一种阿伐那非及其制剂的高效液相色谱分析方法与流程

本发明属于药物分析技术领域，具体而言，涉及一种阿伐那非及其制剂的高效液相色谱分析方法。

背景技术：

阿伐那非(Avanafil)，化学名为4-[(3-氯-4-甲氧基苄基)氨基]-2-[2-(羟甲基)-1-吡咯烷基]-N-(2-嘧啶基甲基)-5-嘧啶甲磺酰胺，CAS登录号为330784-47-9。化学结构式如下：

Avanafil是一种磷酸二酯酶5(PDE5)抑制剂，是Vivus公司从日本田边三菱制药公司转让的研究项目。用于治疗男性勃起功能障碍(ED)，于2012年4月27日上市，剂型为片剂(规格50mg、100mg及200mg)

阿伐那非为一种PDE5抑制剂可以有效的抑制阴茎中cGMP的降解，使阴茎中的cGMP的水平上升，致使阴茎海绵体的平滑肌放松及增进血液的流入，能够使阴茎内血流量增加。

目前，阿伐那非及其制剂在国内还没有上市，该原料药及其制剂的分析方法尚无文献报道。为了保证阿伐那非后续的研发和生产质量，需要对原料药及其制剂的质量进行控制。因此，研究获得一种阿伐那非的有关物质检查和含量测定的检测方法，这对医药生产企业来说显得尤为迫切。

技术实现要素：

为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种可行性高，操作过程简单方便，适用性好，可以广泛应用于阿伐那非及其制剂的高效液相色谱分析法。

为了解决上述技术问题提出的技术方案是：一种阿伐那非的高效液相色谱分析方法，步骤如下：

(1)高效液相色谱条件为：色谱柱：选用十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，规格为4.6mm*150mm，5um、4.6mm*200mm，5um、4.6mm*250mm，5um、4.6mm*150mm，3.5um、4.6mm*200mm，3.5um或4.6mm*250mm，3.5um；

流动相：乙腈和水混合组成，体积配比是乙腈∶缓冲盐＝30～70∶70～30；

缓冲盐为磷酸盐、醋酸盐缓冲体系中的一种或多种；

缓冲盐浓度为1～100mmol/L；

流速：0.5～1.5mL/min；

柱温：30～40℃；

紫外检测器波长：200nm～300nm；

进样体积：5～50uL；

(2)配制样品溶液，其中样品是阿伐那非原料及其片剂；

(3)测定峰面积，计算样品纯度和含量。

优选的，所述流动相配比是乙腈：缓冲盐＝40～50∶60～50，柱温为40℃，流速为1.0ml/min，进样体积为20uL，所述紫外检测器波长为220nm。

优选的，缓冲盐为醋酸缓冲盐体系。

优选的，缓冲盐浓度为5～50mmol/L

优选的，所述阿伐那非制剂优为片剂。

本发明为解决上述技术问题提出的另一技术方案是：所述的阿伐那非的高效液相色谱分析方法在阿伐那非质量研究中的应用。

本发明的有益效果是：

(1)本发明提供的分析方法，根据中国药典2010版，完成方法学验证，包括系统适性试验、专属性(降解试验)、稳定性试验、线性试验、回收率试验、精密度以及耐用性等试验。经过这些验证，本发明提供的分析方法实用可靠，稳定性较好。

(2)本发明从阿伐那非中鉴定了3个已知杂质，包括合成工艺中的中间体1、中间体2和中间体3，同时对原料和制剂进行强降解试验，降解杂质也得到了有效的分离，分离度大于1.5，主峰峰纯度较好，此方法可以有效的评价阿伐那非及其制剂的质量。

(3)使用普通的液相色谱仪即可，设备要求不高。

(4)流动相选用的两个介质普通易得，可行性高。

(5)操作过程简单方便。

(6)适用性好，可以广泛应用于阿伐那非及其制剂样品的质量控制。

附图说明

图1是实施例一的阿伐那非原料的高效液相色谱图

图2是实施例二的阿伐那非原料含量测定对照品的高效液相色谱图

图3是实施例三的阿伐那非片剂的高效液相色谱图

图4是实施例三的阿伐那非片剂空白辅料的高效液相色谱图

图5是实施例一的阿伐那非系统适用性溶液的高效液相色谱图

具体实施方式

以下结合附图对本发明实施方式作进一步地详细描述。

实施例一

阿伐那非原料有关物质检查

仪器与色谱条件：

色谱柱：Agilent C 18；4.6mmX 150mm，3.5um

流动相：乙腈：50mmol/L磷酸盐缓冲液＝40∶60

检测波长：220nm

流速：1.0ml/min

柱温：40℃

进样体积：20uL

高效液相色谱仪：日本岛津LC-20A，PDA检测器

实验步骤：

溶液配制：

取阿伐那非原料药适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含0.5～1mg的溶液，作为有关物质检查供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；精密量取供试品溶液和对照品溶液各20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，如图1所示，按照不加校正因子的自身对照法计算其纯度。

系统适用性溶液：精密称定中间体1，中间体2及中间体3自制对照品适量，加流动相溶解，最终配制成每1ml含10～20ug的杂质混合溶液，精密量取20ul入液相色谱仪，记录色谱图，如图5所示。

按照上述方法检测，结果如下：

表1系统适应溶液的分离度测试

根据表1可以看出，阿伐那非原料中各杂质可以得到有效分离，分离度均大于1.5，峰形良好，峰纯度良好，理论塔板数大于2000，拖尾因子小于1.5，符合标准。

阿伐那非原料纯度为99.81％，总杂为0.19％。从阿伐那非中鉴定了1个已知杂质，为合成中间体3，同时对原料和制剂进行强降解试验，降解杂质也得到了有效的分离，分离度大于1.5，主峰纯度较好，本发明可以有效的评价阿伐那非及其制剂的质量。

本实施例提供的分析方法，根据中国药典2010版，完成方法学验证，包括系统适用性试验、专属性(降解试验)、稳定性试验、线性试验、回收率试验、精密度以及耐用性试验。经过一系列验证，证明本实施例提供的分析方法实用可靠，稳定性较好。

实施例二

阿伐那非原料含量测定

仪器与色谱条件

色谱柱：Agilent C 18；4.6mmX 150mm，3.5um

流动相：乙腈：50mmol/L磷酸盐缓冲液＝60∶40

检测波长：220nm

流速：1.0mL/min

柱温：40℃

进样体积：20ul

仪器：日本岛津LC-20A(PDA检测器)

溶液配制

精密称定阿伐那非自制原料10mg，置100ml容量瓶中，加流动相适量，振摇使溶解后稀释至刻度，摇匀，得到供试品母液；精密量取供试品母液1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，精密量取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图；另精密称定阿伐那非自制对照品10mg，置100ml量瓶中，加流动相适量，振摇使溶解后稀释至刻度，摇匀，得到对照品母液；精密量取对照品母液1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，同法测定(如图2所示)，按外标法以峰面积计算，即得。

含量(％)＝C_R*A_X/A_R

C_R为对照品溶液的浓度

A_X为供试品溶液峰面积

A_R为对照品溶液峰面积

按照上述方法检测，阿伐那非含量测定结果如下：

按干燥品计，阿伐那非原料含量为99.8％。

实施例三

阿伐那非片剂有关物质检查

仪器与色谱条件：

色谱柱：Agilent C 18；4.6mmX 150mm，3.5um

流动相：乙腈：50mmol/L磷酸盐缓冲液＝40∶60

检测波长：220nm

流速：1.0ml/min

柱温：40℃

进样体积：20ul

仪器：日本岛津LC-20A(PDA检测器)

溶液配制：

取阿伐那非片剂，研磨至粉末，取研碎后的粉末适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含0.5～1mg的溶液，过滤后取续滤液作为有关物质检查供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；精密量取供试品溶液和对照品溶液各20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，按照不加校正因子的自身对照法计算其纯度。

按照上述方法检测，结果如下：

阿伐那非片剂中各杂质可以得到有效分离，空白辅料和溶剂对样品分析没有干扰。

阿伐那非片剂纯度为99.83％，总杂为0.17％，杂质顺式异构体为0.13％。

实施例四

阿伐那非片剂含量测定

仪器与色谱条件：

色谱柱：Agilent C 18；4.6mmX 150mm，3.5um

流动相：乙腈：50mmol/L磷酸盐缓冲液＝60∶40

检测波长：220nm

流速：1.0ml/min

柱温：40℃

进样体积：20ul

仪器：日本岛津LC-20A(PDA检测器)

溶液配制：

取阿伐那非片剂，研磨至粉末，精密称定研碎后的粉末适量(约相当于阿伐那非10mg)，置100ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，得到供试品母液；取过滤后的续滤1ml置于10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另精密称定阿伐那非自制对照品10mg，置100ml量瓶中，加流动相适量，振摇使溶解后稀释至刻度，摇匀，得到对照品母液；精密量取对照品母液1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；精密量取供试品溶液和对照品溶液各20ul注入液相色谱仪中，记录色谱图，按照不加校正因子的自身对照法计算其纯度。

按照上述方法检测，结果如下：

阿伐那非片剂含量为98.45％。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。