一种用于检测胃泌素17的试剂盒的制作方法

文档序号:12119455阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于检测人胃泌素17的试剂盒,包括组件1和组件2;

所述组件1为包被有G-17-BSA的微孔板;所述G-17-BSA为多肽,自N末端至C末端依次含有如下两个区段:G-17多肽和牛血清白蛋白成熟肽;所述G-17多肽为:在序列表的序列1所示多肽的N末端第一个氨基酸残基末端连接一个焦谷氨酸得到的多肽;

所述组件2为酶结合物溶液;所述酶结合物溶液中含有HRP标记的小鼠抗G-17单克隆抗体。

2.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述酶结合物溶液中还含有酪蛋白、Proclin-300和BSA。

3.如权利要求2所述的试剂盒,其特征在于:所述酶结合物溶液由溶质和溶剂组成;所述溶剂为pH7.4、0.02M的PBS缓冲液;所述溶质及其在酶结合物溶液中的浓度如下:HRP标记的小鼠抗G-17单克隆抗体的体积百分含量为0.02%、酪蛋白0.1g/100ml、Proclin-300的体积百分含量为0.02%、BSA2g/100ml。

4.如权利要求1至3中任一所述的试剂盒,其特征在于:

所述包被有G-17-BSA的微孔板的制备方法如下:

(1)用pH9.6、0.05mol/L的CB缓冲液稀释G-17-BSA,得到蛋白浓度为2μg/ml的包被液;

(2)取微孔板,每孔加入100μl步骤(1)制备的包被液,2-8℃静置18-24h,然后弃除孔内液体;

(3)完成步骤(2)后,取所述微孔板,每孔加入200μl封闭液,2-8℃静置18-24h,然后弃除孔内液体;封闭液由溶质和溶剂组成;所述溶剂为pH7.4、0.02M的PBS缓冲液;所述溶质及其在封闭液中的浓度如下:蔗糖8g/100ml、BSA0.5g/100ml、酪蛋白0.5g/100ml;

(4)完成步骤(3)后,取所述微孔板,在20-30℃、湿度<40%的环境中干燥18-24h。

5.如权利要求1至4中任一所述的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒中还包括组件3和\或组件4和\或组件5;

所述组件3为20×浓缩洗液;20×浓缩洗液由溶质和溶剂组成;溶剂为pH7.4、0.2mol/L的PBS缓冲液;所述溶质及其在20×浓缩洗液中的浓度如下:Tween 20的体积百分含量为1%;

所述组件4为发光液A和发光液B;

发光液A由溶质和溶剂组成;所述溶剂为pH8.0、0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液;所述溶质及其在发光液A中的浓度如下:鲁米诺3mg/ml、对碘苯酚0.25mg/ml、四苯硼钠0.5mg/ml;

发光液B由溶质和溶剂组成;所述溶剂为pH8.0、0.2mol/L的Tri s-HCl缓冲液;所述溶质及其在发光液B中的浓度如下:过氧化脲0.5mg/ml;

所述组件5为G-17标准品溶液;G-17标准品溶液由S0溶液、S1溶液、S2溶液、S3溶液、S4溶液和S5溶液组成;S0溶液为含1g/100ml BSA和体积百分含量为0.02%的Proclin-300的pH7.4、0.02M的PBS缓冲液;S1溶液、S2溶液、S3溶液、S4溶液和S5溶液均为含G-17、1g/100ml BSA和体积百分含量为0.02%的Proclin-300的pH7.4、0.02M的PBS缓冲液;S1溶液中,G-17的浓度为20pg/ml;S2溶液中,G-17的浓度为100pg/ml;S3溶液中,G-17的浓度为200pg/ml;S4溶液中,G-17的浓度为500pg/ml;S5溶液中,G-17的浓度为1000pg/ml。

6.如权利要求5所述的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒还包括记载有如下操作方法的载体:

(1)制作标准方程

①取包被有G-17-BSA的微孔板,每孔加入50μlG-17标准品溶液和100μl酶结合物溶液,振荡混匀,然后37℃静置60分钟;

②完成步骤①后,用洗涤液洗涤5遍,扣干;所述洗涤液为用蒸馏水或去离子水将20×浓缩洗液稀释至20倍体积得到的溶液;

③完成步骤②后,每孔加入50μl发光液A和50μl发光液B,振荡混匀,然后在化学发光免疫分析仪上检测发光值;

使用log-logit线性拟合方式进行数据处理,制作标准方程:ln[百分结合率/(1-百分结合率)]=Blog10浓度+A;A、B为直线参数;S1溶液至S5溶液中任一溶液对应的发光值除以S0溶液对应的发光值,为百分结合率;

(2)检测待测溶液

待测溶液为待测液体样本、待测液体样本的稀释液或待测固体样本的溶解液;

①取包被有G-17-BSA的微孔板,每孔加入50μl待测溶液和100μl酶结合物溶液,振荡混匀,然后37℃静置60分钟;

②完成步骤①后,用所述洗涤液洗涤5遍,扣干;

③完成步骤②后,后,每孔加入50μl发光液A和50μl发光液B,振荡混匀,然后在化学发光免疫分析仪上检测发光值;

根据步骤(1)得到的标准方程,计算待测溶液中的人胃泌素17浓度。

7.一种用于检测人胃泌素17的试剂盒,包括G-17-BSA和小鼠抗G-17单克隆抗体;所述G-17-BSA为多肽,自N末端至C末端依次含有如下两个区段:G-17多肽和牛血清白蛋白成熟肽;所述G-17多肽为:在序列表的序列1所示多肽的N末端第一个氨基酸残基末端连接一个焦谷氨酸得到的多肽。

8.一种辅助诊断待测者是否患有发生胃体萎缩的慢性胃炎或发生胃窦萎缩的慢性胃炎的试剂盒,包括权利要求1至7中任一所述的试剂盒。

9.如权利要求8所述的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒还包括记载有如下判断标准的载体:如果血清中胃泌素17的浓度高于120pg/ml,待测者疑似患有发生胃体萎缩的慢性胃炎;如果血清中胃泌素17的浓度低于40pg/ml,待测者疑似患有发生胃窦萎缩的慢性胃炎;如果血清中胃泌素17的浓度为50-100pg/ml,待测者疑似不患有发生胃体萎缩的慢性胃炎且不患有发生胃窦萎缩的慢性胃炎。

10.一种酶结合物溶液,由溶质和溶剂组成;所述溶剂为pH7.4、0.02M的PBS缓冲液;所述溶质及其在酶结合物溶液中的浓度如下:HRP标记的小鼠抗G-17单克隆抗体的体积百分含量为0.02%、酪蛋白0.1g/100ml、Proclin-300的体积百分含量为0.02%、BSA2g/100ml。

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