专利名称：一种酶学检测方法
技术领域：
本发明涉及医学检验技术领域，特别涉及一种利用ATP化学发光法来检测的酶学检测方法。
背景技术：
非对称二甲基精氨酸(Asymmetric dimethylarginine, ADMA)是甲基化蛋白质降解产物，它是一氧化氮合酶抑制剂，能竞争性的抑制一氧化氮合酶的活性，减少一氧化氮生成，并可直接诱导氧化应激，作为内源性舒张因子，一氧化氮具有舒张血管的功能，在心血管系统的疾病中发挥着重要作用。ADMA广泛存在于人组织、细胞、血浆、尿液中，主要由细胞内的蛋白质在精氨酸甲基转移酶的作用下发生甲基化，再经过水解反应生成，其人体内80 %的ADMA经二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)代谢灭活ADMA，只有很少部分以原型形式经肾脏排出体外,所以以DDAH降解ADMA成为体内代谢的主要形式。瓜氨酸是一种α氨基酸，是从鸟氨酸及胺基甲醢磷酸盐在尿素循环中生成，或是透过一氧化氮合酶(NOS)催化生成精氨酸的副产物，体内瓜氨酸的含量与多种疾病相关。目前国内外很多研究表明，ADMA的含量和很多疾病像冠心病，高脂血压，原发性高血压等密切相关，ADMA已被公认为是一种新的心血管疾病危险因子。ADMA还与脏器功能衰竭密切相关，肾脏功能损伤可使ADMA降解下降和代谢降低。ADMA在体内的含量已成为诊断疾病的指示因子，因此建立ADMA新的检测方法具有非常重要的意义。目前ADMA主要通过高压液相和酶联免疫法(如CN102243227A的发明)等手段进行检测，但其操作复杂、耗时较长、价格昂贵、需要特殊的仪器设备，不能应用于临床大流量的自动化分析，因此探索新的ADMA检测方法就非常必要。ATP生物化学发光法检测灵敏、简单且准确性高，常常被用来检测低浓度的ΑΤΡ，已在食品卫生等领域得到广泛应用。传统的ATP检测试剂盒检测的最低浓度为0.01 pmol/L，而正常人血清中ADMA的浓度大约为0.1-1 μ mol/L，因此用化学发光法可以为检测ADMA提供一种可能的新方法，具有极高的科学价值和经济价值。
发明内容
本发明的目的在于克服现有的检测非对称二甲基精氨酸测定方法耗时，操作复杂，需要特殊仪器，不能应用于临床大流量的自动化分析，且价格昂贵等缺陷，而提供一种酶学检测方法，该方法具有检测灵敏、迅速、准确性高、且价格便宜等特点，可实现低浓度的非对称二甲基精氨酸和瓜氨酸等的检测，适合检测生理浓度的非对称二甲基精氨酸，使临床应用成为可能，具有较好的科学价值和经济价值。本发明的检测方法同时还能检测瓜氨酸、精氨酸、二甲基精氨酸二甲胺水解酶、鸟氨酸氨基甲酰转移酶、精氨酸脱亚胺酶等的浓度。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:
一种酶学检测方法，检测待测样本中瓜氨酸经鸟氨酸氨基甲酰转移酶和氨基甲酰磷酸激酶偶联反应后生成的ATP，并换算成目标检测物的浓度。本发明的待测样本可以为尿液，血清，血浆，脑脊液，唾液等。本发明的检测反应原理如下:
权利要求
1.一种酶学检测方法，其特征在于:检测待测样本中瓜氨酸经鸟氨酸氨基甲酰转移酶和氨基甲酰磷酸激酶偶联反应后生成的ATP，并换算成目标检测物的浓度。
2.根据权利要求1所述的一种酶学检测方法，其特征在于:所述目标检测物为瓜氨酸、非对称二甲基精氨酸、精氨酸、二甲基精氨酸二甲胺水解酶、鸟氨酸氨基甲酰转移酶或精氨酸脱亚胺酶。
3.根据权利要求2所述的一种酶学检测方法，其特征在于:所述酶学检测方法具体操作为:将待检测样本放入检测试剂中形成检测体系，20-40°C反应，用ATP检测试剂检测ATP浓度，换算获得目标检测物的浓度。
4.根据权利要求3所述的一种酶学检测方法，其特征在于:ATP检测试剂包含萤光素酶和萤光素。
5.根据权利要求3所述的一种酶学检测方法，其特征在于:检测体系包含如下组分:鸟氨酸氨基甲酰转移酶1-300 μ g/mL，氨基甲酰磷酸激酶1-300 μ g/mL，待测样本。
6.根据权利要求1-5任意一项所述的一种酶学检测方法,其特征在于:所述鸟氨酸氨基甲酰转移酶和氨基甲酰磷酸激酶均来源于绿脓杆菌。
全文摘要
本发明涉及检验测定技术领域，公开了一种利用检测ATP方法检测反应体系中的瓜氨酸、非对称二甲基精氨酸等浓度的酶学检测方法，其反应基本原理主要是通过二甲基精氨酸二甲胺水解酶水解非对称二甲基精氨酸生成瓜氨酸，瓜氨酸在有ADP和Mg2+存在下，通过鸟氨酸氨基甲酰转移酶、氨基甲酰磷酸激酶偶联催化最终生成鸟氨酸、二氧化碳、氨气和ATP，而释放出的ATP可以通过试剂检测到。本发明的主要优点就是反应灵敏、迅速、准确性高、价格便宜，能最低检测到浓度为0.1μmol/L的ADMA或瓜氨酸，检测结果接近正常生理血清中ADMA的浓度，且远低于正常生理血清中瓜氨酸的浓度，为临床检测ADMA提供了一种可能的新方法。
文档编号G01N21/76GK103207173SQ201310078729
公开日2013年7月17日 申请日期2013年3月13日 优先权日2013年3月13日
发明者胡广, 张明 申请人:北大工学院绍兴技术研究院