碳量子点标记抗体为示踪物的双抗原竞争法快检试纸条的制作方法
【专利摘要】本实用新型提供一种碳量子点标记抗体为示踪物的双抗原竞争法快检试纸条，包括依次排布的样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水部，所述结合物垫为涂覆有碳量子点标记的，检测目标物特异性抗体的纤维素膜；所述硝酸纤维素膜上依次包被有，能与以碳量子点标记的抗体特异结合的抗原或半抗原，和能与以碳量子点标记的抗体特异结合的第二抗体。本实用新型所提供的试纸条，可定性或定量检测待检样品中的抗原（半抗原），提高了现有免疫层析快检方法和技术的敏感性，可应用于多种抗原或半抗原的快速、高灵敏的检测。
【专利说明】碳量子点标记抗体为示踪物的双抗原竞争法快检试纸条
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及一种基于以碳量子点标记抗体为示踪物建立的双抗原竞争法检测待检样品中抗原或半抗原的快检试纸条。
【背景技术】
[0002]免疫层析方法是一种快速诊断技术，具有携带方便、操作简便、成本低廉的特点，目前最为常见的是胶体金试纸条，其一般可以在15分钟内读取检测结果，但该试纸条的灵敏度一般在纳克级，相对较低，并且制作工艺复杂，稳定性和重复性差。以碳量子点标记为示踪物的免疫层析快检是将具有高灵敏度的碳量子标记技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。碳量子点免疫分析技术具有灵敏度高、快速、准确、重复性好等优点。如何能够发挥试纸条现场快速检测的优势，同时提高检测的灵敏度，并对抗原或者抗体的浓度做定量分析，这些都是免疫层析检测领域技术人员迫切需要解决的问题。
实用新型内容
[0003]为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本实用新型提出一种一种基于以碳量子点标记抗体为示踪物建立的双抗原竞争法检测待检样品中抗原或半抗原的快检试纸条及其应用，本发明还涉及双抗原竞争法检测待检样品中抗原或半抗原的方法。
[0004]本实用新型涉及一种以碳量子点标记抗体为示踪物建立的双抗原竞争法检测待检样品中抗原或半抗原的快检试纸条。该试纸条包括依次排布的样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水部，该结合物垫为涂覆有碳量子点标记的，检测目标物特异性抗体的纤维素膜；该硝酸纤维素膜上依次包被有能与以碳量子点标记的抗体特异结合的抗原或半抗原(T线)和能与以碳量子点标记的抗体特异结合的第二抗体(C线)。
[0005]具体来讲，该结合物垫为涂覆有碳量子点标记的，检测目标物特异性抗体的玻璃纤维素膜；所述检测目标物是指黄曲霉毒素抗原；所述检测目标物特异性抗体是指黄曲霉毒素抗体。
[0006]本实用新型所提供的试纸条，可定性或定量检测待检样品中的抗原或半抗原或，提高了现有免疫层析快检方法和技术的敏感性，可应用于多种抗原或半抗原的快速、高灵敏的检测。
【专利附图】
【附图说明】
[0007]图1本实用新型所提供试纸条的示意图。
[0008]图中:1:加样区，2:观测区，3:T线，4:C线，5:卡壳。
【具体实施方式】
[0009]下面结合附图和具体实施例对本实用新型作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本实用新型并能予以实施，但所举实施例不作为对本实用新型的限定。
[0010]本实用新型所使用的所有材料，包括抗原和抗体，都是现有技术中已经存在，本领域技术人员根据现有技术能够获得的材料。本领域技术人员基于实施本实用新型目的需要，也可以从 申请人:处获得这些材料。本实用新型的发明点在于这些现有技术在试纸条中的布局关系。
[0011]本实用新型所提供的基于以碳量子点标记抗体为示踪物建立的双抗原竞争法检测待检样品中抗原或半抗原的快检试纸条，其制备方法简述如下:
[0012]在聚氯乙烯(PVC)胶板上顺次相互搭接贴上样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水纸。将PVC胶板及其贴附的材料切割成4_宽度的层析试纸条。装入卡壳内，卡壳上开窗口，分为加样区和发光区。样品垫位于加样区，硝酸纤维素膜位于发光区。
[0013]本实用新型提供用于以碳量子点标记抗体为示踪物建立的双抗原竞争法检测待检样品中抗原或半抗原的快检试纸条，所述样品垫为纤维素膜；所述结合物垫为涂覆有以碳量子点标记的，检测目标物抗体的玻璃纤维膜；所述硝酸纤维素膜上包被有两条线，分别为T线，即能与碳量子点标记抗体特异结合的抗原或半抗原，也就是与检测目标物相同的抗原或半抗原；C线，即能与碳量子点标记抗体特异结合的第二抗体。
[0014]本实用新型所提供试纸条的应用示例如下:
[0015]本实用新型所提供试纸条，在加样区上加入待检样品后，如果待检样品中含有与碳量子点标记的抗体特异结合的抗原或半抗原，则形成复合物，在虹吸作用下向试纸条的另一端方向运动，运动到硝酸纤维素膜上，被膜上包被的抗原或半抗原(与检测目标物相同)竞争结合、滞留(T线)，在此处形成发光的条带，待检样品中抗原或半抗原的含量越高发光反应越弱；反之则越强。在C线处出现发光条带，则表明该检测系统的检测结果有效；若C线处没有发光条带，则表明该检测系统失效，检测结果判定为无效。
[0016]绘制检测目标物的浓度与碳量子点发光的光强标准曲线，可以对待检样品中抗原或半抗原浓度做定量分析。
[0017]使用本实用新型所提供试纸条进行特异性抗原或半抗原的检测，其灵敏度可以达到500pg/ml。该试纸条易于制备，使用方便快捷，将普通免疫检测由几小时缩短到几分钟，而灵敏度却要高于一般胶体金试纸条的和现有技术公开的化学发光试纸条。本实用新型所提供的试纸条可广泛应用于各种生物抗原或半抗原的检测。
[0018]检测试纸条的制备:
[0019]1、将能与待检抗原或半抗原特异性结合的抗体用碳二亚胺(EDC)方法链接到碳量子点(CNP)上，分离、纯化后稀释至工作浓度，涂于玻璃纤维结合物垫上，37度干燥2小时后备用。
[0020]2、将能与蛋白质特异结合的硝酸纤维素膜粘附到PVC胶板的中间位置上备用。
[0021]3、采用三维平面划膜仪将所需要的T线抗原、C线抗体，分别按照浓度为0.2?
0.5mg/mL左右包被在硝酸纤维素膜上。仪器参数设置为I微升/厘米，T线和C线的宽度间隔为4毫米；37度2小时备用。
[0022]4、按顺序分别将样品垫，结合物垫粘附到PVC胶板上硝酸纤维素膜的一端，再将吸水纸粘附到PVC胶板上硝酸纤维素膜上的另一端；在切条机上将PVC胶板及其贴附的材料切成4_宽度的层析试纸条备用。[0023]5、将切割好的试纸条，装在卡壳内，卡壳上开有加样区和发光区，样品垫对准加样区，T线和C线区域对准发光区。
[0024]6、将组装好的试纸条装在铝箔袋中密封常温保存，备用。
[0025]抗原检测
[0026]具体操作步骤如下:
[0027]滴加3滴样品(100 μ I)于加样孔(样品垫)中，10分钟之后进行测量。
[0028]结果判断:
[0029]当T线和C线均发光时，根据T线发光的强度判断检测目标物的浓度大小。
[0030]当C线处未显示出发光条带时表明该检测系统无效。
[0031]绘制被检测物的浓度与碳量子点发光的光强标准曲线，可以对待检样品中抗原或半抗原浓度做定量分析。
[0032]实施例1:黄曲霉毒素BI的检测
[0033]试纸条的制备如下:
[0034]1、将抗黄曲霉毒素B1抗体用碳二亚胺(EDC)方法链接到碳量子点(CNP)上，分离、纯化后稀释至工作浓度，涂于玻璃纤维结合物垫上，37度干燥2小时后备用；
[0035]2、将样品垫、CNP-Ab结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水纸按照顺序，依次相互搭接贴在PVC胶板上；
[0036]3、采用三维平面划膜仪将所要包被的T和C线的抗体，按照浓度为0.2?0.5mg/mL包被在硝酸纤维素膜上，T线为与碳量子点标记抗体相结合的抗原，C线为与碳量子点标记抗体特异结合的第二抗体，仪器参数设置为I微升/厘米，C和T线的宽度间隔为4毫米；
[0037]4、将PVC胶板及其贴附的材料切成4mm宽度的层析试纸条；
[0038]5、将切割好的试纸条，装在卡壳内，卡壳上开有加样区和显色区，样品垫对准加样区，T线和C线区域对准显色区；
[0039]6、将组装好的试纸条装在铝箔袋中，内装一个干燥剂和滴管，进行密封常温保存。
[0040]本实用新型所提供试纸条用于检测黄曲霉毒素BI
[0041]具体操作步骤如下:
[0042](I):将待检样品(食用油、花生、奶粉等食品)适量，用氯仿、乙醇萃取后，在含有乙醇:水(2:8)的溶液中进行试验。
[0043](2):滴加3滴实际样品100 μ I于加样孔中，10分钟之后，放置于蛋白凝胶成像仪上进行读出。
[0044]结果判断:
[0045]T线出的抗原或半抗原和待检样品中的抗原或半抗原，与量子点标记的抗体竞争结合，样品中待检测抗原或半抗原的含量越高，T线发光就越弱，反之就越强。
[0046]C线发光表示实验有效，C线不发光表示实验无效。
[0047]测量、绘制出标准曲线并计算出待检样品的实际含量。
[0048]黄曲霉毒素BI标准溶液的配制是将黄曲霉毒素B1首先溶解在甲醇溶液中，配制成10ng/mL甲醇溶液，然后用体积含量10%甲醇的磷酸缓冲溶液稀释，稀释后黄曲霉毒素 BI 溶液的浓度分别为 0ng/mL、0.lng/mL、0.3ng/mL、0.5ng/mL、l.0ng/mL、3.0ng/mL 和
5.0ng/mLo[0049]滴加3滴标准溶液100 μ L于加样孔中，10分钟之后，放置于蛋白凝胶成像仪上进行读出，测定每个检测卡的荧光光谱，记录其最大荧光强度；再以荧光强度与黄曲霉毒素标准溶液的浓度为坐标绘制标准工作曲线。
[0050]滴加3滴未知浓度的黄曲霉毒素B1溶液100 μ L于加样孔中，10分钟之后，放置于蛋白凝胶成像仪上进行读出，测定每个检测卡的荧光光谱，记录其最大荧光强度，得到样品的最大荧光强度，然后通过绘制的标准工作曲线读取样品中黄曲霉毒素B1的浓度。
[0051]米用所制备的试纸条对黄曲霉毒素B1含量在15ng/mL以上的20份样本和黄曲霉毒素B1含量在15ng/mL以下的20份样本进行了检测，符合率均为100%。
[0052]以上所述实施例仅是为充分说明本实用新型而所举的较佳的实施例，本实用新型的保护范围不限于此。本【技术领域】的技术人员在本实用新型基础上所作的等同替代或变换，均在本实用新型的保护范围之内。
【权利要求】
1.碳量子点标记抗体为示踪物的双抗原竞争法快检试纸条，包括依次排布的样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水部，其特征在于，所述结合物垫为涂覆有碳量子点标记的，检测目标物特异性抗体的纤维素膜；所述硝酸纤维素膜上依次包被有，能与以碳量子点标记的抗体特异结合的抗原或半抗原，和能与以碳量子点标记的抗体特异结合的第二抗体。
2.权利要求1所述试纸条，其特征在于，所述结合物垫为涂覆有碳量子点标记的，检测目标物特异性抗体的玻璃纤维素膜。
3.权利要求1所述试纸条，其特征在于，所述检测目标物是指黄曲霉毒素抗原。
4.权利要求1所述试纸条，其特征在于，所述检测目标物特异性抗体是指黄曲霉毒素抗体。
5.权利要求1-4任一项所述试纸条，其特征在于，所述试纸条还包括卡壳。
【文档编号】G01N33/558GK203561637SQ201320682691
【公开日】2014年4月23日 申请日期:2013年10月31日 优先权日:2013年10月31日
【发明者】侯淑霞, 王万霞 申请人:北京玖佳宜科技有限公司