一种脂蛋白相关磷脂酶A2化学发光酶联免疫检测试剂盒的制作方法

文档序号:12591676阅读:223来源:国知局

本发明涉及试剂盒,特别涉及一种脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)化学发光酶联免疫检测试剂盒



背景技术:

脂蛋白磷脂酶A2(1ipoprotein-associated phospholipaseA2,Lp-PLA2)是近年来引起广泛关注的一种与动脉硬化和缺血性心脑血管疾病密切相关的磷脂酶A2超家族、一种新的炎症标记物和一种独立危险因子。它的分子量为45KD,由成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌,并受炎性介质的调节。脂蛋白磷脂酶A2具有促炎症的作用,因此Lp-PLA2从炎症细胞中产生和释放也可以被解读成为一个极佳的前炎症反应指标。Lp-PLA2在血管壁内产生氧化分子,它更易于导致动脉粥样硬化和产生不稳定性斑块。Lp-PLA2水平的升高预示着有斑块形成和破裂的很大危险性,并且不依赖其他脂类和CRP水平。通过检测循环系统中的Lp-PLA2水平,可以独立的预测心脑血管的病发。

目前,已知的检测脂蛋白(a)浓度的方法有酶联免疫法,放射免疫法,荧光免疫测定法等检测方法,上述的测定方法的操作比较复杂,检测用时长,过度浪费资源的缺点,不适合做常规检测。中国国家知识产权局网站上公开了一种脂蛋白(a)检测试剂盒检测,采用胶乳增强免疫透射比浊法,具有稳定性好,检测方便的优点,但是人血清中含有的类风湿因子对试剂盒检测值易产生了干扰,使得个别类风湿因子含量高的血清产生了测量值出现假阳性。此外现有的胶乳增强免疫透射比浊法通过物理吸附法把多克隆抗体标记在不带羧基的聚苯乙烯胶乳颗粒上,该不带羧基的聚苯乙烯胶乳颗粒的稳定性比较差,而且物理吸附的效果也不好,很容易会造成抗体从胶乳颗粒表面脱落。



技术实现要素:

为了解决现有技术中的问题,

为了解决上述问题,本发明所采取的技术方案是:

一种脂蛋白相关磷脂酶A2化学发光酶联免疫检测试剂盒,其特征在于:所述试剂盒包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1为含5g/L聚乙二醇8000,10g/L氯化钠,4g/L EDTA,8g/L的蔗糖,2g/L牛血清蛋白,5g/L的吐温20,1g/L叠氮钠的0.25M氯化铵缓冲液;试剂R2包括:采用化学交联法制备得到的包被有抗人载脂蛋白多克隆抗体的聚苯乙烯胶乳颗粒混合物,3g/L HEPES缓冲液,阿斯巴甜,所述阿斯巴甜与试剂R2的重量体积比为0.2:100g/L;,2g/L的叠氮钠的0.1M氯化铵缓冲液;pH值为9.0。

前述的一种脂蛋白相关磷脂酶A2化学发光酶联免疫检测试剂盒,其特征在于:所述HEPES的pH值为7.0。

前述的一种脂蛋白相关磷脂酶A2化学发光酶联免疫检测试剂盒,其特征在于:所述试剂R1和试剂R2的容积比为3:1。

本发明所达到的有益效果:本发明采用定向偶联法将抗脂蛋白磷脂酶A2抗体包被到聚苯乙烯胶乳颗粒上;本发明将抗脂蛋白磷脂酶A2抗体的非结合活性区域的Fc端定向偶联到聚苯乙烯胶乳颗粒上,不会发生类风湿因子(RF)和嗜异性抗体的干扰所导致的检测结果的假性升高;该方法定向偶联的抗脂蛋白磷脂酶A2抗体偶联到聚苯乙烯胶乳颗粒上后,其抗原结合位点指向流动相,抗体偶联部位为Fc片段,因此不会发生抗体结合力降低的情况,保持了抗体活力,从而大大减少抗体用量,降低了生产成本。本发明试剂盒中的试剂R2中含有阿司巴甜,从而可以减轻或者去除血清中类风湿因子对试剂测值的干扰,避免对个别类风湿因子含量高的血清产生测值假阳性的问题。

具体实施方式

以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案,而不能以此来限制本发明的保护范围。

一种脂蛋白相关磷脂酶A2化学发光酶联免疫检测试剂盒,其特征在于:所述试剂盒包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1为含5g/L聚乙二醇8000,10g/L氯化钠,4g/L EDTA,8g/L的蔗糖,2g/L牛血清蛋白,5g/L的吐温20,1g/L叠氮钠的0.25M氯化铵缓冲液;试剂R2包括:采用化学交联法制备得到的包被有抗人载脂蛋白多克隆抗体的聚苯乙烯胶乳颗粒混合物,3g/L HEPES缓冲液,阿斯巴甜,所述阿斯巴甜与试剂R2的重量体积比为0.2:100g/L;,2g/L的叠氮钠的0.1M氯化铵缓冲液;pH值为9.0。

前述的一种脂蛋白相关磷脂酶A2化学发光酶联免疫检测试剂盒,其特征在于:所述HEPES的pH值为7.0。

前述的一种脂蛋白相关磷脂酶A2化学发光酶联免疫检测试剂盒,其特征在于:所述试剂R1和试剂R2的容积比为3:1。

本发明所达到的有益效果:本发明采用定向偶联法将抗脂蛋白磷脂酶A2抗体包被到聚苯乙烯胶乳颗粒上;本发明将抗脂蛋白磷脂酶A2抗体的非结合活性区域的Fc端定向偶联到聚苯乙烯胶乳颗粒上,不会发生类风湿因子(RF)和嗜异性抗体的干扰所导致的检测结果的假性升高;该方法定向偶联的抗脂蛋白磷脂酶A2抗体偶联到聚苯乙烯胶乳颗粒上后,其抗原结合位点指向流动相,抗体偶联部位为Fc片段,因此不会发生抗体结合力降低的情况,保持了抗体活力,从而大大减少抗体用量,降低了生产成本。本发明试剂盒中的试剂R2中含有阿司巴甜,从而可以减轻或者去除血清中类风湿因子对试剂测值的干扰,避免对个别类风湿因子含量高的血清产生测值假阳性的问题。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征及优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下,本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

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