原料药中氯甲基甲醚残留的气相色谱质谱联用检测方法与流程

本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及一种原料药中氯甲基甲醚残留的气相色谱质谱联用(gc-ms)检测方法。

背景技术：

药物杂质是活性药物成分(api，原料药)或药物制剂中不希望存在的化学成分。原料药物中的杂质可能源于合成过程或起始物料、中间体、溶剂、催化剂、反应副产物、原料药成分不稳定、与辅料不兼容，或者是与包装材料发生反应等等。药物中各种杂质对于最终药物的安全性有很大的影响。其中，基因毒性杂质(genotoxicimpurity,gti)是指化合物本身直接伤细胞dna，产生基因突变或体内诱变，具有致癌可能或者倾向。其特点是在很低浓度时即可造成人体遗传物质的损伤，进而导致基因突变并可能促使肿瘤发生，因其毒性较强对用药的安全性产生了强烈的威胁。

氯甲基甲醚是药物合成过程中经常作为氯甲基化剂，有时还作为溶剂或活泼的有机中间体存在，如磺胺嘧啶药物的生产。氯甲基甲醚目前已被国际癌症研究机构列为确认人类致癌物，在原料药中的残留则是典型的基因毒性杂质。

原料药中氯甲基甲醚的检测未见有相关的报道。由于氯甲基甲醚化学性质活泼，稳定性较差，直接对其检测十分困难。关于空气中氯甲基甲醚的测定，现有的技术已有报道，其检测方法是用2,4,6-三氯苯酚钠盐的甲醇钠溶液于与其发生衍生化反应，生成具有强电负性的衍生化产物，再用正己烷萃取后，用电子捕获检测器进行测定。发明人按该方法对原料药中氯甲基甲醚的残留进行测定，发现制样过程较为繁琐，耗时较长，且定量分析时的精密度和准确度不高。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是，提供一种简单便捷的、易于操作的、精密度和准确度更高的氯甲基甲醚的检测方法。

为解决上述技术问题，本发明提供的氯甲基甲醚的气相色谱质谱联用(gc-ms)检测方法，样品是采用醇作为溶剂溶解得样品溶液，醇同时作为溶剂和氯甲基甲醚的衍生化试剂。

发明人在开发检测方法时意外发现氯甲基甲醚溶于醇溶剂中时，检测发现其在常温下能够温和、快速、完全地进行反应，溶液配制后可直接检测，无需现有技术中采用复杂的衍生化试剂和萃取操作。该方法适用于所有可在醇中溶解的原料药。所述醇为分析实验中常用的醇溶剂，如甲醇、乙醇、异丙醇等，均能作为溶剂及衍生化试剂与氯甲基甲醚快速、完全地进行反应。

(1)对照品溶液及样品溶液的制备：精密称取适量氯甲基甲醚对照品，用醇溶解并定容成具有一定浓度梯度的多个对照品溶液；精密称取适量原料药样品，用醇溶解并定容得到一定浓度的样品溶液；

(2)将所述多个对照品溶液以及样品溶液按所述(2)色谱条件依次进样，记录色谱图；gc-ms方法条件：

色谱柱采用db-624毛细管气相色谱柱，色谱柱柱长为30m，内径为0.32mm，膜厚为1.8μm。；

采用氦气作为载气，载气流速为1.5ml/min；

采用直接进样，进样量为1μl，进样口温度为200℃；

采用分流进样，分流比为5:1；

采用程序升温，升温程序：起始温度40℃，保持3min，以15℃/min升至110℃，保持0min，以40℃/min升至220℃，保持2min。

采用四级杆质谱检测器，四级杆温度为150℃；

采用ei离子源，离子源能量为70ev，离子源温度为280℃；

采用scan模式进行定性检测，扫描质量范围为50～500m/z；

采用sim模式进行定量检测，定量离子为89m/z。

(3)结果计算：

根据多个对照品溶液的图谱数据和浓度数据制备线性相关工作曲线，代入样品的图谱数据计算并得出样品溶液浓度，完成了氯甲基甲醚残留的测定。

本发明提供的氯甲基甲醚的gc-ms检测方法的技术优势在于：

1.本方法以醇同时作为溶剂和衍生化试剂，，溶液配制简单便捷、易于操作，大大的简化了制样过程，提高了检测效率，而且降低试剂成本。现有技术中gc方法检测氯甲基甲醚衍生化方式复杂，且需在碱性环境下使用专门的衍生化试剂进行衍生然后再进行萃取，不适合原料药中氯甲基甲醚残留的检测

2.本发明的方法能够有效检出氯甲基甲醚在原料药中的残留，定量限达到60ng/ml。

3.本发明的方法测定gc-ms谱基线平稳，不发生漂移。质谱检测器选择性强，干扰少，提高了方法的精密度和准确度。

4.本发明的方法用于氯甲基甲醚的残留测定，具有良好的灵敏度、线性关系、精密度、准确度和稳定性，在原料药质量研究以及杂质分析与控制研究等方面具有重要研究价值。

附图说明

图1a～1b分别是是cmme-dcm溶液和cmme-ipa溶液的质谱图。

图2是空白溶液、灵敏度溶液和对照品溶液的gc-ms色谱图。

图3是本方法线性测试的工作曲线。

具体实施方式

下面将结合附图对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明以下结合实施例(附图)做进一步描述，但不限制本发明。

实施例1原料药中氯甲基甲醚残留测定的专属性研究：

精密称取约100mg氯甲基甲醚(cmme)到含有大约10ml二氯甲烷的100ml容量瓶中，用二氯甲烷定容到刻度后摇匀，标记为cmme-dcm溶液。氯甲基甲醚在二氯甲烷中稳定。

精密称取约100mg氯甲基甲醚到含有大约10ml异丙醇的100ml容量瓶中，用异丙醇定容到刻度后摇匀，标记为cmme-ipa溶液。氯甲基甲醚在异丙醇溶液中与异丙醇发生反应，反应如下：

分别对cmme-dcm溶液和cmme-ipa溶液进行gc-ms分析，方法条件：

色谱柱采用db-624毛细管气相色谱柱，色谱柱柱长为30m，内径为0.32mm，膜厚为1.8μm。；

采用氦气作为载气，载气流速为1.5ml/min；

采用直接进样，进样量为1μl，进样口温度为200℃；

采用分流进样，分流比为5:1；

采用程序升温，升温程序：起始温度40℃，保持3min，以15℃/min升至110℃，保持0min，以40℃/min升至220℃，保持2min。

采用四级杆质谱检测器，四级杆温度为150℃；

采用ei离子源，离子源能量为70ev，离子源温度为280℃；

采用scan模式进行定性检测，扫描质量范围为50～500m/z；

所得cmme-dcm溶液和cmme-ipa溶液的质谱图如图1所示，cmme在ipa中已完全转化，此衍生化反应温和、快速、完全。

实施例2原料药中氯甲基甲醚残留测定的灵敏度、精密度、线性、准确度和稳定性研究：

精密称取约100mg氯甲基甲醚到含有大约10ml异丙醇的100ml容量瓶中，用异丙醇定容到刻度后摇匀，精密移取0.6ml该溶液到100ml容量瓶中，用异丙醇定容到刻度后摇匀，标记为对照品储备溶液。

gc-ms分析方法条件：

色谱柱采用db-624毛细管气相色谱柱，色谱柱柱长为30m，内径为0.32mm，膜厚为1.8μm。；

采用氦气作为载气，载气流速为1.5ml/min；

采用直接进样，进样量为1μl，进样口温度为200℃；

采用分流进样，分流比为5:1；

采用程序升温，升温程序：起始温度40℃，保持3min，以15℃/min升至110℃，保持0min，以40℃/min升至220℃，保持2min。

采用四级杆质谱检测器，四级杆温度为150℃；

采用ei离子源，离子源能量为70ev，离子源温度为280℃；

采用sim模式进行定量检测，定量离子为89m/z。

灵敏度测试：

精密移取1ml对照品储备溶液到100ml容量瓶中，用异丙醇定容到刻度后摇匀，标记为灵敏度溶液(60ng/ml)。

灵敏度溶液测试的gc-ms色谱图中，目标峰的信噪比为36，完全达到中国药典中对于定量限的要求(s/n≥10)。

精密度测试：

精密移取1ml对照品储备溶液到10ml容量瓶中，用异丙醇定容到刻度后摇匀，标记为对照品溶液(600ng/ml)。

连续进样6次对照品溶液，gc-ms色谱图中，6针对照品溶液的保留时间的相对标准偏差(rsd)为0.02％，6针对照品溶液的峰面积的相对标准偏差(rsd)为0.5％。由此可见，该方法的精密度很好。灵敏度溶液和对照品溶液的叠图如图2所示。

线性测试：

分别精密移取0.1ml，0.5ml，1ml，1.5ml，2ml对照品储备溶液到5个10ml容量瓶中，用异丙醇定容到刻度后摇匀，所得到的线性测试溶液的浓度依次为60、300、600、900、1200ng/ml。

线性测试的gc-ms色谱图中，5个浓度的测试溶液峰面积的线性相关系数r＝0.9997。由此可见，该方法对于cmme的测试在60ng/ml-1200ng/ml的范围内，有良好的线性(图3)。

准确度测试：

精密称取100mg已知cmme残留量的原料药样品9份于5ml容量瓶中，分别用50％(300ng/ml)，100％(600ng/ml)，150％(900ng/ml)的对照品溶液溶解并定容。各配制3份回收率溶液进行测试。9份溶液的回收率统计如下表，其回收率平均值为102％，相对标准偏差为3％。由此可见，该方法的准确度良好。

稳定性测试：

取同一对照品溶液，分别于0h，6h，12h，18h，24h进样，测定。结果6h，12h，18h，24h测定的峰面积相对于0h峰面积的比值分别为100.1％，98.0％，98.9％，99.2％。表明对照品溶液在24小时内稳定。

综上所述，上述各实施例及附图仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，皆应包含在本发明的保护范围内。