B细胞恶性肿瘤相关抗原表达量检测试剂盒及检测方法与流程

文档序号:12358655阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种B细胞恶性肿瘤相关抗原表达量检测试剂盒,其特征在于,其试剂包括不同的荧光标记的抗CD45抗体和抗CD19抗体,以及抗CD20或CD22抗体。

2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述抗CD45抗体的荧光标记为Percp。

3.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述抗CD19抗体的荧光标记为APC。

4.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述抗CD20或CD22抗体的荧光标记为PE。

5.根据权利要求1至4任一项所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂还包括红细胞裂解液和磷酸缓冲盐溶液。

6.一种B细胞恶性肿瘤相关抗原表达量检测方法,其特征在于,包括步骤如下:

S1.采集检测标本:抽取B淋巴细胞非霍奇金淋巴瘤患者的外周血或骨髓作为检测标本;

S2.加入抗体及荧光染色:将所述检测标本中加入使用不同的荧光标记的抗CD45抗体和抗CD19抗体,以及抗CD20或CD22抗体,并混匀;

S3.流式细胞术检测:对所述检测标本进行孵育和红细胞裂解后,使用流式细胞术进行检测,设门分型得到CD19+CD20+或CD19+CD22+的靶标细胞荧光强度;

S4.测定标准曲线:使用流式细胞术在所述检测标本同等条件下测定Qua ntiBRITE PE Beads荧光,获得Beads平均荧光强度与抗原表达量的标准曲线;

S5.计算抗原表达量:将所述靶标细胞荧光强度值代入标准曲线换算得到所述检测标本中B淋巴细胞CD20或CD22平均抗原表达量。

7.根据权利要求6所述的检测方法,其特征在于:

执行步骤S2前,对所述检测标本进行白细胞计数,将所述检测标本的细胞浓度调至3×107/mL。

8.根据权利要求6所述的检测方法,其特征在于:

步骤S4测定所述标准曲线时,使用流式细胞仪检测QuantiBRITE PE Beads荧光强度,以前向角/侧向角设门得到Beads;根据PE荧光强度在将Beads分群,并得到每群Beads的荧光强度均值;根据Beads提供的分子量和得到的所述每群Beads的荧光强度均值拟合得到所述标准曲线。

9.根据权利要求6所述的检测方法,其特征在于,步骤S2中,加入所述检测标本的所述不同的荧光标记的抗体为:CD45Percp和CD19APC,以及CD20PE或CD22PE。

10.根据权利要求6至9任一项所述的检测方法,其特征在于,对所述检测标本进行设门分型时,在CD45Percp-SSC图中设门得到CD45阳性SSC的淋巴细胞,进一步在CD45Percp-CD19APC图中设门得到CD45+CD19+的B淋巴细胞;进一步在CD19APC-CD20PE图中设门得到所述CD19+CD20+的靶标细胞,或在CD19APC-CD22PE图中设门得到所述CD19+CD22+的靶标细胞。

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