一种利用hplc测定原料药中苯肼类化合物残留的方法
【专利摘要】本发明公开了一种利用HPLC测定原料药中基因毒性杂质（或疑似基因毒性）苯肼类化合物残留的方法。选择苯基键合硅胶为固定相的色谱柱，以有机相与缓冲液的混合溶剂梯度洗脱作为流动相直接进行检测。该检测方法检测灵敏度高、专属性强、精密度高、准确性强、操作方便，且该方法的适用性很广，可用于多种原料药中苯肼类化合物的检测，有效控制原料药的质量。
【专利说明】一种利用HPLC测定原料药中苯肼类化合物残留的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药物分析领域，具体地，涉及一种利用HPLC (高效液相色谱)测定原料药中苯肼类化合物残留的方法。
【背景技术】
[0002]药物合成中，常将苯餅类化合物作为多种原料药(API，Active Pharmaceutical Ingredient)的起始/关键物料，但由于其存在的基因毒性(或疑似基因毒性)，欧盟已将苯肼类化合物公布为基因毒性杂质(或疑似基因毒性杂质)，规定在原料药中进行有关物质的严格控制，欧盟规定的限度为最大日服量为1.5 μ go
[0003]苯肼类化合物的结构式如下，R代表磺酰胺基、羧基、氢原子、甲磺酰基等。
【权利要求】
1.一种利用HPLC测定原料药中苯肼类化合物残留的方法，其特征在于: (1)色谱条件:色谱柱以苯基键合硅胶为固定相，以有机相与缓冲液的混合溶剂作为流动相梯度洗脱，柱温20°C?30°C，流速为0.8?1.2mL/min，检测波长为260nm±10nm ； (2)样品溶液的配制:采用有机溶剂或有机溶剂和水的混合液将待检测样品配制成样品溶液； (3)分离分析:将样品溶液2?20μ L，注入高效液相色谱仪，完成苯肼类化合物残留量的测定。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:所述流动相为有机相与醋酸盐缓冲液的混合溶剂梯度洗脱，梯度洗脱O?3min时，醋酸盐缓冲液、有机相的比例为体积比90%: 10% ；3.01?14min时，醋酸盐缓冲液体积比减小为80%,有机相体积比增加为20%；14.01?15min,醋酸盐缓冲液比例为体积比减少为10%,有机相的比例为体积比增加为90% ；15?25min时，醋酸盐缓冲液、有机相的比例为体积比10%: 90%不变；25.01?30min时，醋酸盐缓冲液体积比增加为90%，有机相体积比减少为10% ；30?35min时，醋酸盐缓冲液、有机相的比例为体积比90%: 10%不变。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述有机相为选自甲醇或乙腈中的至少一种。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述缓冲液为选自醋酸盐缓冲液。
5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于:所述缓冲液的浓度范围为0.005mol/L ?0.05mol/L,优选 0.01mol/L。
6.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于:所述缓冲液的pH值为3.0?5.1。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:流动相的流速为0.8?1.2mL/min，优选1.0mT,/mi η η
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:柱温为20°C?30°C，优选25°C。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:检测波长为260nm±10nm，优选260nm。
【文档编号】G01N30/88GK103454370SQ201310411111
【公开日】2013年12月18日 申请日期:2013年9月11日 优先权日:2013年9月11日
【发明者】夏艳开 申请人:中美华世通生物医药科技（武汉）有限公司