、光电型传感器将检测区域反射的光转换成电信号，根据电信号的强度，计算出CLB 的浓度。
12.根据权利要求11所述免疫胶体金试纸条和光电传感器定量检测CLB的方法，其特征在于，步骤a中所述测试后的免疫胶体金试纸条剪切成3cmX0. 9cm大小的条子后再进行检测。
全文摘要
本发明公开了一种免疫胶体金试纸及其配合光电传感器定量检测CLB的方法。该免疫胶体金试纸条包括设置在支撑板上并依次相互部分重叠的吸水纸、NC膜、胶体金保护垫、玻璃纤维；所述支撑板上设有两个圆孔，所述NC膜上与所述支撑板上的两个圆孔相对应的圆形区域包被有CLB-BSA的T区条带和包被有羊抗鼠二抗的C区条带，所述胶体金保护垫含有胶体金标记的抗盐酸克伦特罗的抗体。本发明定量检测CLB的方法，步骤如下经测试后的免疫胶体金试纸条，放在光电传感器的测试区内检测；光电型传感器将检测区域反射的光转换成电信号，根据电信号的强度，计算出CLB的浓度。本发明具有能够定量检测、检测迅速、特异性强、操作简便、便于携带等优点。
文档编号G01N21/27GK102590518SQ20121002788
公开日2012年7月18日 申请日期2012年2月8日 优先权日2012年2月8日
发明者刘国艳, 尹璐, 张洪才, 柴春彦 申请人:上海交通大学