一种依帕司他胶囊的含量测定方法与流程

本发明涉及含量测定方法技术领域，具体涉及一种依帕司他胶囊的含量测定方法。

背景技术：

依帕司他胶囊-颗粒(Epalrestat Capsules-particles)主要成份为依帕司他，化学名称为：5-[(1Z,2E)-2-甲基-3-苯丙烯叉]-4-氧代-2-硫代-3-噻唑烷乙酸，分子式为C₁₅H₁₃NO₃S₂，是一种醛糖还原酶特异性性抑制剂，通过阻断多远通路而发挥作用，对治疗糖尿病周围神经病变是一种安全、有效的药物。目前国内仅有紫外分光光度法测定含量，并没有收载关于高效液相色谱法测定依帕司他胶囊含量的方法，日本药典JP16中仅收载了用高效液相色谱法(内标法)对依帕司他及依帕司他片的含量检测方法。

技术实现要素：

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种依帕司他胶囊的含量测定方法，该含量测定方法采用高效液相色谱法(外标法)对依帕司他胶囊的含量进行测定，该方法准确可靠，且快速简便，大大降低了检测成本。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种依帕司他胶囊的含量测定方法，其包括以下步骤：

(1)依帕司他胶囊标准品溶液的制备：精密称取依帕司他对照品20mg，置于100ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺适量，超声处理5～15min使依帕司他溶解，用N,N-二甲基甲胺定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为标准品溶液；

(2)依帕司他胶囊样品溶液的制备：取依帕司他胶囊内容物适量，研细，精密称取55mg依帕司他胶囊内容物粉末，置100ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺适量，超声处理5～15min使依帕司他溶解，用N,N-二甲基甲酰胺稀释并定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

(3)测定：精密量取对照品溶液及供试品溶液各3μL，分别注入液相色谱仪中，记录色谱图，按外标法以峰面积计算依帕司他的含量；色谱条件如下：采用以十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，以体积比磷酸盐缓冲液：乙腈＝2:1为流动相，检测波长280～310nm；柱温20～30℃；流速0.2～1.0ml/min。

作为优选方案，本发明所述的含量测定方法包括以下步骤：

(1)依帕司他胶囊标准品溶液的制备：精密称取依帕司他对照品20mg，置100ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺适量，超声处理5min使依帕司他溶解，用N,N-二甲基甲胺定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为标准品溶液；

(2)依帕司他胶囊样品溶液的制备：取依帕司他胶囊内容物适量，研细，精密称取55mg依帕司他胶囊内容物粉末，置100ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺适量，超声处理5min使依帕司他溶解，用N,N-二甲基甲酰胺稀释并定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

(3)测定：精密量取对照品溶液及供试品溶液各3μL，分别注入液相色谱仪中，记录色谱图，按外标法以峰面积计算依帕司他的含量；色谱条件如下：采用以十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，以体积比磷酸盐缓冲液：乙腈＝2:1为流动相，检测波长280nm；柱温20～30℃；进样量3μL；流速1.0ml/min。

作为本发明优选的实施方式，所述步骤(1)、(2)及(3)均是在避光条件下操作的。

作为本发明优选的实施方式，所述步骤(3)中的磷酸盐缓冲液为体积比为1：1的0.05mol/L磷酸二氢钾和0.05mol/L磷酸氢二钠的混合物，所述磷酸盐缓冲液的PH值为6.5。

相比现有技术，本发明的有益效果在于：

本发明采用高效液相色谱法(外标法)检测依帕司他胶囊的含量测定，该方法较依帕司他胶囊现行标准YBH008372004-2014Z的紫外-可见分光光度法的灵敏度高，精密度、准确度及稳定性好；较日本药典JP16中内标法方法简便；且该方法的供试品配制无需二次稀释，降低了稀释误差且节约了配制时间。本发明根据依帕司他胶囊中活性成分结构性质特点，通过大量实验筛选出最佳的流动相组成、洗脱程序、流速，检测波长、色谱柱等分析条件，经多次实验验证表明，本发明提供的依帕司他胶囊的含量检测控制方法可以灵敏、准确的检测活性成分，因此具有很高的分析效率，可以克服现有检测方法中灵敏度低、准确度低、稳定性差等诸多缺点，可定性、定量检测分析依帕司他。因此，本发明提供的依帕司他胶囊的含量测定方法的准确性、重复性、线性关系、稳定性等均能达到科研和生产的要求，适于推广应用，对控制依帕司他胶囊的质量和保证临床疗效具有重要意义。

附图说明

图1为依帕司他标准品的高效液相色谱检测分析图；

图2为依帕司他胶囊样品的高效液相色谱检测分析图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明。

一种依帕司他胶囊的含量测定方法，其包括以下步骤：

(1)依帕司他胶囊标准品溶液的制备：精密称取依帕司他对照品20mg，置于100ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺适量，超声处理5～15min使依帕司他溶解，用N,N-二甲基甲胺定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为标准品溶液；

(2)依帕司他胶囊样品溶液的制备：取依帕司他胶囊内容物适量，研细，精密称取55mg依帕司他胶囊内容物粉末，置100ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺适量，超声处理5～15min使依帕司他溶解，用N,N-二甲基甲酰胺稀释并定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

(3)测定：精密量取对照品溶液及供试品溶液各3μL，分别注入液相色谱仪中，记录色谱图，按外标法以峰面积计算依帕司他的含量；色谱条件如下：采用以十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，以体积比磷酸盐缓冲液：乙腈＝2:1为流动相，检测波长280～310nm；柱温20～30℃；流速0.2～1.0ml/min。

实施例1：依帕司他胶囊的含量测定方法的方法学考察

1、稳定性试验：

按本发明所述的含量测定方法步骤(2)制备供试品溶液，避光冷藏，于0小时、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时，分别精密量取3μL注入高效液相色谱仪，每个时间段进样2针，记录保留时间及峰面积，依次计算各时间段的峰面积及保留时间与初次测定(即0小时进样)时的峰面积以及保留时间的RSD(％)，峰面积及保留时间的RSD(％)均小于2.0％，表明供试品溶液在11小时内具有良好的稳定性。

2、重复性试验：

按本发明所述的含量测定方法步骤(2)制备供试品溶液6份，按步骤(1)制备对照品溶液，按步骤(3)的色谱条件及测定方法进行检测，计算得依帕司他胶囊的平均含量为36.60％，RSD＝0.8％(n＝6)，说明该方法的重复性良好。

3、中间精密度试验：

取同一批次依帕司他胶囊，在不同的日期由不同的操作人员使用不同仪器，按本发明所述的含量测定方法对其进行检验，计算得依帕司他胶囊的平均含量为36.24％，RSD为1.2％，表明该含量测定方法的中间精密度良好。

4、线性关系考察：

在避光条件下，精密称取依帕司他对照品20mg，置50ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺适量，超声5min使依帕司他溶解，用N,N-二甲基甲酰胺稀释并定容至刻度，作为标准品溶液；再分别精密量取标准品溶液4.0ml、4.5ml、5.0ml、5.5ml、6.0ml置于10ml容量瓶中，各加N,N-二甲基甲酰胺稀释并定容至刻度，摇匀，即得。分别精密量取3μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以浓度(C)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标绘制标准曲线图，得回归方程为y＝70000000x+36990,R2＝0.99997，Y轴的截距小于100％响应值的2％，表明依帕司他在0.1613mg/ml～0.2419mg/ml浓度范围内与峰面积的线性关系良好。

5、回收试验：

在避光条件下，精密称取约相当于依帕司他标示量80％、100％、120％的主药加入相应辅料各3份，分别置100ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺适量，超声5min使依帕司他溶解，用N,N-二甲基甲酰胺稀释并定容至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液各3μL，分别注入液相色谱仪中，记录色谱图，计算依帕司他的回收率。依帕司他的平均回收率为99.4％，RSD＝0.6％(n＝9)，表明该方法的准确度良好。

实施例2：不同批次的样品含量测定

取10批不同批次的依帕司他胶囊样品，按照以下步骤测定依帕司他含量：

(1)依帕司他胶囊标准品溶液的制备：精密称取依帕司他对照品20mg，置100ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺适量，超声处理5min使依帕司他溶解，用N,N-二甲基甲胺定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为标准品溶液；

(2)依帕司他胶囊样品溶液的制备：取依帕司他胶囊内容物适量，研细，精密称取55mg依帕司他胶囊内容物粉末，置100ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺适量，超声处理5min使依帕司他溶解，用N,N-二甲基甲酰胺稀释并定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

(3)测定：精密量取对照品溶液及供试品溶液各3μL，分别注入液相色谱仪中，记录色谱图，按外标法以峰面积计算依帕司他的含量；色谱条件如下：采用以十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，以体积比磷酸盐缓冲液：乙腈＝2:1为流动相，检测波长280nm；柱温20～30℃；进样量3μL；流速1.0ml/min。

结果见表1：

表1依帕司他胶囊样品含量测定结果

注：上述步骤均是在避光条件下操作的。

综上所述，本发明提供的依帕司他胶囊的含量测定方法灵敏度高，准确性、重复性、线性关系、稳定性等均能达到科研和生产的要求，操作简便快捷，适于推广应用，对控制依帕司他胶囊的质量和保证临床疗效具有重要意义。

上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。