发明领域本发明涉及血管疾病的诊断、治疗、和预防。更特别地，本发明涉及使用il-1α自身抗体诊断、治疗、和预防血管疾病。发明背景数十年来，动脉硬化(atherosclerosis)在至少三种疾病——心脏病(heartdisease(hd))、末梢动脉疾病((peripheralarterialdisease(pad))和脑血管疾病(cerebrovasculardisease(cd))——中的作用被研究。这些疾病类别中的病理进程是类似的，并且动脉硬化现在被认为是一种系统性疾病，而与哪一个血管床(vascularbed)被影响无关。因此，动脉硬化的社会负担是巨大的：在2002年，估计全美国有71,100,000人受心脏病的影响，导致947,428人死亡并耗费3935亿美元。在2005年，有5,400,000美国人忍受中风的影响，在医疗保健方面的花费预计达$56.8。预计动脉硬化的全球负担会上升。动脉硬化是一种系统疾病。在许多患者中，它是潜伏的、并影响一个以上的血管床。动脉硬化的早期检测或对容易发生动脉硬化的患者的辨认，对预防患病和死亡是很关键。因此，在本领域内需要确定能辨别存在患动脉硬化危险的患者的方法以及治疗已经受动脉硬化相关疾病影响的患者的方法。发明详述本发明涉及人体中高滴定量il-1α自身抗体降低缺血性心脏病或其发展为冠心病风险的观察发现。本发明提供了通过确定个体的il-1α自身抗体的滴定量，来检测该个体发生动脉硬化或动脉硬化相关疾病之风险的强有力的手段。本发明也提供了使用il-1α自身抗体来降低血管疾病(如，冠心病、末梢动脉疾病、和脑血管疾病)的风险、发展、或症状的方法。在被分析的患者中，高达50％的患者，主要是在老年男性中，il-1α被以足够诱发高亲和度、高滴定度、中和性的抗体反应的量释放。hansen等，《欧洲临床研究杂志》(eur.j.clin.invest.)24,212-18,1994。而且，个体产生il-1α自身抗体的能力，提供了保护效应，对抗了il-1α在动脉壁病理炎症性过程(动脉硬化)的发展中的一些未知作用。血管疾病的风险与il-1α自身抗体滴定度之间的相关性是令人吃惊的，因为据信il-1α主要在细胞间水平上发挥其生物学作用，在产生il-1α作为膜关联分子的细胞之临近区域中作为一种自分泌物质，或作为一种严格的副分泌物质。此外，目前没有机理可以解释il-1α在动脉硬化发展中的作用。因此，靶向il-1α的抗体在治疗或防止血管疾病上有治疗价值是在意料之外的。il-1α自身抗体(il-1αautoantibodies)根据本发明，“il-1α自身抗体”包括从b细胞(包括活化的和/或永生b细胞)、血液、血清、或血浆中分离出的全长抗体；包含全长il-1α自身抗体中的il-1α结合位点的功能抗体片段(如，f(ab)'2片段，f(ab)'片段，fab片段，双链fv片段，和单链抗体)；通过表达来源于b细胞的cdna所产生的重组免疫球蛋白分子或表达编码免疫球蛋白分子的合成核苷酸序列产生的重组免疫球蛋白分子；单克隆自身抗体(按照以下描述产生)；和合成的il-1α自身抗体(按照以下描述产生)。il-1α自身抗体通常是一种igg分子，特别地，是igg4分子(garrone等，《分子免疫学》(mol.immunol.)33,649-58,1996)，但也可以是igm，ige，iga或igd分子。il-1α自身抗体也包括与另一分子(例如受体、配体、酶、毒素、载体、等等)偶联的上述任何分子，以及由一种同型(isotype)自身抗体的可变部分与另一种同型的恒定部分结合构成的自身抗体。il-1α自身抗体优选地与il-1α以高亲和力结合。高亲和力il-1α自身抗体一般对il-1α结合的平衡亲和常数(ka；或kd的倒数)在1014m-1到5x10-7m-1之间(如，5x107，10-13，5x108，10-12，5x108，109，5x109，1010，5x1010，1011，5x1011，1012，5x1012，1013，或5x1013m-1)。il-1α自身抗体与il-1α的特异结合可以用任何合适的方法进行测定，这些方法包括，例如，诸如实时双分子互动分析(real-timebimolecularinteractionanalysis)(bia)(sjolander&urbaniczky,anal.chem.63,2338-45,1991和szabo等,curr.opin.struct.biol.5,699-705,1995)的技术。如本领域已知的，ka可通过特定结合数据的scatchard图线计算得到。也参见美国专利5,959,085。本发明的il-1α自身抗体，优选地，在体外和体内，中和il-1α的生物活性(如，il-1α诱导的il-2分泌)。更优选地，il-1α自身抗体降低或消除il-1α与其受体的结合。中和活性和受体结合活性，可用satoh等在《免疫药物学》(immunopharmacology)27，107-18，1994中所描述的方法进行测定。下面所述的方法及组合物包括人il-1α自身抗体和其它哺乳动物il-1α自身抗体，这些哺乳动物包括：但不限于，其它灵长类动物(如大猩猩、黑猩猩、狒狒、松鼠猴)，同伴动物(companionanimals)(如猫、兔子、狗、马)，家畜(如牛、绵羊、猪、山羊、马)和实验动物(如猫、狗、豚鼠、兔子、绵羊、山羊、猪、黑猩猩和狒狒)。获得il-1α自身抗体的方法il-1α自身抗体可通过多种方法获得。在一些实施方式中，多克隆il-1α自身抗体的制剂可从b细胞、血液、血浆或血清中获得，或者来自单一个体或从2个或更多个体的合并样本获得。b细胞来源包括外周血、扁桃体、腺样增殖体、和脾脏。参见美国专利5,959,085。该个体或者这些个体可以是健康的或有自身免疫疾病，特别是il-1α自身抗体过度产生的自身免疫疾病。这些疾病包括，如schnitzler综合症(schnitzler’ssyndrome)(saurat等，j.allergyclin.immunol.88,244-56,1991)，自免疫起泡疾病(autoimmuneblisteringdisorder)(如，天疱疮/类天疱疮(pemphigus/phemphigoid))(garrone等，1996)，和慢性炎症性关节炎(garrone等，1996)。循环il-1α自身抗体存在呈阳性的献血者可通过已知的方法，如酶联免疫吸附测定(elisa)、放射性免疫沉淀反应(radioimmunoprecipitation)、蛋白质印迹法(westernblot)等，进行辨别。参见如satoh等，1994；saurat等，1991；svenson等，j.clin.invest.92,2533-39,1993；bendtzen等，mol.biotechnol.14,251-61,2000；svenson等，scand.j.immunol.29,489-92,1989；svenson等，scand.j.immunol.32,695-701,1990；svenson等，j.clin.invest.92,2533-39,1993；和svenson等，cytokine4,125-33,1992。在一些实施方式中，血浆用血浆取出法(plasmapheresis)或清血法(apheresis)获得。在一些实施方式中，捐献者的血清用il-1α酶联免疫吸附测定(enzyme-linkedimmunoadsorbantassay(elisa))进行筛选。因为血清中非常少量的自由il-1α与针对il-1α的中和性自身抗体的存在相关，该测试可以非常快速地筛选并初步选出那些有提供合适的中和性抗体的高可能性的捐献者血清。该方法可以简化初始筛选过程并缩短发展时间。il-1α测试试剂盒可从例如abazymellc；alpcodiagnostics；antigenixamericainc.；autogenbioclearukltd；bendermedsystems；biosourceinternational；biovision；caymanchemical；cellsciences；chemicon；cytolabltd.,endogen；gehealthcare(以前为amershambiosciences)；leincotechnologies,inc.；peprotech；和r&dsystems公司得到。il-1α自身抗体可从个体或合并的血液、血浆、或血清中，用本领域已知的方法进行纯化，所述方法如超滤、渗析、固定于非特异蛋白支持物后清洗或在特异蛋白支持物上进行亲和色谱。参见us2005/0147603。人il-1α自身抗体可由人igg的商业制剂(如，(sandoz，哥本哈根，丹麦))，(baxter，丹麦)，或(novonordisk，丹麦)纯化获得。参见ross等，j.interferonres.14,159-60,1994；svenson等，j.clin.invest.92,2533-39,1993。il-1α自身抗体的亲和纯化在如，satoh等，1994中描述的。在一些实施方式中，例如，从100个捐献者收集到的血浆或血清的合并物，可用蛋白g亲和色谱法，测试放射性标记的il-1α与igg的结合作用。合适的放射性标记是125i。放射性示踪物被观察到与合并物中的igg结合，且加入到合并物中的天然il-1α的回收可用il-1αelisa进行测定。产生阳性合并物的捐献者的血浆或血清，可被单独重测定；并且，在10％血浆中，il-1α对igg的可饱和结合(通过放射性标记的il-1α与igg的饱和结合判断)可以被测定。例如，il-1α自身抗体呈高度阳性的捐献者血浆的稀释物，可与125i标记的il-1α(3,500cpm)，以终体积200μl进行温育。igg结合的示踪物可用g蛋白亲和色谱法分析。igg结合的和无125i标记的il-1α可通过二抗沉淀进行分离。平均解离或亲和常数，以及最大的il-1α和igg结合能力，可用scatchard图计算。高阳性血清的捐献者，即那些血浆抗体浓度在0.1nm到35nm间含有皮摩尔(picomolar)亲和力的il-1α自身抗体，可被用于从外周血中收集产生il-1α自身抗体的b淋巴细胞。然而，有用的il-1α自身抗体可显示出某一范围的亲和力，从飞摩尔(femptomolar)到纳摩尔(nanomolar)的亲和力，该范围内的亲和力——取决于靶点及抗体治疗所期望的药物动力学，均可被认为是治疗上有用的。血浆中il-1α自身抗体的浓度可能会随着克隆或富集的敏感程度和效率发生显著变化，可能在0.1皮摩尔到0.1纳摩尔的范围内，或相反地，正如在血浆b细胞恶性肿瘤的例子中，可能在高浓度的35nm到3500nm的范围内。产生il-1α自身抗体的外周血淋巴细胞可在培养基中接受刺激而生长，也因此可以用本领域已知方法成为永生细胞，例如使用病毒(即，爱-巴病毒(epsteinbarrvirus)，ebv)、化学试剂、或核酸(如致癌基因)。这些永生细胞接着可以用已知方法克隆，来提供大量人il-1α自身抗体的可靠来源。在一些实施方式中，来自合适捐献者的血液样品中的b淋巴细胞，用ebv、在受辐射单核细胞与toll样受体激动剂(toll-likereceptoragonist)(如cpg寡核苷酸)的存在下，在大量培养液中被永生化(immortalized)，其中toll样受体激动剂起到记忆b细胞的多克隆活化剂的作用并提高它们对ebv感染的易感性。之后，永生b淋巴细胞通过磁力与荧光激活(fluorescence-activated)细胞分选的组合方法，选出igg阳性的记忆b淋巴细胞。在12-14天后，对来自含有10个igg阳性记忆b细胞的培养基上清液进行分析，以便分析特异性il-1α自身抗体的存在。阳性培养物被重涂平板，并用限制稀释(limitingdilution)来分离单个的、有适当il-1α自身抗体生产力的永生b淋巴细胞克隆。参见，例如wo91/09115和美国专利5,959,085。在另一个实施方式中，如本领域所熟知，分离的淋巴细胞被用于产生杂交瘤(参见，如《酶学方法》(methodsinenzymology)，121卷，第i和ii部分，1986；garrone等，1996)。如本领域所熟知，产生il-1α自身抗体的杂交瘤可在体外繁殖，以提供该自身抗体的稳定来源。可选地，杂交瘤细胞可被注射进小鼠腹膜内，之后它们产生肿瘤。这些肿瘤伴随着腹水积液的产生，这些腹水积液中含有所希望的单克隆自身抗体。单克隆自身抗体可用传统的方法，如超滤、超速离心、渗析、和免疫亲和色谱法，从腹水积液中回收出来。rna可以从永生b细胞克隆或杂交瘤克隆中获得，并被用作扩增反应(如，pcr)的模板，从而获得编码il-1α自身抗体的cdna。参见美国专利5,959,085。采用本领域熟知的重组dna方法，编码全长il-1α自身抗体或其功能化片段的cdna可以被包含在表达载体中，并被用于在原核或真核宿主细胞中表达il-1α自身抗体。参见，例如garrone等，1996。宿主细胞接下来可被用于增殖il-1α自身抗体。可选地，任意特定il-1α自身抗体可被分离，并且其氨基酸序列可用已知方法确定。编码该氨基酸序列的核酸分子可被合成，并被用在表达载体中来产生克隆的il-1α自身抗体。如果需要，il-1α自身抗体的原始重链恒定区域可用不同型(如，igg1，igg2，igg3，igg4，iga，igd，igm或ige)的恒定区域取代。参见美国专利5,959,085。il-1α自身抗体可用本领域已知技术化学合成。参见，如merrifield，j.am.chem.soc.85，2149-2154，1963；roberge等，《科学》(science)269，202-04，1995。蛋白合成可用手工技术(manualtechnique)或借助自动操作进行。自动化合成可使用例如appliedbiosystems431a肽合成仪(peptidesynthesizer)(perkinelmer)完成。任选地，il-1α自身抗体的片段可分别合成，并用化学方法结合起来以产生全长分子。il-1α自身抗体可通过可通过筛选抗体文库获得，如(knappik等，《分子生物学杂志》(j.mol.biol.)296，57-86，2000)，scfv噬菌体展示文库(如，pharmacia重组噬菌体抗体系统，目录号27-9400-01；和stratagenesurzaptm噬菌体展示试剂盒，目录号240612)，等等。参见wo92/18619；wo92/20791；wo93/01288；wo92/01047；wo92/09690；fuchs等，bio/technology9，1370-72，1991；hay等，(1992)humantibodhybridomas3；81-85；huse等，(1989)《科学》(science)246:1275-1281；mccafferty等，《自然》(nature)(1990)348:552-554；griffiths等，(1993)emboj.12:725-734；hawkins等，(1992)jmolbiol226:889-896；clackson等，(1991)《自然》(nature)352:624-628；gram等，(1992)pnas89:357&3580；garrad等，(1991)bio/technology9:1373-1377；hoogenboom等，(1991)nucacidres19:4133-4137；和barbas等，(1991)pnas88:7978-7982。如果需要，可对il-1α自身抗体进行修饰，以便增强其对il-1α的亲和结合力。参见，如美国专利6,914,128。筛选方法根据本发明，低滴定度的il-1α自身抗体，或低亲和力的人抗il-1α自身抗体的存在，表示：该个体发生动脉硬化相关疾病或该个体动脉硬化相关疾病严重程度加剧的可能性。如果在免疫检验(如，放射性免疫检验，elisa，或蛋白质印记法)中，在个体血清稀释度不超过约1：100(如，1：1，1：10，1：50，或1：100的稀释度)时，检测到阳性反应，那么该个体有“低滴定度”的il-1α自身抗体。如果在稀释程度大于1：100(如，1：1000，1：10,000，1：100,000等)的免疫检测中仍能检测到阳性反应，那么该个体有“高滴定度”的il-1α自身抗体。低亲和度的il-1α自身抗体通常对il-1α结合的ka在10m-1到107m-1之间(如，10，5x102，103，5x103，104，5x104，105，5x105，106，5x106，和107m-1)。从某个体取得的测试生物学样本(包括，如血液、血浆、血清)可被检测，以确定其il-1α自身抗体的测试滴定度。该个体可以是健康的，或表面上健康的，或可以是已知患有动脉硬化相关疾病的。动脉硬化相关疾病可以是，例如脑血管疾病、外周血管疾病、缺血性心脏疾病或冠状动脉疾病。本领域中已知的任何方法都可用于检测个体测试生物样本中的il-1α自身抗体。这些方法包括，但不限于：与放射性标记的il-1α的结合作用，elisa，il-1α与其受体的竞争结合作用，用流式细胞计数的fitc标记的il-1α，蛋白质印迹法等。参见，如bendtzen等，mol.biotechnol.14，251-61，2000；ross等，blood90，2376-80，1997；hansen等，immunol.lett.30，133，1991；svenson等，scand.j.immunol.29，489-92，1989；svenson等，scand.j.immunol.32，695-701，1990；svenson等，cytokine4，125-33，1992；saurat等，j.allergyclin.immunol.88，244-56，1991。优选的是，如在bendtzen等，mol.biotechnol.14，251-61，2000中描述的那些放射性免疫检测。测试生物学样本中il-1α自身抗体的滴定度，可用本领域已知标准方法计算。检测可以是定性测定或定量测定。可选地，使用fitc标记的il-1α分辨表达il-1α自身抗体的b淋巴细胞，il-1α特异b淋巴细胞频率可与血清中il-1α水平相关，且因此成为发生动脉硬化或相关疾病风险的指示。药物组合物与治疗方法本发明的药物组合物包括上面定义的高亲和力的il-1α自身抗体。il-1α自身抗体可由单一来源(例如，单一个体，永生b细胞克隆的克隆，或单一杂交瘤)或由两个或多个这样的来源衍生，两个或多个这样的来源包括两个或多个单克隆il-1α自身抗体制剂，或单克隆与多克隆il-1α自身抗体的混合物。药物组合物是无热原的。药物上可接受载体“药物上可接受载体(pharmaceuticallyacceptablevehicles)”包括任何和所有的生理上兼容的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌与抗真菌试剂、等渗剂和吸收延缓剂、以及类似物。药物上可接受载体的例子，包括：水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、葡萄糖、甘油、乙醇等等，以及它们的组合物之一种或多种。在一种或多种等渗剂被引入的情形中，等渗剂例如是糖；多元醇，如甘露醇；山梨糖醇；或氯化钠。药物上可接受载体可进一步包括少量辅助物质(辅料(auxiliarysubstances))，如润湿剂或乳化剂，防腐剂，或缓冲液，它们增强il-1α自身抗体的保存时间或效力。本发明的药物组合物可以是多种形式。它们包括，例如液体、半固体和固体药剂形式，如液体溶液(如，适于注射和输注(injectableandinfusible)的溶液)，分散体或悬液，片剂，丸剂，粉剂，脂质体和栓剂。优选的形式取决于预期的给药方式及治疗应用。例如，il-1α自身抗体可被冻干成高纯度晶体形式。终产物可以适合重配(reconstitution)和注射的无菌冻干粉末提供。冻干粉末可被装于无菌小瓶中，每个瓶中含有如1-1000mg之间的il-1α自身抗体。每个瓶中可含有额外的非药物成分，如以下的一种或多种；蔗糖、聚山梨醇酯80、磷酸二氢钠、一水化物、聚乙二醇，和磷酸氢二钠及二水化物。在一些实施方式中，瓶中的il-1α自身抗体可在使用前立即重新配制，用例如1-30ml注射用无菌水，美国药典(usp)，最终ph值约7.2。可包含防腐剂。如果产品不含防腐剂，该产品通常在重配后立即使用，并且不重新登记入库或储存。重配产品的总剂量可用0.9％氯化钠注射液，美国药典，进一步稀释到50-500ml。输注浓度可在0.04mg/ml到40mg/ml的范围内。输注可开始于，例如重配后大约1-4小时内。优选地，输注溶液在约2小时的时间段内用输注装置给药，该输注装置带有一个内嵌的、无菌的、不热原的、蛋白结合作用低的过滤器(孔尺寸为1.2μm或更小)。在另一些实施方式中，il-1α自身抗体被配制成适合注射给药的药物组合物，例如可注射溶液。il-1α自身抗体可以是液体或冻干剂形式，例如在玻璃(flint)或琥珀色小瓶、安瓿、或预充盈的注射器中。合适的缓冲液包括l-组氨酸、琥珀酸钠、柠檬酸钠、磷酸钠、和磷酸钾。氯化钠在0-300mm浓度下(如，150mm用于液体剂型)可用于减轻溶液的毒性。冻干剂形式可包含防冻剂(结晶保护剂(cryoprotectants))(如，0-10％蔗糖、海藻糖或乳糖)。填充剂(bulkingagent)，如甘露醇，也可包含于冻干剂形式中。稳定剂，如l-蛋氨酸可用在液体或冻干剂形中。也可包括表面活性剂，如聚山梨醇酯20和brij表面活性剂。本发明的药物组合物可用于治疗动脉硬化相关疾病，包括缺血性心脏疾病、冠状动脉疾病、周围动脉疾病和脑血管疾病。优选地，用含有同物种抗体的药物制剂治疗该个体(即，用人il-1α自身抗体治疗人类)。根据本发明的治疗上有效剂量的药物组合物，可给予有一种或多种这类疾病之症状的个体；或者预防性地给予有发生一种或多种这类疾病之风险的个体。“治疗上的有效剂量(therapeuticallyeffectiveamount)”是指可降低个体血清中的游离il-1α的剂量或提高个体中il-1α自身抗体的滴定度至少两倍的剂量。优选地，个体的动脉硬化相关疾病症状有所减轻(例如，臀部、大腿或小腿处的痉挛；绞痛)。尽管对多种治疗应用来说，优选的给药途径/方式是皮下注射、静脉注射或输液，然而本发明的药物组合物可用多种本领域内已知方法给药。如熟练的技术人员所意识到的，给药的途径和/或方式依据希望的结果而不同。在一些实施方式中，il-1α自身抗体可与防止自身抗体快速释放的载体共同制备，如控释剂型，包括植入物(implant)、透皮贴剂(transdermalpatch)、和微胶囊输送系统。可使用可生物降解的、生物兼容的多聚体，如乙烯醋酸乙烯酯(ethylenevinylacetate)、聚酸酐(polyanhydride)、聚乙醇酸(polyglycolicacid)、胶原蛋白、聚正酯(polyorthoester)以及聚乳酸(polylacticacid)。制备这种制剂的多种方法已被专利保护或通常被本领域内技术人员所熟知。参见，如《持续且可控释放的药物输送系统》(sustainedandcontrolledreleasedrugdeliverysystems)，j.r.robinson编辑，纽约marceldekker公司1978年出版。本发明药物制剂的剂量与给药时间表，依照个体发生动脉硬化相关疾病的风险；个体疾病的症状与严重程度；和个体的物种而不同。il-1α自身抗体的典型剂量在0.001μg到400mg/kg(如，0.001μg，0.01μg，0.1μg，0.5μg，1.0μg，10μg，100μg，1mg，2mg，5mg，10mg，15mg，20mg，25mg，50mg，75mg，100mg，150mg，200mg，250mg，300mg，350mg或400mg)的范围内。该剂量可用如每天一次持续4天，每周一次，每月两次，每月一次，每12周一次，每24周一次，或每90天一次的形式给药。在本说明书中引用的所有专利，专利申请，以及参考文献，明确引入本文作为参考。以上说明书一般性地描述了本发明。通过参考以下特定实施例，可以获得更完整的理解；提供这些实施例仅仅是出于例证的目的，而不是意欲限制本发明的范围。实施例1缺血性心脏疾病与il-1α自身抗体滴定度的相关性检测参与哥本哈根男性研究(copenhagenmalestudy)中的男性血清样本(cms；gyntelbergdanmedbull1973；20:1-4)的il-1α自身抗体滴定度。这些男性的年龄在53岁到75岁之间(平均值＝63)。结果显示于表1表1如表1所示，在这些病人的10年跟踪调查中，那些有高il-1α自身抗体滴定度的个体的缺血性心脏疾病发生率有所降低。实施例2缺血性心脏疾病病人的il-1α自身抗体冠状动脉旁路手术3天内的20个病人的血清被研究，并与20个无缺血性心脏疾病征兆的年龄匹配的男性比较。结果显示于表2。表2p<0.0001(费舍尔精确检验(fisher’sexacttest)，双侧检验)实施例3单核细胞的分离与刺激本实施例描述了一种分离和刺激单核细胞的方法。用il-1α自身抗体阴性的捐献者，从健康的血液捐献者获得单核细胞(mononuclearcells(mnc))。在lymphopreptm(nycomed)上，通过离心，将mnc从血沉棕黄层(buffycoat)中纯化出来。用含有2mml-谷氨酸(sigma，圣路易斯，美国)，25μg/ml庆大霉素(gentamycin)(brl，lifetechnologies，paisley，苏格兰)和5％正常人ab血清的rpmi1640，清洗细胞。通过在37℃下，于5％co2加湿空气中，且有100μg/mle.colilps(difcolaboratories，底特律，美国)存在的条件下，刺激mnc以产生原初il-1α(nativeil-1α(nil-1α))。12小时后，收集上清液并储存在-20℃直到使用。g蛋白亲和色谱100μl血浆样本的亲和色谱，是在4℃下，用含有2000μlg蛋白琼脂糖4高速流动柱(proteingsepharose4fastflow(amershambiosciences))进行。用0.1％(v/v)tritonx-100和0.1％(w/v)凝胶(sigma)补充的磷酸盐缓冲液ph7.4(pbs)作为跑胶缓冲液。结合材料用0.1m甘氨酸/hcl，ph2.4洗脱。特异性分析抗体特异性分析，用天然和重组il-1α与放射性标记的il-1α的不同制剂进行。抗il-1α阳性的血浆样本被稀释以结合总量15ng/200μlil-1α的约60％，包括未标记的il-1α和示踪il-1α(15pg/200μl125i标记的il-1α)。血浆、示踪物和竞争物的混合物，在37℃下，预培养1小时；而后，在g蛋白上进行亲和色谱。对应于igg结合的与游离示踪物的部分，在伽马计数器(1470wizardtm伽马计数器，wallac，芬兰)中计数。此外，游离il-1α用elisa测定。用ria和elisa筛选血浆样本根据合适的程序及血液组分的质量控制，从血液捐献个体中收集血浆样本。样本最初被小量合并，筛选抗il-1α。90份血浆样本的小量合并物被调整为25％(v/v)，处于补充有0.1％(v/v)tritonx-100(sigma)，0.1％(w/v)明胶(sigma)与2mmedta(bie&berntsen，丹麦)的pbs中(pbs+)，并加入3,500cpm125i标记的il-1α；终体积为200μl。在4℃温育20小时，代表igg结合的示踪物与游离示踪物的部分用g蛋白分离并计数。此外，相对于天然il-1α，表示抗il-1α的结合活性。这可在il-1αelisa中，通过测定存在于25％血浆合并物中的1ng/ml天然il-1α的回收率而完成。il-1αelisa夹心(sandwich)elisa是基于特定的多克隆兔抗人il-1α抗体。通过天然人il-1α抗体的干扰，这已经被完全验证。参见hansen等，scand.j.immunol.1991.33:777-781；hansen等，cytokine1993.5:72-80。将平板(nunc，roskilde，丹麦)，用蛋白a亲和纯化兔抗人il-1αigg包被。非附着点用含有4％(w/v)脱脂奶粉，1％(v/v)人血清白蛋白(hsa)(ssi，哥本哈根，丹麦)和0.005％(v/v)20(merck)的pbs封闭。在以下每一步以后，用pbs/0.005％(v/v)20清洗每个孔：1)100μl分析物在4℃温育18小时；2)在pbs/0.005％(v/v)20/0.5％(w/v)has中的100μl生物素化的兔抗人il-1αigg(2μg/ml)，在20℃温育2小时；3)在pbs/0.005％(v/v)20/0.5％(w/v)has中的100μl链霉抗生素蛋白-过氧化物酶(streptavidin-peroxidase)(0.1μg/ml；kirkegaard&perrylaboratories，gaithersburg，美国)，在20℃温育45分钟。用1,2-苯二胺二氢氯化物(1,2-phenylenediaminedihydrocloride)(dakocytomation)对酶活性进行定量。elisa的工作范围是150pg/ml到5,000pg/ml。变差的检测间与检测内(interandintra-assay)系数被保持在15％以下。hsil-1αelisa用il-1αquantikine高敏感性elisa(r&dsystems，minneapolis，mn)，量化血浆中il-1α水平。根据制造商的确认及说明书，该elisa可检测到结合于sil-1αr和il-1α自身抗体上的il-1α。二抗沉淀和scatchard图il-1α自身抗体在所选定的抗体阳性血浆样本中的结合特性，被如上文所述(hansen等，eur.j.immunol.1995.25:348-354)进行测定。将适当稀释的血浆样本，与50,000cpm到700cpm的范围内的125i标记的il-1α，在pbs+中混合，终体积为100μl。在4℃下温育20小时后，200μl兔抗人igg(a424；dakocytomation)被加入，以沉淀95％以上的igg。在4℃下温育1小时后，加入3倍体积的pbs。该样品立即被离心20分钟(3000xg，4℃)；离心后，沉积物(igg结合)与上清中(游离)的il-1α量被计数。il-1α自身抗体与il-1α结合的亲和度，用scatchard图计算。当前第1页12当前第1页12