用hplc快速测定饲用金霉素及其杂质含量的方法
【专利摘要】本发明公开了一种用HPLC快速测定饲用金霉素及其杂质含量的方法，包括以下步骤：试剂和溶液的配制、色谱条件准备、HPLC系统适用性试验测定、色谱图分析，该方法采用HPLC精密检测仪器进行检测，能同时完成含量，差向金霉素和四环素杂质含量，具有检测结果准确，检测速度快，检测精度高的优点。
【专利说明】用HPLC快速测定饲用金霉素及其杂质含量的方法【技术领域】
[0001]本发明涉及饲用金霉素(含金霉素抗生素的预混剂)检测领域，特别是一种用HPLC法快速测定饲用金霉素及其杂质含量的方法。
【背景技术】
[0002]饲用金霉素是由金霉素产生菌的全发酵液与适量碳酸钙制成的饲用金霉素钙盐，通过干燥、破碎等工艺制成的饲用金霉素产品。在上述的生产过程中，产品中会伴生有金霉素族杂质生成，其中最主要的两个杂质为四环素和差向金霉素。
[0003]目前，饲用金霉素含量检测方法依《兽药地方标准上升国家标准》第二册进行检测，为传统的抗生素微生物检定法-管碟法，此方法为依据量反应平行线原理，利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定抗生素活性的方法。针对管碟法客观上存在以下缺陷:(1)检测时间长，手续繁琐(一个样品至少20小时)；(2)试验条件要求高(半无菌室)；(3)检测精度不高(可信限率为5%) ； (4)使用指示菌种，易造成生物污染；(5)无法对四环素和差向金霉素杂质进行检测。使用管碟法无法快速准确精密地完成饲用金霉素含量和杂质的检测。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种快速测定饲用金霉素含量及杂质的方法，以提高饲用金霉素的检测效率、准确度和精度，同时可测定杂质。
[0005]为实现上述目的，本发明采用以下技术方案:
用HPLC快速测定饲用金霉素及其杂质含量的方法，包括以下步骤:
51.试剂和溶液的配制:配制流动相、样品浸泡剂、金霉素标准溶液、四环素标准溶液、差向金霉素标准溶液、试验标准溶液及样品溶液；
所述的流动相为草酸液加入乙腈及四氢呋喃混匀后溶液，所述的样品浸泡剂为甲醇加入盐配混匀后溶液，所述的金霉素标准溶液、四环素标准溶液、差向金霉素标准溶液分别为金霉素标准品、四环素标准品、差向金霉素标准品用样品浸泡剂溶解稀释后的溶液，所述的试验标准溶液为金霉素标准溶液和差向金霉素标准溶液混匀后所得溶液；
52.色谱条件准备:色谱柱C8，检测波长365nm，流速0.8~1.0mL/min,进样量20 μ L ；
53.HPLC系统适用性试验测定:将流动相接入HPLC系统，取试验标准溶液，连续进样5次，通过系统适用性试验指标后进行步骤S4;
54.色谱图分析:将SI中的金霉素标准溶液、四环素标准溶液、差向金霉素标准溶液、
试验标准溶液及样品溶液移入HPLC系统中测定得到各自的色谱图，并进行分析。其中，步
骤S4中分析金霉素含量的计算公式为:
金霉素含量
【权利要求】
1.用HPLC快速测定饲用金霉素及其杂质含量的方法，其特征在于，包括以下步骤: 51.试剂和溶液的配制:配制流动相、样品浸泡剂、金霉素标准溶液、四环素标准溶液、差向金霉素标准溶液、试验标准溶液及样品溶液； 所述的流动相为草酸液加入乙腈及四氢呋喃混匀后溶液，所述的样品浸泡剂为甲醇加入盐配混匀后溶液，所述的金霉素标准溶液、四环素标准溶液、差向金霉素标准溶液分别为金霉素标准品、四环素标准品、差向金霉素标准品用样品浸泡剂溶解稀释后的溶液，所述的试验标准溶液为金霉素标准溶液和差向金霉素标准溶液混匀后所得溶液； 52.色谱条件准备:色谱柱C8，检测波长365nm，流速0.8~1.0mL/min,进样量20 μ L ； 53.HPLC系统适用性试验测定:将流动相接入HPLC系统，取试验标准溶液，连续进样5次，通过系统适用性试验指标后进行步骤S4 ； 54.色谱图分析:将SI中的金霉素标准溶液、四环素标准溶液、差向金霉素标准溶液、试验标准溶液及样品溶液移入HPLC系统中测定得到各自的色谱图，并进行分析。
2.如权利要求1所述的用HPLC快速测定饲用金霉素及其杂质含量的方法，其特征在于，步骤S4中分析金霉素含量的计算公式为:
3.如权利要求1所述的用HPLC快速测定饲用金霉素及其杂质含量的方法，其特征在于，步骤S4中分析四环素杂质含量的计算公式为:
4.如权利要求1所述的用HPLC快速测定饲用金霉素及其杂质含量的方法，其特征在于，步骤S4中分析差向金霉素杂质含量的计算公式为:
5.如权利要求1至4任一项所述的用HPLC快速测定饲用金霉素及其杂质含量的方法，其特征在于，步骤SI中流动相为0.01mol/L的草酸液150mL，加入乙腈50~60mL及四氢呋喃5~15mL，混匀，并置于超声波清洗器上脱气制成。
6.如权利要求5所述的用HPLC快速测定饲用金霉素及其杂质含量的方法，其特征在于，步骤SI中样品浸泡剂中甲醇与盐酸的体积比为110:1~120:1 ;金霉素标准溶液为金霉素标准品50~55mg用上述样品浸泡剂溶解并稀释至50 mL ;四环素标准溶液为四环素标准品10~15mg用上述样品浸泡剂溶解并稀释至50 mL ;差向金霉素标准溶液为差向金霉素标准品10~15mg用上述样品浸泡剂溶解并稀释至50 mL。
7.如权利要求1所述的用HPLC快速测定饲用金霉素及其杂质含量的方法，其特征在于，步骤S3中所述的系统适用性试验指标为:理论塔板数不得低于550 ;金霉素与差向金霉素的分离度不得小于2.0 ;金霉素峰的拖尾因子在2.5以内；金霉素峰面积测量值的相对标准偏差不大于2.0%。`
【文档编号】G01N30/02GK103512974SQ201310421665
【公开日】2014年1月15日 申请日期:2013年9月16日 优先权日:2013年9月16日
【发明者】季红珍, 骆荣良 申请人:浦城正大生化有限公司