采用超临界工艺萃取大青叶中靛玉红的方法
【专利摘要】采取超临界工艺萃取并测定靛玉红含量的方法，包括如下步骤：（1）打开超临界萃取仪，设置萃取仪温度参数，预热；（2）准确称取适量大青叶放入萃取缸，调整压力，向夹带剂缸中加入氯仿，开始萃取，每半小时收集一次分离液，直至2小时内收集不到液体时停止；（3）将收集到的分离液在旋转蒸发仪上蒸干，用甲醇定容于容量瓶中，进行测定。本发明提供了一种采用超临界流体萃取法对大青叶中的靛玉红进行分离提纯的工艺，不但将大青叶中的靛玉红充分萃取出来，而且还提供了一种准确检测的方法。
【专利说明】采用超临界工艺萃取大青叶中靛玉红的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种靛玉红的萃取方法，具体地说，涉及一种采取超临界工艺萃取靛 玉红的方法。
【背景技术】
[0002] 靛玉红主要来源于植物马蓝、寥蓝及菘蓝的中药材如大青叶、板蓝根、青黛等，靛 玉红是其主要有效成分。靛玉红有治疗慢性髓性白血病作用，是一种应用前景广阔的抗肿 瘤成分。然而靛玉红在中药材中含量很低，目前缺少一种能够有效提取的分离方法。为减 少药物使用量，提高生物利用度，需要开发一种充分萃取大青叶中靛玉红的工艺。
【发明内容】
[0003] 本发明提供了一种采用超临界流体萃取法对大青叶中的靛玉红进行分离提纯的 工艺。
[0004] 本发明的技术方案是：采取超临界工艺萃取并测定靛玉红含量的方法，包括如下 步骤：
[0005] (1)打开超临界萃取仪，设置萃取仪温度参数，预热；
[0006] (2)准确称取适量大青叶放入萃取缸，调整压力，向夹带剂缸中加入氯仿，开始萃 取，每半小时收集一次分离液，直至2小时内收集不到液体时停止；
[0007] (3)将收集到的分离液在旋转蒸发仪上蒸干，用甲醇定容于容量瓶中，进行测定。
[0008] 优选的是，所属步骤（3)中的色谱条件：以甲醇-0.015mo1/L醋酸铵（72 :28)为 流动相；流速为I. 〇mL/min;检测器灵敏度：1.OAUFS;柱温20度；检测波长289nm。理论板 数按靛玉红峰计算不低于4000。
[0009] 线性考察：精密称取靛玉红对照品l〇mg，用甲醇定容于50mL容量瓶中，超声5m in，制成0. 2g/L的对照品溶液，分别精密吸取该对照品溶液3, 2,1，0. 5及0. 2mL于5mL容 量瓶中，用甲醇定容至刻度。各取以上5个对照品溶液20iiL进样于HPLC系统中，以色谱 峰面积对靛玉红进样浓度作线性回归，得回归方程Y=IO. 83427+0. 68547X，r=0. 9994。靛玉 红浓度在8?120mg/L内，线性关系良好。
[0010] 精密度实验：取线性关系中同一对照品液连续进样5次，每次20L，靛玉红峰面积 RSD为 1. 74%。
[0011] 稳定性实验：将同一试样在0,1，2,4,12h各进样一次测试峰面积，结果RSD为 2. 65%，表明样品溶液在12h内稳定。
[0012] 重复性实验：取同一供试品液5份，依法测定，靛玉红平均含量为17. 33iig/g，RSD 为 2. 07%.
[0013] 加样回收率实验：精密量取已知含量的同一供试品液3份，每份lmL，分别精密加 入0. 4mL浓度为0. 04g/L的对照品溶液，按样品含量测定方法平均回收率为102. 8%，RSD为 1. 48% 〇
[0014] 样品测定：精密吸取上述正交实验提取的供试品溶液各20iiL进样，进行测定。色 谱条件：以甲醇-〇. 〇15mo1/L醋酸铵（72 :28)为流动相；流速为I.OmL/min;检测器灵敏 度：1.OAUFS;柱温20度；检测波长289nm。
[0015] 对实验数据进行方差分析，结果萃取温度、萃取压力及分离压力对靛玉红的回收 率均有显著影响（P〈〇. 05)。将级差R值依大小排列，则影响靛玉红含量的四因素主次顺序 为萃取温度〉萃取压力〉分离压力〉分离温度。以每个因素每水平的K值中的最大值得 知：最佳工艺为萃取温度50度、萃取压力40MPa、分离温度40度及分离压力8MPa.按最佳 工艺条件萃取了三份大青叶（50g)进行验证试验，结果靛玉红平均含量为21.87yg/g，表 明该工艺稳定，测定值在较高范围。
[0016] 萃取实验条件的选择：在设计正交实验时，为更准确地定位萃取温度的水平范 围，在SFE的预实验中做过萃取温度最高60度和最低30度（其他条件固定不变）的靛玉 红回收率比较，结果发现高温萃取回收率较高，故在正交设计中舍去萃取温度30度这个水 平。另三个因素的水平设定是依据仪器的工作参数而定的。在选择夹带剂时曾做过氯仿和 甲醇的比较，因为靛玉红在冷甲醇中易析出，故本实验选择氯仿为萃取夹带剂。在预实验中 考虑了萃取时间和CCV流量的影响，结果不同的实验条件下，分离液的流出没有固定的时间 规律，萃取仪CO2流量在2L/h左右，不可调节，故未将萃取时间和CO2流量两因素纳入正交 实验设计中.
[0017] HPLC条件的选择：靛玉红在242, 292, 362, 544nm处有吸收，而本实验中靛玉红的 紫外最大吸收波长为289nm。实验曾用乙腈与水配比作流动相，在反相色谱中用有机碱三 乙胺调节峰形，结果效果不理想。最后用甲醇比水加入醋酸铵，用酸适当调整PH值，所 得结果峰形理想，分离效果好。曾直接以氯仿作溶剂进样，结果氯仿有较强的吸收峰，改为 甲醇作溶剂后得以改善.
[0018] 本发明的有益效果：提供了一种采用超临界流体萃取法对大青叶中的靛玉红进行 分离提纯的工艺，不但将大青叶中的靛玉红充分萃取出来，而且还提供了一种准确检测的 方法。
【具体实施方式】
[0019] 下面通过具体实施例对本发明做进一步的说明。
[0020] 将精密称取的大青叶50g放入萃取缸II，将压力值调整到需要的参数，同时向副 泵系统下的夹带剂缸中加入氯仿IOOmL,开动副泵，开始萃取。每半小时收集一次分离液， 至2h内连续收集不到液体时停止该次实验。将收集到的分离液在旋转蒸发仪上蒸干，用甲 醇定容于IOmL容量瓶中，作为供试品溶液。精密吸取上述正交实验提取的供试品溶液各 20iiL进样。色谱条件为：以甲醇-0? 015mo1/L醋酸铵（72 :28)为流动相；流速为I.OmL/ min;检测器灵敏度：1.OAUFS;柱温20度；检测波长289nm。
【权利要求】
1. 采取超临界工艺萃取并测定靛玉红含量的方法，其特征在于：包括如下步骤： 打开超临界萃取仪，设置萃取仪温度参数，预热； 准确称取适量大青叶放入萃取缸，调整压力，向夹带剂缸中加入氯仿，开始萃取，每半 小时收集一次分离液，直至2小时内收集不到液体时停止； 将收集到的分离液在旋转蒸发仪上蒸干，用甲醇定容于容量瓶中，进行测定。
2. 根据权利要求1所述的采取超临界工艺萃取并测定靛玉红含量的方法，其特征在 于：所述步骤（3)中的色谱条件：以甲醇-0.015mol/L醋酸铵（72:28)为流动相，流速为 1.0mL/min，检测器灵敏度为1.0AUFS，柱温为20度，检测波长289nm。
【文档编号】G01N30/06GK104515818SQ201310464893
【公开日】2015年4月15日 申请日期:2013年10月7日 优先权日:2013年10月7日
【发明者】侯璐 申请人:青岛联合创新技术服务平台有限公司