时间分辨荧光微球标记肌红蛋白抗体的保存液的制作方法

本发明涉及生物化学制剂技术领域，特别是涉及一种时间分辨荧光微球标记肌红蛋白抗体的保存液。

背景技术：

在急性心肌损伤时，肌红蛋白(MYO)最先被释放到血液中，在症状出现2-3小时后，血中肌红蛋白(MYO)可超出正常上限，9-12小时达到峰值，24-36小时后恢复。MYO阳性虽不能确诊AMI，但可用于早期排除AMI诊断的重要指标，如MYO阴性，则基本排除心肌梗死。针对检测准确性、稳定性而最后进行测试用到的标抗稀释液是其中关键的一步。

时间分辨荧光生化分析技术是基于稀土荧光配合物特殊的荧光性质而建立起来的，时间分辨荧光测定技术是利用稀土配合物具有长寿命荧光这一特点，在样品被脉冲光激发后、荧光信号采集前，根据样品中所包含的荧光物质荧光寿命的不同引入一定的延迟时间(delay time)，待短寿命的背景荧光完全淬灭后，再对长寿命的特异性荧光信号进行测定，采用时间分辨荧光测定技术可以有效消除来自样品、试剂、仪器等的短寿命非特异性荧光的干扰，从而极大地提高荧光检测的灵敏度。但是荧光微球的稳定性对后续的检测步骤起着关键的作用，如果荧光微球保存不当，就会导致后续检测无法进行，影响到最终检测试剂的效能，给试剂检测带来严重的风险。

时间分辨荧光微球标记肌红蛋白抗体(以下简称标记抗体)保存液对维持标记抗体在液体中的稳定，使其不产生沉淀至关重要，目前尚没有见到的标记抗体保存液的报道。

技术实现要素：

基于此，本发明的目的是提供一种用于保存时间分辨荧光微球标记肌红蛋白抗体的保存液。

具体的技术方案如下：

一种时间分辨荧光微球标记肌红蛋白抗体的保存液，包括如下质量百分比的组分：

4-羟乙基哌嗪乙磺酸：0.1％-1.5％，氯化钠：1.0％-3.0％，氯化钾：0.3％-0.8％、乙二胺四乙酸二钠：0.08％-0.9％，十二烷基磺酸钠：0.01％-0.06％，牛血清白蛋白：0.1％-3.0％，葡聚糖:0.05％-0.5％，曲拉通：0.02％-0.2％，吐温-20:0.01％-0.05％，防腐剂:0.02％-0.1％，水：余量；

调节pH至8.0-9.0。

在其中一些实施例中，该保存液包括如下质量百分比的组分：0.6％-1.2％，氯化钠：1.0％-1.5％，氯化钾：0.5％-0.7％、乙二胺四乙酸二钠：0.08％-0.2％，十二烷基磺酸钠：0.03％-0.05％，牛血清白蛋白：0.1％-0.5％，葡聚糖：0.1％-0.3％，曲拉通：0.02％-0.15％，吐温-20：0.02％-0.05％，防腐剂：0.02％-0.05％，水：余量；

调节pH至8.0-9.0。

在其中一些实施例中，十二烷基磺酸钠：曲拉通：吐温-20的质量比为1.5-2.5:2-4:1。

在其中一些实施例中，十二烷基磺酸钠：曲拉通：吐温-20的质量比为1.5:2.5:1。

在其中一些实施例中，所述葡聚糖的分子量为8000-12000。

在其中一些实施例中，所述葡聚糖的分子量为10000。

在其中一些实施例中，所述曲拉通为曲拉通x-100。

在其中一些实施例中，所述防腐剂为procline。

本发明的原理及优点：

由于时间分辨荧光微球标记肌红蛋白抗体容易沉淀，造成抗体活性不高，且容易失活。微球的表面带有大量的正电荷，形成一层正电荷层以维持整个微球在溶液体系中的稳定，当抗体标记到微球表面后会破坏微球表面的电荷层从而导致微球表面不稳定，容易产生集聚并最终形成沉淀，使其失去效果。本发明中通过添加适量的多种类的表面活性剂(十二烷基磺酸钠、曲拉通、吐温-20等)，并按照一定的比例添加，由于表面活性剂在一定的浓度时能排列成球状、棒状、束状、层状/板状等结构，实现对微球的包裹，对微球起到稳定的作用。且表面活性剂带有一定的正电荷，对微球表面电荷起到一定的补充，使得微球能稳定的存在溶液中。

上述保存液，使用原材料成本低，容易获取，为该类荧光微球的保存提供一个比较稳定的微环境。

附图说明

图1为实施例1的保存液和对比例保存液保存当天的检测结果对比图；

图2为实施例1的保存液和对比例保存液保存1个月后的检测结果对比图。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

实施例1

一种时间分辨荧光微球标记肌红蛋白抗体的保存液，由如下步骤制备而得：

首先称取葡聚糖1.5g，溶解到500g的水溶液中，在60度下搅拌1h，然后超声10min，冷却到室温后，称取4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)6g，氯化钠(NaCl)10g，氯化钾(KCL)5g、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)0.9g、十二烷基磺酸钠(SDS)0.3g、牛血清白蛋白(BSA)10g,曲拉通X-100 0.5g,吐温-200.2g,Procline 0.5g,水补足至1000g，混合均匀，调节pH到8.5，即得到时间分辨荧光微球标记肌红蛋白抗体保存液。

实施例2

一种时间分辨荧光微球标记肌红蛋白抗体的保存液，由如下步骤制备而得：

首先称取葡聚糖1g，溶解到500g的水溶液中，在60度下搅拌1h，然后超声10min，冷却到室温后，称取4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)8g，氯化钠(NaCl)14g，氯化钾(KCL)5g、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)0.8g、十二烷基磺酸钠(SDS)0.5g、牛血清白蛋白(BSA)15g,曲拉通X-100 0.8g,吐温-20 0.2g,Procline 0.5g,水补足至1000g，混合均匀，即得到时间分辨荧光微球标记肌红蛋白抗体保存液。

对比例1

图1和2中所示其它保存液1的配方为：氯化钠(NaCl)：0.8％，氯化钾(KCl)：0.02％，磷酸二氢钾(KH₂PO₄)：0.02％，十二水合磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H₂O)2.9％。

对比例2

图1和2中所示其它保存液2的配方为：葡聚糖:0.1％,4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)0.8％，氯化钠(NaCl)1.4％，氯化钾(KCL)0.5％、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)0.08％、聚乙烯吡咯烷酮0.05％、牛血清白蛋白(BSA)15g,曲拉通X-405 0.08％,吐温-80 0.02％,Procline 0.5g

对比例3

图1和2中所示其它保存液3的配方为：首先称取葡聚糖1g，溶解到500g的水溶液中，在60度下搅拌1h，然后超声10min，冷却到室温后，称取4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)8g，氯化钠(NaCl)14g，氯化钾(KCL)5g、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)0.8g、十二烷基磺酸钠(SDS)2.0g、牛血清白蛋白(BSA)15g,曲拉通X-100 0.08g,吐温-20 1.0g,Procline 0.5g,水补足至1000g，混合均匀，即得其它保存液3。

应用试验

使用实施例1得到的保存液与对比例保存液对标记抗体进行保存，检测结果如图1和2所示。

使用相同的标记流程对微球进行标记，标记抗体为采购的商品化的肌红蛋白(MYO)单克隆抗体，将标记好的抗体分别保存在两种溶液中，检测时使用相同的溶液并且稀释到相同的工作浓度进行检测。图1表示当天保存后的抗体进行检测，图2表示使用4种保存液分别保存微球30天后再进行检测的效果。从图2的结果可知，实施例1的保存液保存微球30天后抗体依然保持活性。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。