一种微型多仓室控制的化学发光试剂盒及其检测方法与流程

本发明涉及医用检测技术领域，尤其涉及一种微型多仓室控制的化学发光试剂盒及其使用方法。

背景技术：

近年来，我国体外诊断试剂(IVD)迅猛发展。免疫类试剂几乎占用半壁江山。其中，化学发光和免疫层析占据着绝对的市场份额。

目前，免疫类体外诊断试剂主要向两个方向发展：

1)高通量、自动化和高品质的化学发光路线：其主要代表为罗氏、雅培、西门子和贝克曼等进口厂商。国产的有深圳新产业、迈克、微高、安图、长光华医和科华等。这类设备为高通量、动化和定量。

2)微型和便携化路线：这也就是通常说的POCT(荧光免疫层析)市场，以万孚和基蛋生物为代表，这类试纸条，优点就是便携、快速；缺点同样明显准确度有限。

随着技术的发展，市场的需求慢慢向着准确、定量、微型和便携化方向发展。由此催生了微型化学发光试剂及仪器。这也符合我国IVD市场发展的需要。其中比较典型的厂家有深圳华迈兴微POCT化学发光检测试剂盒。但其缺点也很明显，单次但项目检测，还不能完全替代市场上的免疫层析条子。

技术实现要素：

本发明为解决现有技术中的上述问题，提出一种微型多仓室控制的自动化内部反应化学发光试剂盒及其检测方法。

本发明的微室控化学发光，其设计理念将大型发光仪器检测一个项目所需的步骤进行微型化，通过液体在多个仓室间的精确控制和转移复制大型自动发光仪器检测所需的步骤。可同时检测1～4个项目，应用前景非常广泛。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供一种微型多仓室控制的化学发光试剂盒，包括：

试剂盒体，其由盒主体、软胶垫和焊板组成，所述盒主体上设有六个液体仓/四个反应仓、一个气仓、一个转轴仓以及一个干燥剂仓；每个所述液体仓和所述反应仓底部均设有第一小孔；所述反应仓底部的四个第一小孔通过底部四个带有凸台的沟槽连接到所述转轴仓周围，并与六个所述液体仓、底部的六个第一小孔组成环形分布；四个所述反应仓上端还分别设有凹槽，所述干燥剂仓和气仓之间开设有通气孔，使所述反应仓与气仓相通；

可旋转设置于所述转轴仓内类似注射器结构的转轴，其由腔体、推杆和胶塞-组成并形成仓室，所述腔体还设有开孔，所述开孔可与所述仓室连通；所述推杆上端还设有第二卡勾，所述胶塞固定到所述推杆底部；

设置于所述试剂盒体顶部的翻盖和侧盖，用于密封所述剂盒体顶部；以及

设置于所述试剂盒体底部的底盖，用于密封所述剂盒体底部。

进一步地，在所述的微型多仓室控制的化学发光试剂盒上，所述干燥剂仓两侧还设有卡块，所述卡块作为焊接透光板时定位用。

进一步地，在所述的微型多仓室控制的化学发光试剂盒上，所述盒主体底部还设有用于固定所述底盖的卡槽。

进一步地，在所述的微型多仓室控制的化学发光试剂盒上，所述焊板上设有四个与所述沟槽对应的第二小孔，所述焊板的上侧面设有所述软胶垫，当所述焊板通过焊接或其他方式固定到所述盒主体底部后，所述软胶垫与带有凸台的所述沟槽卡紧啮合形成四个液道将所述小孔与分别与所述反应仓底部的四个通孔连通。

进一步优选地，在所述的微型多仓室控制的化学发光试剂盒上，四个所述第二小孔与六个所述液体仓、底部的第一通孔形成一组在同一平面的环形分布孔。

进一步地，在所述的微型多仓室控制的化学发光试剂盒上，所述腔体底部还设有第二卡槽，用于通过所述第二卡槽将所述化学发光试剂盒固定到检测设备的驱动轴上。

进一步地，在所述的微型多仓室控制的化学发光试剂盒上，所述翻盖由固定盖和活动盖组成，所述固定盖上设有第一圆孔、加样口和六个带有气孔的气孔凸台；所述活动盖上设有与六个所述气孔凸台对应的第二圆孔和熔接面，所述熔接面上敷设有封口膜。

进一步优选地，在所述的微型多仓室控制的化学发光试剂盒上，所述底盖上设有圆形凸台、布置于所述圆形凸台四周与所述卡槽契合的第一卡勾以及位于其底部的楔形槽。

进一步优选地，在所述的微型多仓室控制的化学发光试剂盒上，包括设置于所述述干燥剂仓和四个所述反应仓顶部的透光板，所述透光板上设有四个对应于所述反应仓的圆形透光片、两侧设有与所述卡口，所述卡口卡扣在所述卡块上。

本发明的第二个方面是提供一种所述微型多仓室控制的化学发光试剂盒的检测方法，具体包括如下步骤：

(1)取下侧盖E；

(2)打开翻盖上的活动盖，使封口膜与带有气孔的气孔凸台23分离；

(3)在样本加样口22处，向液体仓3内加入血清或血浆50～250微升，并盖好活动盖C2；

(4)旋转转轴B吸取液体仓3内的血清或血浆50～200微升；

(5)继续旋转转轴B将吸取的血清和血浆与液体仓6中的磁珠混合；

(6)继续旋转转轴B将液体仓6中的磁珠血清或血浆混合液注入到所述反应仓7中溶解配体颗粒进行反应；

(7)反应结束后，将反应仓7中的反应液体转移至废液仓；

(8)洗涤液清洗1～3次；

(9)加注发光液检测。

本发明采用上述技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：

本发明提供的微型多仓室控制的化学发光试剂盒，应用磁珠分离技术或寡核苷酸标记分离技术、抗体颗粒冻干技术及微型仪器，将检测过程的所需的组份置于特定的仓内；反应过程按项目规定的程序对各组分进行分配混合和反应，整个测试过程在试剂盒内部完成，无污染，可以同时实现对多个项目的快速、高灵敏度和定量检测。

附图说明

图1为本发明一种微型多仓室控制的化学发光试剂盒的整体结构示意图；

图2为本发明一种微型多仓室控制的化学发光试剂盒的整体结构的装配示意图；

图3、4、5为本发明一种微型多仓室控制的化学发光试剂盒中试剂盒主体的结构示意图；

图6、7为本发明一种微型多仓室控制的化学发光试剂盒中转轴的结构示意图；

图8为本发明一种微型多仓室控制的化学发光试剂盒中顶部翻盖的结构示意图；

图9为本发明一种微型多仓室控制的化学发光试剂盒中底盖的结构示意图；

图10为本发明一种微型多仓室控制的化学发光试剂盒中透光板的结构示意图；

图11为本发明一种微型多仓室控制的化学发光试剂盒中试剂盒内部结构的剖视图；

其中，各附图标记为：

A-试剂盒体，A1-盒主体，A2-软胶垫，A3-焊板；B-转轴，B1-腔体，B2-推杆，B3-胶塞；C-翻盖，C1-固定盖，C2-活动盖，D-底盖，E-侧盖，F-透光板，G-封口膜，1-6-液体仓，7-反应仓，8-气仓，9-转轴仓，10-干燥剂仓，11-通气孔，12-卡块，13-凹槽，14-第一卡槽，15-沟槽，16-第二小孔，17-仓室，18-第一卡勾，19-开孔，20-第二卡槽，21-第一圆孔，22-加样口，23-气孔凸台，24-第二圆孔，25-熔接面，26-圆形凸台，27-第一卡勾，28-楔形槽，29-卡口，30-圆形透光片，31-第一小孔。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本发明，但是下述实施例并不限制本发明范围。

实施例1

如图1-7所示，本实施例提供一种微型多仓室控制的化学发光试剂盒，包括：

试剂盒体A，其由盒主体A1、软胶垫A2和焊板A3组成，如图5所示；所述盒主体A1上设有六个液体仓1、2、3、4、5、6、四个反应仓7、一个气仓8、一个转轴仓9以及一个干燥剂仓10，如图3-4所示；每个所述液体仓和所述反应仓7底部均设有第一小孔31；所述反应仓7底部的四个第一小孔31通过底部四个带有凸台的沟槽15连接到所述转轴仓9周围，并与六个所述液体仓1、2、3、4、5、6底部的六个第一小孔31组成环形分布；四个所述反应仓7上端还分别设有凹槽13，所述干燥剂仓10和气仓8之间开设有通气孔11，使所述反应仓7与气仓8相通；

可旋转设置于所述转轴仓9内类似注射器结构的转轴B，如图1、图6所示，其由腔体B1、推杆B2和胶塞B-3组成并形成仓室17，所述腔体B1还设有开孔19，所述开孔19可与所述仓室17连通；所述推杆B2上端还设有第二卡勾18，所述胶塞B3固定到所述推杆B2底部；

设置于所述试剂盒体A顶部的翻盖C和侧盖E，用于密封所述剂盒体A顶部；以及

设置于所述试剂盒体A底部的底盖D，用于密封所述剂盒体A底部。

如图4所示，在本实施的微型多仓室控制的化学发光试剂盒上，所述干燥剂仓10两侧还设有卡块12，所述卡块12作为焊接透光板F时定位用。并且在所述盒主体A1底部还设有用于固定所述底盖D的卡槽14。

如图5所示，在本实施的微型多仓室控制的化学发光试剂盒上，所述焊板A3上设有四个与所述沟槽15对应的第二小孔16，所述焊板A3的上侧面设有所述软胶垫A2，当所述焊板A3通过焊接或其他方式固定到盒所述主体A1底部后，所述软胶垫A2与带有凸台的所述沟槽15卡紧啮合形成四个液道将所述小孔16与分别与所述反应仓7底部的四个通孔31连通。且四个所述第二小孔16与六个所述液体仓1、2、3、4、5、6底部的第一通孔31形成一组在同一平面的环形分布孔。

如图7所示，在本实施的微型多仓室控制的化学发光试剂盒上，所述腔体B1底部还设有第二卡槽20，用于通过所述第二卡槽20将所述化学发光试剂盒固定到检测设备的驱动轴上。

如图8所示，在本实施的微型多仓室控制的化学发光试剂盒上，所述翻盖C由固定盖C1和活动盖C2组成，所述固定盖C1上设有第一圆孔21、加样口22和六个带有气孔的气孔凸台23；所述活动盖C2上设有与六个所述气孔凸台23对应的第二圆孔24和熔接面25，所述熔接面25上敷设有封口膜G。

如图9所示，在本实施的微型多仓室控制的化学发光试剂盒上，所述底盖D上设有圆形凸台26、布置于所述圆形凸台26四周与所述卡槽14契合的第一卡勾27以及位于其底部的楔形槽28。

如图2、10所示，在本实施的微型多仓室控制的化学发光试剂盒上，包括设置于所述述干燥剂仓10和四个所述反应仓7顶部的透光板F，所述透光板F上设有四个对应于所述反应仓7的圆形透光片30、两侧设有与所述卡口29，所述卡口29卡扣在所述卡块12上。当透光板F与盒主体A1焊接完成后凹槽13与透光板间形成4个气孔，使四个反应仓7与干燥剂仓10连通，干燥剂仓10通过通气孔11与气仓8连通。

实施例2

本实施提供一种微型多仓室控制的化学发光试剂盒的检测方法，具备包括如下步骤：

(1)取下侧盖E；

(2)如图3所示，盒主体A1内设有的6个液体仓1、2、3、4、5、6，在盒主体A1与顶盖C焊接后，再使用封口膜G封住顶盖C上的6个带有气孔凸台23，使6个液体仓和气仓8密闭，打开翻盖C上的活动盖C2，使封口膜G与带有气孔的气孔凸台23分离；以使密闭的液体仓1、2、3、4、5、6和气仓8接通室外空气；

(3)在样本加样口22处，向液体仓3内加入血清或血浆50～250微升，并盖好活动盖C2；

(4)将试剂盒沿底部楔形槽28放入检测设备，使转轴底部第二卡槽20固定到设备驱动轴上，同时推杆B2上端设有的第二卡勾18进入设备上部分设有的抓取位置，设备驱动转轴B转动，使开孔19连接到盒体A仓室对应孔位，使对应仓室与转轴仓9连通再上下驱动推杆B2和胶塞B3，吸取液体仓3内的血清或血浆50～200微升，完成抽取仓室3内液体；

(5)继续旋转转轴B将开孔19连接到盒体A上的液体仓6对应的孔位31，将吸取的血清和血浆与液体仓6中的磁珠混合；

(6)继续旋转转轴B，以同样的方式将液体仓6中混合好的磁珠血清或血浆混合液注入到所述反应仓7中溶解配体颗粒进行反应，完成测试所需反应，如图11所示；

(7)反应结束后，将反应仓7中的反应液体转移至废液仓-液体仓1；再上下驱动推杆B2和胶塞B3，完成不同仓室液体的转移或混合；

(8)洗涤液清洗1～3次；

(9)最后，加注发光液检测，通过设备的扫描装置通过透光板读取反应仓内的测试结果。

所述配体颗粒，包含：抗体、抗原、半抗原、多克隆抗体、单克隆抗体和激素受体等。本实施例中样本体积为50～250微升，优选200微升。本实施例需要配套一台小型化学发光检测仪，用于实现样本和液体在多个仓室间的精确转移和控制及光子检测。本实施例可使用于基于磁微粒的化学发光技术，也可以用于基于寡核苷酸标记的化学发光技术。

本实施例化学发光试剂盒是将检测过程的所需的组份(磁珠液、洗涤液、发光液、抗原或抗体微球等)置于特定的仓内。反应过程按项目规定的程序对各组分进行分配混合和反应。包含：抗原抗体结合，形成三明治结构、磁珠富集和洗脱、发光检测等步骤，自动化完成。

实施例3CRP和PCT二联检项目，抗体颗粒冻干：

(1)冻干缓冲液：20mM Tris、5％海藻糖、20ng/ml酪蛋白、5％葡萄糖、2％PVP K30、0.4％Tween 2.0、0.01％Prolin 300，0.1％AESF，pH值＝7.5～8.0；

(2)将分别标记生物素和吖丁酯的anti-CRP和anti-PCT抗体，分别特定比例溶于冻干缓冲液中。；

(3)将上述准备的抗体，置于造粒仪上(或手工)，以每秒30或50微升体积将液滴滴入超低温不相容的液体中；制成冻结颗粒；

(4)将冻结颗粒移装入瓶中，迅速转移至预先降温至-70度冻干机隔板上；

(5)真空干燥：-70度，预冻2小时；-70度，1～2小时，真空度为0～500mTorr；-50度，24～36小时，真空度为0～500mTorr；-25度，2～4小时，真空度为0～500mTorr；0度，1～2小时，真空度为0～500mTorr；25度，2～4小时，真空度为0～500mTorr；程序结束后，出厂；

(6)抗体颗粒应为白色有光泽的颗粒。

应用例

1、试剂盒组装：

(1)盒体：

将翻盖C底部固定盖C1焊接到试剂盒主体A上端，使六个仓室1、2、4、5、6、8顶部封闭，六个仓室分别通过固定盖C1上设有的六个气孔与外界连通，仓室3与加样口22对应连通，转轴仓9与位置与第一圆孔21对应；然后将转轴B从盒体A底部插入到转轴仓9内，推杆B2穿过第一圆孔21使第二卡勾18到达与翻盖C平行位置，再将底盖D从盒主体A下端套入，使底盖D上设有的四个第一卡勾27与主体A1设有的第一卡槽14卡紧，同时圆形凸台26顶住转轴B下端，将转轴B上带有开孔19的面压紧盒主体A底部的软胶垫A2，使盒体A底部形成密闭，当转轴B的开孔19转动到盒体底部对应孔位置时，盒体A是对应的仓室与转轴B上的仓室17连通，此时再通过上下移动推杆B2就可以实现抽取盒体A内对应仓室中的液体或是向仓室中注射液体；

将透光板F通过两侧设有的卡口29定位并焊接到盒体A上，使四个圆形透光片30与反应仓7对应，各仓室形成密闭状态，通过通气孔11与气仓8连通；

然后将封口膜G熔接到盖合好的翻盖C顶部熔接面25和六个带有气孔的气孔凸台23上，将气孔凸台23的气孔封闭，使盒体A内的各液体仓1、2、4、5、6、8和反应仓7完全封闭，方便液体仓和反应仓内液体/固体试剂的保存和运输；(2)试剂：反应仓7中选择两个仓室，一个反应仓中分别加入生物素标记和吖丁酯标记anti-CRP的抗体颗粒各一颗；另一个反应仓中加入生物素标记和吖丁酯标记anti-CRP的抗体颗粒各一颗；液体仓2灌装700～1000微升的发光液；液体仓5灌装2000～3000微升的洗涤液；液体仓6灌装100～500微升的洗涤液。

2、上机检测：

(1)取下侧盖E，打开上盖C2，加入200微升血清；

(2)盖好上盖C2，将试剂盒放进仪器；

(3)检测。

3、结果分析：

(1)CRP和PCT最低检测线为1pg/ml；

(2)线性相关系数大于99％；

(3)批次见的稳定性很好，CVs％小于1％。

以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。