专利名称：干制鱼中敌百虫的含量测定方法
技术领域：
本发明属于敌百虫的含量测定领域，适用于干制鱼中敌百虫残留量的检测。
背景技术：
敌百虫是高效、低毒及低残留的杀虫剂。对鱼体内外寄生的吸虫、线虫、棘头虫及危害鱼苗、鱼卵的枝角类、桡角类、蛘钩介幼虫和水蜈蚣等均有良好的杀灭作用。但由于敌百虫在弱碱性条件下，可形成残毒性更大的敌敌畏，当PH值为8 10时，敌百虫转变成敌敌畏仅需半小时。因此，不但要顾及鱼虾的毒性效应，而且对人、畜的安全也不可忽视。近年来，我国曾多次发现有不法商贩使用敌百虫加工咸鱼，给人们的身体健康和生命安全带来了极大的安全隐患。针对这一现象，我们建立了干制鱼中敌百虫的测定方法。该方法可准确检测干制鱼中的敌百虫，能够为餐饮食品安全风险监测提供技术支撑。针对样品的差异性，各行业对于敌百虫的检测标准也存在差异，涉及的方法包括液相色谱法、气相色谱法、液相色谱-质谱联用法等方法。目前主要的现有技术是以下2个
I、农业部783号公告-3-2006水产品中敌百虫残留量的测定；农业部783号公告-3-2006的测定方法是用乙腈提取干鱼中的敌百虫，通过乙酸锌去脂和三氯甲烷萃取后，直接用气相色谱测定。处理后的样品溶液中杂质很多，气相色谱图中出现很多杂峰，对测定有干扰。且样品溶液中仍保留有大量油脂类成分，不易挥发，累积在进样口，会污染衬管等进样系统，易对测定造成交叉污染。2、SNT 1920-2007的测定方法只针对鲜肉、肠衣和蜂蜜中敌百虫的测定，通过二氯甲烷提取敌百虫后，浓缩至干，用乙腈溶解残渣后，加少量环己烷去脂。同样存在较多杂质干扰，且液质联用仪运行成本高，流动相所需大量有机溶剂易对环境造成污染。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明旨在提供干制鱼中敌百虫的含量测定方法，可以准确、快速的检测出干鱼中敌百虫的含量，且降低样品中油脂类物质对测定的干扰，减少了出现假阳性结果的几率。为实现上述目的，本发明的技术方案是—种干制鱼中敌百虫的含量测定方法，包括以下步骤I)标准曲线的制备；2)供试品溶液的制备①预处理取干鱼绞碎混匀，得预处理后的样品，备用；②提取a、取预处理后的样品，先加入乙酸锌，再加入乙腈水溶液均质，离心，上清液转移至分液漏斗中；b、离心管中残渣重复步骤a 1-2次，合并上清液于同一分液漏斗中，加硫酸钠水溶液，震荡混匀；c、在上述上清液中加入三氯甲烷，剧烈振摇后，静置分层；d、重复2-3次c步骤，合并下层液体，得下层三氯甲烷液；③浓缩将下层三氯甲烷液通过无水硫酸钠柱流至浓缩瓶中，浓缩至干；
④净化加入乙腈溶解残留物，加入乙腈饱和的正己烷，涡旋振荡2-3分钟，置冰箱中冷冻保存2-3小时，低温离心2-3分钟，取上清液，即得供试品溶液；3)用气质联用方法对供试品溶液进行检测。其中，所述步骤2)供试品溶液的制备优选为①预处理取干鱼，绞碎，混匀，得预处理后的样品，备用；②提取a、取预处理后的样品5g，置50ml离心管中，加入乙酸锌O. 5g，再加入乙腈水溶液18-29mL,均质仪均质lmin, 4000r/min离心3min,上清液转移至250ml分液漏斗中；b、离心管中残渣重复以上操作a—次，合并提取液于同一 250ml分液漏斗中；c、加20g/L硫酸钠水溶液IOOmL,震荡混匀，加入30mL三氯甲烷，剧烈振摇3min，静置分层；d、重复2_3次c步骤，合并下层液体，得下层三氯甲烷液；③浓缩将下层三氯甲烷液通过无水硫酸钠柱流至250mL浓缩瓶中，用旋转蒸发器浓缩至干；④净化定量加入ImL乙腈溶解残留物，加入2mL乙腈饱和的正己烷，涡旋振荡2分钟，置冰箱中冷冻保存2小时，10000r/min低温离心3分钟，取上清液，即得供试品溶液。其中，所述步骤3)所述用气质联用方法对供试品溶液进行检测的检测条件优选为色谱柱DB_5MS毛细管柱；进样口温度200°C -220°C ;接口温度250°C -260°C ；离子源温度220°C -230°C;四极杆温度145°C _155°C，电子能量65eV_75eV ;载气N2，流速为0. 8ml/min-l. 5ml/min,脉冲不分流进样；进样量1 μ 1-1. 5 μ I ；升温程序为从40 V -50 °C起，保留2-3分钟，以8 °C /min-15 V /min升至1650C _175°C，保留 1-3 分钟，再以 15。。/min_25°C /min 升至 198°C _205°C，保留 2-4 分钟。所述检测条件更优选为色谱柱DB_5MS毛细管柱；进样口温度200°C ;接口温度260°C;离子源温度230°C;四极杆温度150°C，电子能量70eV ;载气=N2，流速为I. Oml/min,脉冲不分流进样；进样量1 μ I ;升温程序为从50°C起，保留2分钟，以10°C /min升至170°C，保留I分钟，再以200C /min升至200。。，保留3分钟。下面对本发明做进一步解释和说明原理试样中敌百虫经三氯甲烷提取，提取液浓缩、脱脂、净化后，用气相色谱法-质谱联用仪测定，外标峰面积法定量，子离子丰度比定性。干鱼经预处理、提取、浓缩后，因三氯甲烷的极性与油脂类成分接近，所以供试品溶液中仍存在大量油脂类成分。经净化步骤后，因正己烷极性比乙腈弱很多，油脂类成分会进入正己烷层，达到净化的效果。供试品溶液去掉油脂类杂质后，色谱图的杂峰会少很多(见图2)，避免了杂峰对测定造成干扰。且油脂类成分不易挥发，若不去除，则会累积在进样口，污染衬管等进样系统，对测定造成交叉污染。与现有技术相比，本发明的优势在于I、增加了前处理过程中的净化步骤，增加了前处理过程中的净化步骤，大大降低了样品中油脂类物质对测定的干扰，减少了出现假阳性结果的几率，且采用气质联用方法检测，定性准确，检测灵敏度高。、
2、采用了气质联用法检测敌百虫的方法，这是现有标准体系中没有的。
图I是实施例I的标准曲线；图2、敌百虫的气相色谱-质谱联用图，其中I是亚磷酸二甲酯；2是敌敌畏。
具体实施例方式为了更好的理解本发明，下面结合实施例对本发明做进一步地详细说明。实施例I : I试剂和材料I. I液体试剂乙腈(色谱纯)、三氯甲烷(色谱纯)、乙酸乙酯(色谱纯)、正己烷(农残级)I. 2固体试剂无水硫酸钠(分析纯)、乙酸锌(分析纯)I. 3纯化水I. 4实验用具进样瓶、离心管(50ml)、精密可调移液枪(100 1000μ1、10 100 μ I)、容量瓶、浓缩瓶(250ml)、分液漏斗(250ml)I. 5标准品敌百虫纯度均在98. 0%以上2仪器及分析条件2. IAgilent 7890N/5975C 气相色谱 / 质谱联用仪2. 2旋转蒸发仪2. 3均质仪2. 4涡旋混匀器2. 5 离心机(5000r/min)2. 6天平精度10mg/0. Olmg,作供试品称量用和作标准品称量用3试样制备与保存3. I标准品溶液的制备3. I. I标准品储备液取敌百虫标准品约10mg，精密称重，置20ml容量瓶中，用乙酸乙酯配制成浓度为500μ g/ml的标准储备液。根据需要再用乙酸乙酯稀释成适当浓度的标准工作液。3. I. 2标准曲线取空白样品，取样9份，每份5g，分别加入适当浓度的标准工作液
O.01、0· 02、0· 05、0· 1、0· 2、0· 5、1· 0ml，按供试品溶液制备的方法，从“加入O. 5g乙酸锌”开始，制成系列标准溶液，注入气质联用仪，测定。标准曲线如图I所示。3. 2供试品溶液的制备①预处理取干鱼，绞碎，混匀，备用；②提取a、取预处理后的样品5g，置50ml离心管中，加入乙酸锌O. 5g，再加入乙腈水溶液18-29mL,均质仪均质lmin, 4000r/min离心3min,上清液转移至250ml分液漏斗中；b、离心管中残渣重复以上操作a—次，合并提取液于同一 250ml分液漏斗中；c、加20g/L硫酸钠水溶液IOOmL,震荡混匀，加入30mL三氯甲烷，剧烈振摇3min，静置分层；d、重复2_3次c步骤，合并下层液体，得下层三氯甲烷液；
③浓缩将下层三氯甲烷液通过无水硫酸钠柱流至250mL浓缩瓶中，用旋转蒸发器浓缩至干；④净化定量加入ImL乙腈溶解残留物，加入2mL乙腈饱和的正己烷，涡旋振荡2分钟，置冰箱中冷冻保存2小时，10000r/min低温离心3分钟，取上清液，即得供试品溶液。3. 3加样样品溶液的制备 每次供试品溶液的制备时，应随行做一批样品的加样回收，加入上述标准工作液O. 1ml，按供试品溶液制备的方法，从“加入O. 5g乙酸锌”开始，制成加样样品溶液，注入气质联用仪，测定。各农药的回收率范围应在70% 120%内。如回收率达不到要求，本次所提取样品应全部重做(随行回收的目的在于实时监控本次实验的操作，使实验结果更为真实可靠。若回收率低于70%，则很可能样品前处理过程中损失；若回收率高于120%，则样品基质对测定结果有干扰或操作失误)。3. 4干扰试验作总试剂表的空白实验，按上述供试品溶液制备的方法，从“加入
0.5g乙酸锌”开始，制成空白对照溶液。空白对照应无干扰。4 测试使用仪器及色谱条件Agilent 7890N/5975C气相色谱/质谱联用仪；质谱仪为四极杆质谱仪，选择离子监测(监测离子详见表1，各农药组分监测的特征离子详见表2)。DB-5MS毛细管柱(柱长30m，内径O. 25mm，膜厚度O. 25 μ m);载气高纯氦气，恒流，流速为
1.Oml/min ;脉冲不分流进样，进样量I μ I。进样口温度20(TC，接口温度260°C，离子源温度为230°C，四极杆温度为150°C，电子能量70eV。升温程序从50°C起，保留2分钟，以10°C /min升至170°C，保留I分钟，再以200C /min升至200。。，保留3分钟。表I监测离子
权利要求
1.一种干制鱼中敌百虫的含量测定方法，其特征是，包括以下步骤 1)标准曲线的制备； 2)供试品溶液的制备 ①预处理取干鱼绞碎混匀，得预处理后的样品，备用； ②提取a、取预处理后的样品，先加入乙酸锌，再加入乙腈水溶液均质，离心，上清液转移至分液漏斗中；b、离心管中残渣重复步骤a 1-2次，合并上清液于同一分液漏斗中，加硫酸钠水溶液，震荡混匀；c、在上述上清液中加入三氯甲烷，剧烈振摇后，静置分层；d、重复2-3次c步骤，合并下层液体，得下层三氯甲烷液； ③浓缩将下层三氯甲烷液通过无水硫酸钠柱流至浓缩瓶中，浓缩至干； ④净化加入乙腈溶解残留物，加入乙腈饱和的正己烷，涡旋振荡2-3分钟，置冰箱中冷冻保存2-3小时，低温离心2-3分钟，取上清液，即得供试品溶液； 3)用气质联用方法对供试品溶液进行检测。
2.根据权利要求I所述一种干制鱼中敌百虫的含量测定方法，其特征是，所述步骤2)供试品溶液的制备为 ①预处理取干鱼，绞碎，混匀，得预处理后的样品，备用； ②提取a、取预处理后的样品5g,置50ml离心管中，加入乙酸锌O.5g,再加入乙腈水溶液18-29mL,均质仪均质lmin, 4000r/min离心3min,上清液转移至250ml分液漏斗中；b、离心管中残渣重复以上操作a—次，合并提取液于同一 250ml分液漏斗中；c、加20g/L硫酸钠水溶液IOOmL,震荡混匀，加入30mL三氯甲烷，剧烈振摇3min，静置分层；d、重复2_3次c步骤，合并下层液体，得下层三氯甲烷液； ③浓缩将下层三氯甲烷液通过无水硫酸钠柱流至250mL浓缩瓶中，用旋转蒸发器浓缩至干； ④净化定量加入ImL乙腈溶解残留物，加入2mL乙腈饱和的正己烷，涡旋振荡2分钟，置冰箱中冷冻保存2小时，10000r/min低温离心3分钟，取上清液，即得供试品溶液。
3.根据权利要求I或2所述一种干制鱼中敌百虫的含量测定方法，其特征是，所述步骤3)所述用气质联用方法对供试品溶液进行检测的检测条件为 色谱柱DB-5MS毛细管柱；进样口温度20(TC -220°C ;接口温度250°C -260°C ;离子源温度220°C -230°C ;四极杆温度145°C -155°C,电子能量65eV_75eV ;载气N2，流速为0. 8ml/min-l. 5ml/min,脉冲不分流进样；进样量1 μ 1-1. 5 μ I ； 升温程序为从40 V -50 V起，保留2-3分钟，以8 °C /min-15 V /min升至1650C _175°C，保留 1-3 分钟，再以 15。。/min_25°C /min 升至 198°C _205°C，保留 2-4 分钟。
4.根据权利要求3所述一种干制鱼中敌百虫的含量测定方法，其特征是，所述检测条件为色谱柱DB-5MS毛细管柱；进样口温度200°C ;接口温度260°C ;离子源温度230°C ；四极杆温度150°C，电子能量70eV ;载气N2，流速为I. 0ml/min，脉冲不分流进样；进样量Iμ I ； 升温程序为从50°C起，保留2分钟，以10°C /min升至170°C，保留I分钟，再以20°C /min升至200°C，保留3分钟。
全文摘要
本发明属于敌百虫的含量测定领域，提供了一种干制鱼中敌百虫的含量测定方法，具体包括以下步骤1)标准曲线的制备；2)供试品溶液的制备①预处理②提取③浓缩④净化3)用气质联用方法对样品进行检测。与现有技术相比，本发明的优势在于供试品溶液的制备，主要是增加了前处理过程中的净化步骤，大大降低了样品中油脂类物质对测定的干扰，减少了出现假阳性结果的几率，且采用气质联用方法检测敌百虫，定性准确，检测灵敏度高。
文档编号G01N30/88GK102628844SQ20121010147
公开日2012年8月8日 申请日期2012年4月9日 优先权日2012年4月9日
发明者刘雁鸣, 吴公平, 廖彬, 林海, 殷帅 申请人:湖南省食品药品检验研究院