兽用孟布酮注射液的含量测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种兽用孟布酮注射液的含量测定方法，采用高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以5g/L磷酸溶液与乙腈按体积比0.9～1.1:2组成的混合液为流动相，检测波长为235～240nm；理论塔板数以孟布酮峰计算不低于2000，孟布酮峰与相邻杂质峰的分离度大于1.5；精密量取兽用孟布酮注射液，用流动相稀释2500倍，摇匀，精密量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取孟布酮对照品，精密称定，用流动相溶解并定量稀释制成每1mL中含40±4μg的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；该含量测定方法准确、灵敏、简便、快速，有利于控制兽用孟布酮注射液的内在质量，确保药品安全有效。
【专利说明】兽用孟布酮注射液的含量测定方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药物分析【技术领域】，涉及一种兽用药物制剂的主药含量测定方法。
【背景技术】
[0002]畜牧业是我国国民经济中的重要产业，是农业的重要组成部分。文献显示，在兽医临床上，猪、羊、牛等动物的消化系统疾病约占临床总发病量的30%，而食欲不振、消化不良、便秘腹胀、胃肠弛缓、瘤胃积食等胃肠功能障碍，几乎在动物的大部分疾病中伴发或继发。动物消化不良可使动物生长发育受阻，生产性能下降甚至死亡，往往造成较大经济损失，妨碍畜牧业发展。目前，对于该类病症，临床上常选用氨甲酰胆碱、氨甲酰甲胆碱、毛果芸香碱、新斯的明等拟胆碱类药物进行治疗，但该类药物存在毒性大、作用强烈、剂量难以把握、选择性差等缺点。
[0003]利胆药，是作用于动物消化系统的药物，但在我国出版的兽药方面的权威书籍如中国兽药典(2010年版)、中国兽药典兽药使用指南(化学药品卷)(2010年版)、兽医药理学(陈杖榴主编，第二版)等中，还没有利胆药这一类别，仅在硫酸镁和人工盐中提及“利胆”作用。因此，兽用利胆药在我国还处于空白。
[0004]孟布酮(Menbutone)，化学名为3-(4’_甲氧基萘甲酰基)丙酸，为白色或类白色结晶性粉末，易溶于丙酮，溶解于三氯甲烷，微溶于甲醇和乙醇，在乙醚中极微溶解，几乎不溶于水，易溶于氢氧化钠溶液。孟布酮是一种动物专用的利胆剂，能够刺激胆汁、胰液和胃液的分泌，增加胆酸盐、胰蛋白酶、胰脂酶、胰淀粉酶和胃蛋白酶等的分泌量，促进胃肠内食物的消化与吸收，改善和恢复肝脏功能代谢；其作用温和、安全，对中枢神经系统、心血管系统、呼吸系统、泌尿系统、消化系统和生殖系统无明显不良影响，对雌性动物的子宫平滑肌基本无作用，不会引起生殖不利和流产，可用于怀孕动物，在兽医临床上有着广泛的应用前景。目前在欧洲等区域，孟布酮已经用于马、牛、绵羊、山羊、猪和犬的消化不良，食欲不振，厌食症，产后不食，霉变饲料中毒，绞痛，便秘，酮症，毒血症(包括妊娠毒血症)，肝脏和胰腺疾病所致消化功能障碍等，但在我国却鲜见报道，也未见进口及有关专利信息。
[0005]为了填补我国兽用利胆药的空白，提高我国兽医用药水平，发明人所在课题组研究开发了一种兽用孟布酮注射液，每IOOmL注射液由以下组分组成:孟布酮10g，二乙醇胺
5.5g，氯甲酚0.2g，焦亚硫酸钠0.2g，依地酸0.2g，余量为注射用水。其中孟布酮为主药，二乙醇胺为助溶剂，氯甲酚为抑菌剂，焦亚硫酸钠为抗氧剂，依地酸为螯合剂。制备工艺为:取注射用水50mL，加入二乙醇胺，搅拌混匀，再加入孟布酮，50±5°C搅拌至完全溶解，再加入焦亚硫酸钠和依地酸，搅拌使溶解，再加入氯甲酚，50±5°C搅拌使溶解，所得药液冷却至室温，用注射用水定容至IOOmL,混匀，依次用孔径为0.45 μ m和0.22 μ m的微孔滤膜过滤,滤液在通氮气状态下灌封于IOOmL钠钙玻璃模制注射剂瓶(压入卤化丁基橡胶塞，轧上铝盖)或IOmL安瓿中，115°C灭菌30分钟，即得。
[0006]为了保证该注射液在研究、生产、贮存、销售和使用过程中的质量，确保药品安全有效，需要建立该注射液的质量标准。
【发明内容】
[0007]有鉴于此，本发明的目的在于提供一种兽用孟布酮注射液的含量测定方法，准确、灵敏、简便、快速，有助于控制兽用孟布酮注射液的内在质量，确保药品安全有效。
[0008]为达到上述目的，经研究，本发明提供如下技术方案:
[0009]兽用孟布酮注射液的含量测定方法，采用高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以5g/L磷酸溶液与乙腈按体积比0.9?1.1:2组成的混合液为流动相，检测波长为235?240nm ;理论塔板数以孟布酮峰计算不低于2000，孟布酮峰与相邻杂质峰的分离度大于1.5 ;精密量取兽用孟布酮注射液，用流动相稀释2500倍，摇匀，精密量取20 μ L注入液相色谱仪，记录色谱图；另取孟布酮对照品，精密称定，用流动相溶解并定量稀释制成每ImL中含40±4 μ g的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得兽用孟布酮注射液的含量。
[0010]优选的，以5g/L磷酸溶液与乙腈按体积比1:2组成的混合液为流动相，检测波长为 235nm。
[0011]进一步，流动相流速为0.8?1.2mL/min,色谱柱柱温为20?30°C。
[0012]优选的，流动相流速为1.0mL/min,色谱柱柱温为30°C。
[0013]进一步，精密量取兽用孟布酮注射液0.2mL，用流动相稀释至IOOmL,摇匀，精密量取5mL，用流动相稀释至25mL，摇匀，精密量取20 μ L注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0014]本发明的有益效果在于:本发明提供了一种兽用孟布酮注射液的含量测定方法，准确、灵敏、简便、快速，有利于控制兽用孟布酮注射液的内在质量，确保药品安全有效。
[0015]本发明为“重庆市兽药工程技术研究中心”与“重庆药物过程与质量控制工程技术研究中心”研究项目。
【专利附图】
【附图说明】[0016]
说明:
[0017]
色谱图。
[0018]
[0019]
[0020][0021][0022]
为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图进行
图1为兽用孟布酮注射液含量测定方法中对照品溶液、供试品溶液与空白溶液的
图2为4种辅料(依地酸、二乙醇胺、氯甲酚、焦亚硫酸钠)的色谱图。
图3为兽用孟布酮注射液破坏性实验的色谱图。
图4为兽用孟布酮注射液含量测定方法的标准曲线。
图5为兽用孟布酮注射液含量测定方法的定量限色谱图。
图6为兽用孟布酮注射液含量测定方法的检测限色谱图。
【具体实施方式】
[0023]下面将结合附图，对本发明的优选实施例进行详细的描述。
[0024]实施例1、兽用孟布酮注射液含量测定方法的建立与方法学验证
[0025]一、主要药品与仪器
[0026]兽用孟布酮注射液为重庆市兽药工程技术研究中心小试产品，批号20120506，含量100.16%。孟布酮对照品由德国Dr.Ehrenstorfer公司提供，批号01117。
[0027]梅特勒Agl35型电子天平、岛津LC-20AD高效液相色谱仪、岛津STO-M20A紫外可变波长检测器。
[0028]二、兽用孟布酮注射液含量测定方法的建立
[0029]采用高效液相色谱法测定。含孟布酮应为标示量的95.0%?105.0%。
[0030]色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以5g/L磷酸溶液与乙腈按体积比1:2组成的混合液为流动相，检测波长为235nm。理论塔板数以孟布酮峰计算不低于2000，孟布酮峰与相邻杂质峰的分离度大于1.5。
[0031]测定法:精密量取兽用孟布酮注射液0.2mL (相当于孟布酮20±2mg)，用流动相稀释至IOOmL,摇匀，精密量取5mL，用流动相稀释至25mL，摇匀，作为供试品溶液；另取孟布酮对照品，精密称定，用流动相溶解并定量稀释制成每ImL中含40±4 μ g的溶液，作为对照品溶液；精密量取供试品溶液和对照品溶液各20 μ L注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
[0032]三、兽用孟布酮注射液含量测定方法的方法学验证
[0033]按照中国兽药典2010年版一部附录243页“兽药质量标准分析方法验证指导原则”的要求进行验证。
[0034]具体色谱条件如下:色谱柱为C18柱(250mmX4.6mm);流动相为5g/L磷酸溶液-乙腈(体积比1:2);柱温为300C ;流速为1.0ml/min ;检测波长为235nm。
[0035]1、系统适用性.
[0036]按照兽用孟布酮注射液含量测定方法制备供试品溶液和对照品溶液。以流动相作为空白溶液。按处方称取4种辅料(二乙醇胺、氯甲酚、焦亚硫酸钠、依地酸)适量，精密称定，混合，用流动相溶解并稀释至10mL，制得混合辅料溶液。精密量取供试品溶液、对照品溶液、空白溶液、混合辅料溶液各20 μ L注入液相色谱仪，记录色谱图。另精密量取供试品溶液20 μ L注入液相色谱仪，连续进样6次，计算主峰面积的相对标准偏差(RSD)。
[0037]结果见图1、图2和表1，流动相与辅料(二乙醇胺、氯甲酚、焦亚硫酸钠、依地酸)对孟布酮的测定均无干扰，理论塔板数与分离度均符合规定；供试品溶液连续进样6次，孟布酮峰面积的RSD小于2.0%。说明在该色谱条件下，系统适用性良好。
[0038]表I供试品溶液重复进样6次的结果
[0039]
色谱图编号I23456RSD (%)主峰面积7026394703167870410087033912704673870346020.11
[0040] 2、准确度
[0041 ] 按照孟布酮注射液含量测定方法中对照品溶液的80%、100%和120%浓度水平，取孟布酮对照品3份，精密称定，分别为16.6mg、20.6mg、24.8mg，置IOOmL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置25mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制得3种不同浓度测试液。精密量取上述3种测试液各20 μ L注入液相色谱仪，每种测试液连续进样3次，计算总平均回收率和RSD。[0042]结果见表2，孟布酮注射液含量测定方法的准确度良好。
[0043]表2准确度试验结果
[0044]
【权利要求】
1.兽用孟布酮注射液的含量测定方法，其特征在于，采用高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以5g/L磷酸溶液与乙腈按体积比0.9?1.1:2组成的混合液为流动相，检测波长为235?240nm ;理论塔板数以孟布酮峰计算不低于2000，孟布酮峰与相邻杂质峰的分离度大于1.5 ;精密量取兽用孟布酮注射液，用流动相稀释2500倍，摇匀，精密量取20 μ L注入液相色谱仪，记录色谱图；另取孟布酮对照品，精密称定，用流动相溶解并定量稀释制成每ImL中含40±4 μ g的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得兽用孟布酮注射液的含量。
2.根据权利要求1所述的兽用孟布酮注射液的含量测定方法，其特征在于，以5g/L磷酸溶液与乙腈按体积比1:2组成的混合液为流动相，检测波长为235nm。
3.根据权利要求1所述兽用孟布酮注射液的含量测定方法，其特征在于，流动相流速为0.8?1.2mL/min,色谱柱柱温为20?30°C。
4.根据权利要求3所述兽用孟布酮注射液的含量测定方法，其特征在于，流动相流速为1.0mL/min，色谱柱柱温为30 C。
5.根据权利要求1至4任一项所述兽用孟布酮注射液的含量测定方法，其特征在于，精密量取兽用孟布酮注射液0.2mL,用流动相稀释至IOOmL,摇匀，精密量取5mL，用流动相稀释至25mL，摇匀，精密量取20 μ L注入液相色谱仪，记录色谱图。
【文档编号】G01N30/02GK103439421SQ201310370852
【公开日】2013年12月11日 申请日期:2013年8月22日 优先权日:2013年8月22日
【发明者】罗永煌, 罗雷, 王兰周, 杨游, 龙飞, 谭明国, 王帅, 吴梦婉 申请人:西南大学