本实用新型涉及生物技术领域，具体地涉及一种肿瘤活体检测试剂盒。
背景技术：
活体肿瘤成像技术是一种在活生物体，特别是在活动物体的肿瘤部位产生荧光信号，从而被相关荧光检测仪器检测到的一种技术。活体肿瘤成像在在体实验和/或临床研究中是非常重要的评价指标。活体荧光成像是近年来发展起来的一种无损生物医学成像方法。常规的动物活体荧光成像技术是在动物成瘤前，在移植瘤细胞内转入能稳定表达的荧光基因，该基因中细胞内经转录和翻译表达出荧光蛋白，这种荧光蛋白在外界一定波长的荧光激发下产生特定的荧光。因此这种荧光成像技术只能用于活体动物研究。在动物体内成瘤实验前需对肿瘤细胞进行处理，转染外源基因蛋白，并进行较长时间的筛选，获得稳定表达的细胞株亚群，随后再种入动物体内，进行活体观察。这一预处理过程由于对肿瘤细胞转入外源基因，因此在一定程度上改变了该肿瘤细胞的生物学特性，不能反映该细胞的本来生物学功能特征，因此研究结果往往会有一定系统误差。另外即使获得稳定表达的转染表达荧光蛋白的肿瘤细胞，一旦接种到动物体内后，由于失去了抗性筛选压力，荧光蛋白表达也会出现丢失。而且丢失荧光蛋白的肿瘤细胞更加可能获得生长优势，因此在一些需要较长时间观察以及一些肿瘤转移实验中可能无法得到可靠的结果。另外通过荧光蛋白在细胞中表达的方法，需要激发光作用，而且所得到的信号强度较弱。
技术实现要素：
本实用新型要解决的技术问题是为了克服现有的动物肿瘤荧光成像需要在处理肿瘤细胞时进行转染入荧光蛋白表达基因的复杂操作步骤，而对肿 瘤细胞生物学功能产生的干扰和影响，提供了一种肿瘤活体检测试剂盒。本实用新型试剂盒在检测活体肿瘤时不干预肿瘤细胞株，减少了复杂的对肿瘤细胞进行荧光基因转染的操作步骤，避免了对肿瘤细胞本身生物学功能的影响，而且本实用新型检测试剂盒所包括的与荧光化合物CY5.5偶联的CXCR3抗体所产生的荧光信号较强，只在需要评价的时候进行给药观察，大大减少对结果的影响。
本实用新型是通过下述技术方案来解决上述技术问题：
一种肿瘤活体检测试剂盒，其包括：盒盖、盒体、衬垫、装有与荧光化合物CY5.5偶联的CXCR3抗体的容器、注射器和装有抗体稀释缓冲液的容器，所述衬垫设置于所述盒体内，所述衬垫上设有容器孔和槽，所述装有与荧光化合物CY5.5偶联的CXCR3抗体的容器和所述装有抗体稀释缓冲液的容器置于所述容器孔内，所述注射器置于所述槽内。
所述荧光化合物CY5.5可以通过常规的方法与所述CXCR3抗体进行偶联，如按照以下步骤进行偶联：1)将CY5.5和NHS在DMF中，以1∶1.5的摩尔比混合，搅拌反应3小时，温度35℃，用薄层层析和LC-MS检测反应完全；2)加水稀释10倍，HPLC分离纯化，得到纯度95％以上的NHS-CY5.5；3)将所得NHS-CY5.5冻干成粉末，溶于HEPES缓冲液；4)将CXCR3抗体和NHS-CY5.5在HEPES缓冲体系下，以1∶10的摩尔比，反应6小时；5)在缓冲液中反复透析去除游离NHS-CY5.5，得与荧光化合物CY5.5偶联的CXCR3抗体。
所述容器为本领域常规的容器，较佳地为塑料试剂瓶或离心管，更佳地为1.5mL离心管。所述容器孔的数量较佳地为一个到多个，更佳地为两个。
所述抗体稀释缓冲液可以为本领域常规的缓冲液，较佳地为生理盐水或PBS缓冲液，更佳地为生理盐水。
所述肿瘤活体检测试剂盒较佳地还可以包括装有细胞培养基的容器和装有血清的容器。所述培养基较佳地为DMEM培养基。所述血清较佳地为胎牛血清。
所述肿瘤活体检测试剂盒较佳地还可以包括一份使用说明书，所述使用说明书记载利用与荧光化合物CY5.5偶联的CXCR3抗体对活体的肿瘤进行检测的操作步骤。更佳地，所述操作步骤包括将所述与荧光化合物CY5.5偶联的CXCR3抗体静脉注射到荷瘤动物体内，注射后1-48小时在小动物荧光成像仪中观察荧光。
本实用新型的积极进步效果在于：本实用新型的检测试剂盒可以用于靶向识别胆囊癌、肝癌等肿瘤细胞或组织，使用方法简单，在检测活体肿瘤时不干预肿瘤细胞株，减少了复杂的对肿瘤细胞进行荧光基因转染的操作步骤，避免了对肿瘤细胞本身生物学功能的影响，而且本实用新型检测试剂盒所包括的与荧光化合物CY5.5偶联的CXCR3抗体所产生的荧光信号较强，只在需要评价的时候进行给药观察，大大减少对结果的影响。
附图说明
图1为本实用新型实施例1中的肿瘤活体检测试剂盒的结构示意图，其中1为盒盖，2为盒体，3为装有与荧光化合物CY5.5偶联的CXCR3抗体的容器，4为装有生理盐水的容器，5为衬垫，6为注射器。
具体实施方式
下面举各较佳实施例，并结合附图来更清楚完整地说明本实用新型。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。其中所述室温为常规，若无特别说明为15～35℃。
CXCR3和CY5.5抗体购买自sigma公司；
5-6周龄裸鼠购自上海斯莱克实验动物有限责任公司；肺癌细胞、宫颈癌细胞、卵巢癌细胞、胆囊癌细胞和肝癌细胞购买自中科院上海生命科学研究院；DMEM培养基和胎牛血清购买自Gibco公司；
小动物荧光成像仪购买自中科恺盛在体自发荧光分子影像系统。
以下实施例中，荧光化合物CY5.5与CXCR3抗体通过以下方法进行偶 联：
1)将CY5.5和NHS在DMF中，以1∶1.5的摩尔比混合，搅拌反应3小时，温度35℃，用薄层层析和LC-MS检测反应完全；
2)加水稀释10倍，HPLC分离纯化，得到纯度95％以上的NHS-CY5.5；
3)将所得NHS-CY5.5冻干成粉末，溶于HEPES缓冲液；
4)将CXCR3抗体和NHS-CY5.5在HEPES缓冲体系下，以1∶10的摩尔比，反应6小时；
5)在缓冲液中反复透析去除游离NHS-CY5.5，得与荧光化合物CY5.5偶联的CXCR3抗体。
实施例1
一种肿瘤活体检测试剂盒，其形状和结构如图1所示，其包括：盒盖1、盒体2、衬垫5、装有与荧光化合物CY5.5偶联的CXCR3抗体的容器3、装有生理盐水的容器4和注射器6，衬垫5设置于盒体内，所述衬垫5上设有2个容器孔，装有与荧光化合物CY5.5偶联的CXCR3抗体的容器3和装有生理盐水的容器4嵌入2个容器孔内，所述注射器6置于槽内。
实施例2用肿瘤活体检测试剂盒检测活的肿瘤细胞
1)将状态良好的处于指数期生长的肺癌细胞、宫颈癌细胞、卵巢癌细胞、胆囊癌细胞和肝癌细胞消化收集，根据实验需要和细胞生长特性接种到24孔板或6孔板。例如肺癌A549细胞，用含10％胎牛血清的DMEM培养基悬浮细胞，计数，调整浓度为2×105/mL，接种到24孔板，24小时后细胞重新贴壁；
2)继续培养到约50％密度，吸去培养液，PBS轻轻洗三次后，每孔加入无血清培养基500μL及与荧光化合物CY5.5偶联的CXCR3抗体10μL，继续在37度培养2小时。取出后在采用633nm激发光，荧光显微镜下用690nm滤光观察细胞产生的荧光情况。
结果显示，上述肺癌细胞、宫颈癌细胞、卵巢癌细胞、胆囊癌细胞和肝癌细胞均能被本试剂盒检测到，用伪彩显示该荧光强度和分布。
实施例3用肿瘤活体检测试剂盒检测活体小鼠胆囊癌皮下移植瘤
将指数生长期胆囊癌细胞消化，计数，重悬5×106/mL，取1mL注射到6周龄裸鼠前腋皮下，继续饲养2-3周，出现约0.5cm-2cm直径皮下肿瘤。在小鼠尾静脉注射100μL用缓冲液稀释后的与荧光化合物CY5.5偶联的CXCR3抗体。可在注射后1-48小时在小动物荧光成像仪中，采用633nm激发光，用690nm滤光观察裸鼠皮下瘤产生的荧光情况。观察裸鼠荧光情况并拍照记录。
结果显示该裸鼠移植瘤可被与荧光化合物CY5.5偶联的CXCR3抗体识别，在肿瘤部位产生较强的荧光信号，而周围或其他部位则无明显荧光信号。其中注射后1小时-6小时可在心脏部位观察到荧光信号；24-48小时在膀胱部位观察到荧光信号，可以根据荧光范围和强度，相对定量地判断移植瘤中肿瘤细胞的量。
实施例4用肿瘤活体检测试剂盒检测结肠癌肺转移模型肿瘤的活体小鼠
1)将指数生长期结肠癌细胞消化，计数，重悬1×107/mL，取1mL注射到4-5周龄裸鼠前腋皮下，继续饲养3周，推测可能产生肺转移肿瘤；也可解剖一只观察是否存在肺转移，如果前期已经对细胞进行检测确定可被与荧光化合物CY5.5偶联的CXCR3抗体识别，则可用该与荧光化合物CY5.5偶联的CXCR3抗体判断是否出现肺转移而不需要处死实验裸鼠；
2)在小鼠尾静脉注射100μL用缓冲液稀释后的与荧光化合物CY5.5偶联的CXCR3抗体。可在注射后1-48小时在小动物荧光成像仪中，采用633nm激发光，用690nm滤光观察裸鼠肺转移瘤产生的荧光情况。观察裸鼠荧光情况并拍照记录。
结果显示，该裸鼠移植瘤可被试剂盒中与荧光化合物CY5.5偶联的CXCR3抗体识别，可以根据荧光范围和强度，相对定量地判断移植瘤中肿瘤细胞的量。
虽然以上描述了本实用新型的具体实施方式，但是本领域的技术人员应当理解，这些仅是举例说明，本实用新型的保护范围是由所附权利要求书限 定的。本领域的技术人员在不背离本实用新型的原理和实质的前提下，可以对这些实施方式做出多种变更或修改，但这些变更和修改均落入本实用新型的保护范围。