清凉油含量测定方法
【专利摘要】本发明公开了清凉油含量测定方法，包括薄荷脑、樟脑、桉油精、丁香酚中的一种或多种成分的定性定量分析。具体包括：（1）采用薄荷脑、樟脑、桉油精和丁香酚为对照品；（2）清凉油样品试剂处理后用GC法进行检测；（3）GC测定方法：色谱柱：HP-INNOWAX毛细管柱，检测器：氢火焰离子化检测器，检测器温度：250-300℃，进样口温度：220-270℃，柱温：程序升温，初始温度60-110℃，升至220-280℃，每分钟5-15℃，保持8-20min，进样方式：分流进样，分流比20:1；该法科学合理，简便易行，适用于清凉油中的薄荷脑、樟脑等挥发性成分及其相关提取物的质量控制。
【专利说明】清凉油含量测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及清凉油的含量测定方法，具体涉及一种清凉油中薄荷脑、樟脑、桉油精和丁香酚的含量测定方法。
【背景技术】
[0002]清凉油是由薄荷脑、樟脑、桉油、丁香油等原料组成的非处方药，具有清凉散热，醒脑提神，止痒止痛之功，主要用于感冒头痛，中暑，晕车，蚊虫蜇咬等。由于药效显著，且药用范围广泛而沿用至今，为广大消费者所青睐。
[0003]目前，清凉油国内有38家医药企业生产该产品，批准文号有41个，另外市场中还有妆字号清凉类产品，规格品牌均较多。作为国药准字号，清凉油的质量标准是卫生部颁中药标准(WS3-B-0144-89)，其中主要检测指标有鉴别、熔点、含量测定、装量差异，其中含量测定指检测其中总挥发油量。到目前为止，未见有关清凉油中相关成分的研究报道，无该复方中薄荷脑、樟脑、桉油精和丁香酚的测定方法。
[0004]按照中药质量标准分析方法验证指导原则(2010年中国药典一部)等相关要求，建立清凉油中薄荷脑、樟脑、桉油精和丁香酚的含量测定方法(气相色谱法)，分别进行了方法学考察，具体包括专属性试验、耐用性试验、线性关系、精密度试验、稳定性试验、检测限、重复性试验、加样回收率试验。确定的色谱条件为:色谱柱:HP-1NN0WAX毛细管柱(60mX 0.25mm, 0.25 μ m)，检测器:氢火焰离子化检测器，检测器温度:250-30(TC，进样口温度:220-270°C，柱温:程序升温，初始温度60-110°C，升至220_28(TC，每分钟5_15°C，保持8-20min，进样方式:分流进样，分流比20:1。该方法科学合理，简便易行，适用于清凉油中的薄荷脑、樟脑等挥发性成分及其相关提取物的质量控制。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于，提供一种清凉油中挥发性类成分的含量测定方法，以克服现有技术所存在的上述缺点和不足。
[0006]本发明所需要解决的技术问题，可以通过以下技术方案来实现:
[0007]清凉油含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤:
[0008]( I)设备和材料的准备
[0009]①色谱条件
[0010]色谱柱:HP-1NN0WAX毛细管柱，其规格为60mX0.25mm, 0.25 μ m，检测器:氢火焰离子化检测器，检测器温度:250-30(TC，进样口温度:220-27(TC，柱温:程序升温，初始温度60-110°C，升至220-280°C，每分钟5_15°C，保持8_20min，进样方式:分流进样，分流比20:1。
[0011 ] ②对照品溶液的制备
[0012]精密称取薄荷脑、樟脑、桉油精和丁香酚对照品适量，精密称定，加试剂分别制成每Iml含薄荷脑1.0-1.6mg、樟脑1.1-1.8mg、桉油精0.8-1.2mg和丁香酌.0.2-0.6mg的混合对照品溶液。
[0013]③供试品溶液的制备
[0014]取清凉油适量，混匀，取0.2g，精密称定，置25ml量瓶中，加入试剂10ml，在50°C水浴上加热数分钟使融化，放冷，定容，摇匀，离心，取上清液，即得。
[0015](2)样品含量测定
[0016]分别取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，记录峰面积，按外标法分别计算清凉油中桉油精、樟脑、薄荷脑和丁香酚含量。
[0017](3)方法学考察项目包括:专属性试验、耐用性试验、线性关系、精密度试验、稳定性试验、检测限、重复性试验、加样回收率试验。
[0018]①专属性试验
[0019]按照上述色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液，分别注入气相色谱仪，理论板数按樟脑计算大于300000，分离度均大于2 ;表明阴性对照溶液中的组分不干扰相应对照品的测定。
[0020]②耐用性试验
[0021]本发明考察了不同色谱柱即HP-5MS毛细管柱，固定相是(5%-苯基)_甲基聚硅氧烷，0.25mm和0.32mm, 0.25 μ m, 30m,和HP-1NN0WAX毛细管柱，固定相是聚乙二醇(PEG)，60mX0.25mm, 0.25 μ m,结果发现HP-1NN0WAX毛细管柱比较适合此4种成分的分析检测；
[0022]另外，对参数进样口温度、检测器温度、程序升温速度、流速进行了比较，发现微调条件，4种成分的色谱峰理论塔板数、`分离度、拖尾因子均较好。
[0023]③线性关系
[0024]分别将低浓度对照品溶液I μ 1，中浓度对照品溶液1、2 μ 1，高浓度对照品溶液注入气相色谱仪。
[0025]按上述色谱条件测定，以对照品峰面积的积分值A为纵坐标Y，进样量C(Ug)为横坐标X，进行线性回归，得回归方程分别为:薄荷脑A=690.09C+4.9889，r=0.9999(n=6)，线性范围为 0.0286-2.86 μ g ;樟脑 A=673.90C+5.5854，r=0.9999 (n=6),线性范围为 0.02852-2.852 μ g ;桉油精 Α=623.98C+3.6800，r=0.9999 (n=6)，线性范围为 0.0157842-1.57842 μ g ; 丁香酚 A=624.76C+0.5610，r=0.9999 (n=6)，线性范围为
0.0043868-0.43868 μ g ;薄荷脑、樟脑、桉油精和丁香酚在相应范围内均呈良好的线性关系O
[0026]④精密度试验
[0027]精密取混合对照品溶液I μ 1，重复进样6次，记录峰面积并计算相对标准偏差(RSD，％)，RSD均小于0.9%，表明4种成分的精密度均良好；
[0028]⑤稳定性试验
[0029]4种对照品溶液在24h内RSD均小于2%，稳定性较好。
[0030]⑥检测限
[0031]采用信噪比法，分别取适量薄荷脑、樟脑、桉油精和丁香酚对照品，精密称定，用试剂溶解制成高浓度溶液，浓度分别为0.3320mg/ml、0.11682mg/ml、0.52947mg/ml、
0.370884mg/ml ;得到薄荷脑、樟脑、桉油精和丁香酚对照品的最低检测限浓度分别为
0.0006308mg/ml、0.0005841mg/ml、0.0052947mg/ml 和 0.002967lmg/ml?[0032]⑦重复性试验
[0033]取清凉油样品6份，按供试品溶液制备方法分别制备，按样品测定法测定，4种成分的平均含量RSD均〈1%，重复性较好。
[0034]⑧加样回收率试验
[0035]取已知含量的清凉油样品适量，混匀，取约0.lg，6份，精密称定，分别精密加入同量的桉油精、樟脑、薄荷脑和丁香酚对照品，按供试品溶液制备方法制备样品，计算回收率，薄荷脑、樟脑、桉油精和丁香酚的平均加样回收率均符合要求，RSD均〈2%。
[0036]进一步，所述的对照品溶液和供试品溶液制备采用的试剂是指30_60°C石油醚、60-90°C石油醚、90-120°C石油醚、正己烷、正戊烷和环己烷中的一种。
[0037]进一步，还包括步骤(2)测试方法的方法学考察项目，包括:专属性试验、耐用性试验、线性关系、精密度试验、稳定性试验、检测限、重复性试验、加样回收率试验。
[0038]进一步，所述专属性试验:按照上述色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，分别注入气相色谱仪，理论板数按樟脑计算大于300000，分离度均大于2 ;表明阴性对照溶液中的组分不干扰相应对照品的测定。
[0039]进一步，所述耐用性试验:试验考察了不同色谱柱即HP-5MS毛细管柱，固定相是(5%-苯基)-甲基聚硅氧烷，0.25mm和0.32mm, 0.25 μ m, 30m,和HP-1NNOffAX毛细管柱，固定相是聚乙二醇(PEG)，60mX0.25mm, 0.25 μ m,结果发现HP-1NNOWAX毛细管柱比较适合此4种成分的分析检测；另外，对参数进样口温度、检测器温度、程序升温速度、流速进行了比较，发现微调条件，4种成分的色谱峰理论塔板数、分离度、拖尾因子均较好。
[0040]进一步，所述线性关系:按上述色谱条件测定，以对照品峰面积的积分值A为纵坐标Y，进样量C ( μ g)为横坐标X，进行线性回归，薄荷脑、樟脑、桉油精和丁香酚在相应范围内均呈良好的线性关系。
[0041]进一步，所述精密度试验均良好。
[0042]进一步，所述稳定性试验:4种对照品溶液在24h内RSD均小于2%，稳定性较好。
[0043]进一步，所述检测限:采用信噪比法，得到薄荷脑、樟脑、桉油精和丁香酚对照品的最低检测限浓度。
[0044]进一步，所述重复性试验:4种成分的平均含量RSD均〈1%，重复性较好。
[0045]进一步，所述加样回收率试验:4种成分的平均加样回收率均符合要求，RSD均
〈2%。
[0046]本发明的有益效果:
[0047]清凉油含量测定方法，具有良好的准确度、精密度、专属性、检测限、线性范围、耐用性和稳定性。
【专利附图】
【附图说明】
[0048]图1混合对照品图谱。
[0049]图2阴性对照溶液缺薄荷脑的图谱。
[0050]图3阴性对照溶液缺樟脑的图谱。
[0051 ] 图4阴性对照溶液缺桉油精的图谱。
[0052]图5阴性对照溶液缺丁香酚的图谱。[0053]图6供试品溶液图谱。
【具体实施方式】
[0054]以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。
[0055]实施例1
[0056]具体如下所示:
[0057]I仪器材料
[0058]7890A 气相色谱仪(Agilent)、900B 离心机(T0M0S)、AB104-S 分析天平(METTLERTOLEDO)
[0059]薄荷脑对照品(110728-200506，含量测定用，中国食品药品检定研究院)、樟脑对照品(110747-201008，含量测定用，含量以99.0%计，中国食品药品检定研究院)、桉油精对照品(110788-201105，含量测定用，含量以99.9%计，中国食品药品检定研究院)、丁香酚对照品(110725-201213，含量测定用，含量以99.7%计，中国食品药品检定研究院)、30-60 V石油醚、60-90°C石油醚、90-120°C石油醚、正己烷、正戊烷和环己烷(均为分析纯，上海凌峰化学试剂有限公司)
[0060]2试验内容
[0061]2.1色谱条件
[0062]色谱柱:即-1剛0歡乂毛细管柱(6011^0.25mm, 0.25 μ m)，检测器:氢火焰离子化检测器(FID)，检测器温度:250-30(TC，进样口温度:220_27(TC，柱温:程序升温，初始温度60-110°C，升至220-280°C，每分钟5_`15°C，保持8_20min，进样方式:分流进样，分流比20:1。
[0063]2.2对照品溶液的制备
[0064]精密称取薄荷脑、樟脑、桉油精和丁香酚对照品适量，精密称定，加试剂分别制成每Iml含薄荷脑1.0-1.6mg、樟脑1.1-1.8mg、桉油精0.8-1.2mg和丁香酌.0.2-0.6mg的混合对照品溶液。
[0065]2.3供试品溶液的制备
[0066]取清凉油适量，混匀，取0.2g，精密称定，置25ml量瓶中，加入试剂10ml，在50°C水浴上加热数分钟使融化，放冷，定容，摇匀，离心，取上清液，即得。
[0067]2.4样品含量测定
[0068]分别精密吸取对照品溶液I μ 1、供试品溶液I μ 1，注入气相色谱仪，记录峰面积，按外标法分别计算桉油精、樟脑、薄荷脑和丁香酚含量，分别对清凉油产品进行了测定，具体含量结果见下表1所示。
[0069]图1混合对照品图谱。图2阴性对照溶液缺薄荷脑的图谱。图3阴性对照溶液缺樟脑的图谱。图4阴性对照溶液缺桉油精的图谱。图5阴性对照溶液缺丁香酚的图谱。图6供试品溶液图谱。具体图谱如图1-6所示。
[0070]表1清凉油成品的含量测定数据
[0071]
【权利要求】
1.一种清凉油含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)设备和材料的准备 ①色谱条件 色谱柱:HP-1NNOWAX毛细管柱，其规格为60mX0.25mm, 0.25 μ m，检测器:氢火焰离子化检测器，检测器温度:250-30(TC、进样口温度:220-27(TC，柱温:程序升温，初始温度60-110°C，升至220-280°C，每分钟5_15°C，保持8_20min，进样方式:分流进样，分流比20:1 ； ②对照品溶液的制备 精密称取薄荷脑、樟脑、桉油精和丁香酚对照品适量，精密称定，加试剂分别制成每Iml含薄荷脑1.0-1.6mg、樟脑1.1-1.8mg、桉油精0.8-1.2mg和丁香酌.0.2-0.6mg的混合对照品溶液； ③供试品溶液的制备 取清凉油适量，混匀，取0.2g，精密称定，置25ml量瓶中，加入试剂10ml，在50°C水浴上加热数分钟使融化，放冷，定容，摇匀，离心，取上清液，即得； (2)样品含量测定 分别取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，记录峰面积，按外标法分别计算清凉油中桉油精、樟脑、薄荷脑和丁香酚含量。
2.根据权利要求1所述的清凉油含量测定方法，其特征在于:所述的对照品溶液和供试品溶液制备采用的试剂是指30-60°C石油醚、60-90°C石油醚、90-120°C石油醚、正己烷、正戊烷和环己烷中的一种。
3.根据权利要求1所述的清凉油含量测定方法，其特征在于:还包括步骤(2)测试方法的方法学考察项目，包括:专属性试验、耐用性试验、线性关系、精密度试验、稳定性试验、检测限、重复性试验、加样回收率试验。
4.根据权利要求1所述的清凉油含量测定方法，其特征在于:所述专属性试验:按照上述色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，分别注入气相色谱仪，理论板数按樟脑计算大于300000，分离度均大于2 ;表明阴性对照溶液中的组分不干扰相应对照品的测定。
5.根据权利要求1所述的清凉油含量测定方法，其特征在于:所述耐用性试验:试验考察了不同色谱柱即HP-5MS毛细管柱，固定相是(5%-苯基)-甲基聚硅氧烷，0.25mm和 0.32mm，0.25 μ m，30m，和 HP-1NNOWAX 毛细管柱，固定相是聚乙二醇 PEG，60mX 0.25mm，0.25 μ m,结果发现HP-1NNOWAX毛细管柱比较适合此4种成分的分析检测；另外，对参数进样口温度、检测器温度、程序升温速度、流速进行了比较，发现微调条件，4种成分的色谱峰理论塔板数、分离度、拖尾因子均较好。
6.根据权利要求1所述的清凉油含量测定方法，其特征在于:所述线性关系:按上述色谱条件测定，以对照品峰面积的积分值A为纵坐标Y，进样量C ( μ g)为横坐标X，进行线性回归，薄荷脑、樟脑、桉油精和丁香酚在相应范围内均呈良好的线性关系。
7.根据权利要求1所述的清凉油含量测定方法，其特征在于:所述稳定性试验:4种对照品溶液在24h内RSD均小于2%，稳定性较好。
8.根据权利要求1所述的清凉油含量测定方法，其特征在于:所述检测限:采用信噪比法，得到薄荷脑、樟脑、桉油精和丁香酚对照品的最低检测限浓度。
9.根据权利要求1所述的清凉油含量测定方法，其特征在于:所述重复性试验:4种成分的平均含量RSD均〈1%，重复性较好。
10.根据权利要求1所述的清凉油含量测定方法,其特征在于:所述加样回收率试验:4种成分的平均加样回收率均符`合要求，RSD均〈2%。
【文档编号】G01N30/02GK103776930SQ201410035390
【公开日】2014年5月7日 申请日期:2014年1月24日 优先权日:2014年1月24日
【发明者】丁礼琴, 金家骅, 杜子荣, 鞠家星, 卞宝军 申请人:上海中华药业有限公司