一种同位素稀释超高效液相色谱质谱联用测定维生素K1的方法与流程

文档序号:12592894阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种同位素稀释超高效液相色谱质谱联用测定维生素K1的方法,其特征在于:所述方法包括以下步骤:

S1:配制维生素K1对照品溶液和维生素K1同位素内标溶液的步骤;

用甲醇分别溶解维生素K1和维生素K1同位素内标,制成已知浓度的维生素K1对照品储备液和已知浓度的维生素K1同位素内标储备液;

用甲醇将维生素K1对照品储备液和维生素K1同位素内标储备液分别稀释成一系列具有不同已知浓度的维生素K1对照品溶液和已知浓度的维生素K1同位素内标溶液;

S2:建立维生素K1标准曲线的步骤:

分别吸取一定体积的具有不同已知浓度的维生素K1对照品溶液,加入1~5倍体积的维生素K1同位素内标溶液,涡旋混匀,加入1~10倍体积的萃取溶液,涡旋混匀,离心,取一定体积的上清液,室温下氮气吹干,加入一定体积的复溶剂,涡旋混匀,离心,得到一系列具有不同已知浓度的维生素K1标准曲线工作液;

在相同的超高效液相色谱质谱条件下,将一定体积的具有不同已知浓度的维生素K1标准曲线工作液分别注入超高效液相色谱质谱联用仪中,获得一系列具有不同已知浓度的维生素K1标准曲线工作液的色谱图;

以维生素K1标准曲线工作液的色谱图中维生素K1色谱峰峰面积与维生素K1同位素内标色谱峰峰面积的比值为纵坐标或横坐标,以相应的维生素K1标准曲线工作液的维生素K1浓度为横坐标或纵坐标,建立维生素K1标准曲线;

S3:采集待测样品溶液的色谱图的步骤;

吸取一定体积的待测样品,加入1~5倍体积的维生素K1同位素内标溶液,涡旋混匀,加入1~10倍体积的萃取溶液,涡旋混匀,离心,取一定体积的上清液,室温下氮气吹干,加入一定体积的复溶剂,涡旋混匀,离心,得待测样品溶液;

在与S2步骤中相同的超高效液相色谱质谱条件下,取一定体积的待测样品溶液注入超高效液相色谱质谱联用仪中,获得待测样品溶液的色谱图;

S4:计算待测样品中维生素K1浓度的步骤;

将待测样品溶液色谱图中维生素K1色谱峰峰面积与维生素K1同位素内标色谱峰峰面积的比值带入已建立的维生素K1标准曲线,计算出待测样品中维生素K1的浓度。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法还包括:

S5:采集加标回收率样品/质控样品溶液的色谱图的步骤;

吸取一定体积的待测样品,加入若干体积的不同已知浓度的维生素K1对照品溶液,并使两者体积之和与S3步骤待测样品体积相同;加入1~5倍于前述总体积的维生素K1同位素内标溶液,涡旋混匀,加入1~10倍于待测样品和对照品总体积的萃取溶液,涡旋混匀,离心,取一定体积的上清液,室温下氮气吹干,加入一定体积的复溶剂,涡旋混匀,离心,得到不同浓度的加标回收率样品/质控样品溶液;

在与S2步骤中相同超高效液相色谱质谱条件下,取一定体积的加标回收率样品/质控样品溶液注入超高效液相色谱质谱联用仪中,获得加标回收率样品/质控样品溶液的色谱图;

将加标回收率样品/质控样品溶液色谱图中维生素K1色谱峰峰面积与维生素K1同位素内标色谱峰峰面积的比值带入已建立的维生素K1标准曲线,计算出加标回收率样品/质控样品中维生素K1的浓度;

S6:计算加标回收率的步骤:

回收率%=(测得浓度-待测样品平均浓度)/加标浓度×100%。

3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述超高效液相色谱质谱条件包括:

色谱柱:采用十八烷基硅烷键合的固定相;流动相:酸水溶液-酸/盐有机相溶液;流动相的流速:0.3~0.5mL/min;柱温:30~60℃;进样量:2~20μL;

离子源:电喷雾离子源;扫描模式:正离子模式;检测模式:多反应监测;毛细管电压:5500V;离子源温度:550℃;离子源雾化气:40psi;离子源加热辅助气:60psi;气帘气:30psi;碰撞气:4psi。

4.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述流动相为甲酸水溶液-甲酸甲酸铵甲醇溶液或0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸2mM甲酸铵甲醇溶液。

5.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述离子源雾化气、离子源加热辅助气、气帘气和碰撞气中的气体均为氮气。

6.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述萃取溶剂为正己烷、乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷中的至少一种;

优选地,所述复溶剂为纯水、甲醇、乙腈、乙醇中的至少一种。

7.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述维生素K1同位素内标为2H7-维生素K1

8.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述维生素K1对照品溶液的浓度范围为0.1~20ng/mL。

9.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述涡旋混匀的时间为0.5~5min;

10.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述离心条件为:4℃、10000~15000r/min、10~20min。

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