一种甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒及其使用方法与流程

本发明涉及医疗器械生物类免疫体外诊断相关
技术领域：
，特别涉及一种甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒及其使用方法。
背景技术：
：甲状腺球蛋白(thyroglobulin，tg)是甲状腺滤泡柱状细胞内的一种糖蛋白，分子量为660kd，在甲状腺激素的合成、储存中有重要作用。在体内，甲状腺球蛋白以胶质形式包含着t3和t4，储存在滤泡腔内，在酶的作用下，t3和t4游离到细胞浆内进入血液循环。同时少量的tg也释放入血，正常人也能检测到tg，浓度为3～40ug/l。但当甲状腺因病理原因受损，大量的tg释放进入血液中，tg作为自身抗原，诱发产生抗tg抗体。tgab作为甲状腺球蛋白的自身抗体，在自身免疫性甲状腺疾病(如有桥本甲状腺炎、graves病)中有较高阳性率在甲状腺炎出现频率约80％，graves病tg抗体的阳性率约为60％，在其他甲状腺疾病及健康人群血清中亦可检出，但滴度较低。所以临床上，甲状腺球蛋白抗体的定量检测对甲状腺疾病的诊断治疗有重要意义。另外，甲状腺癌与tgab呈一定的相关性，tgab值得升高是肿瘤恶化的一种标志。甲状腺过氧化物酶抗体同样作为自身免疫抗体，是诊断自身免疫性甲状腺疾病的一项重要的指标，因此联合检测tgab、tpoab抗体有利于对早期甲状腺自身免疫疾病的确诊和治疗。目前已知的甲状腺球蛋白抗体测定方法有放射免疫法(ria)、酶联免疫吸附法(elisa)、胶乳增强比浊法等。放射免疫法步骤繁琐，试剂价格昂贵，需使用配套的仪器且存在放射性污染。酶联免疫吸附法存在检测时间长、操作复杂、重复性差、不适于急诊和临床病人及时诊断的需要。胶乳增强免疫比浊法操作简单、快速，但是灵敏度低、低值重复性差。因此，有待开发对甲状腺球蛋白抗体(tgab)检测灵敏度高、可靠性、能降低检测成本的检测技术。技术实现要素：针对现有技术存在的需要一种对甲状腺球蛋白抗体(tgab)检测灵敏度高、可靠性、能降低检测成本的技术问题，本发明提供一种甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒及其使用方法。为实现上述目的，本发明的技术方案为：一种甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒，包括相互独立包装的校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物和清洗液；所述校准品和所述质控品的组分相同，并均通过包括用含蛋白的缓冲液溶解甲状腺球蛋白抗体，并稀释至含新生牛血清的缓冲液中的操作制备而成：所述抗试剂通过包括以下步骤的操作制备而成：sa：异硫氰酸荧光素标记的甲状腺球蛋白包被抗原的制备：sa1：用抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制成浓度为1.0～5.0mg/ml的异硫氰酸荧光素溶液；sa2：按照甲状腺球蛋白抗原与所述异硫氰酸荧光素溶液的质量比为1:1.1～1:1.5的比例在遮光条件下混合；sa3：用ph为8～9的碳酸盐缓冲液平衡sa2制得的溶液，然后用凝胶层析分离纯化得到异硫氰酸荧光素标记的甲状腺球蛋白包被抗原；sb：碱性磷酸酶标记的甲状腺球蛋白标记抗体的制备：sb1：用所述抗试剂缓冲液将碱性磷酸酶配制成浓度为1.0～5.0mg/ml的碱性磷酸酶溶液；sb2：将碱性磷酸酶和甲状腺球蛋白抗体的反应基团分别活化后按照所述碱性磷酸酶与所述甲状腺球蛋白抗体的摩尔比为1:1～1:3的比例在催化剂的催化下充分混匀进行偶联反应；sb3：使用ph为8～9的碳酸盐缓冲液平衡sb2制得的溶液，然后用凝胶柱进行不同分子大小片度的分离纯化，得到碱性磷酸酶标记的甲状腺球蛋白标记抗体；sc：将所述异硫氰酸荧光素标记的甲状腺球蛋白包被抗原与所述碱性磷酸酶标记的甲状腺球蛋白标记抗体加入含有表面活性剂的所述抗试剂缓冲液中，即得；所述磁微粒试剂通过包括以下步骤的操作制备而成：sd1：将羧基磁珠浓缩液充分混匀后置于磁场中15～20min，待羧基磁珠全部沉降后去除上清；sd2：向所述羧基磁珠中加入所述羧基磁珠体积2～5倍的磁微粒缓冲液，震荡清洗20～30min；再置于磁场中15～20min后吸去上清；sd3：将sd2的操作重复0～3遍；sd4：用所述磁微粒缓冲液将羧基磁珠定容到10～50mg/ml，混匀制得羧基磁珠缓冲液；sd5：按照所述羧基磁珠与抗异硫氰酸荧光素抗体的质量比为(90～110)：1的比例，向所述羧基磁珠缓冲液中加入所述抗异硫氰酸荧光素抗体，在混匀状态下2～8℃反应16～20h；sd6：用磷酸缓冲液将sd5制得的产物清洗0～3遍后定容至9～11mg/ml即得；所述发光底物通过将试剂alps加入所述试剂alps体积4～10倍的发光底缓冲液中制备而成。进一步的，所述含新生牛血清的缓冲液中包括防腐剂四环素0.01～0.05％和硫酸新霉素0.1～0.5％，所述含新生牛血清的缓冲液经过0.22μm滤膜过滤处理。进一步的，所述抗试剂缓冲液在纯化水中包括0.1～0.4mm的tris盐，还包括按体积百分比计的以下组分：四环素0.01～0.05％、绵羊血清1～5％、新生牛血清3～10％和马血清1～5％；所述抗试剂缓冲液的ph为7～8。进一步的，所述表面活性剂为tween20、tritonx-100、bronidox中的一种或多种，所述表面活性剂在所述抗试剂缓冲液中的体积百分比为0.01～0.5％。进一步的，所述发光底缓冲液中包括tris0.1～1m，还包括按以下浓度的组分：亚硫酸钠0.1％、sds1％、光泽精0.3％、牛血清白蛋白0.15％；所述发光底缓冲液的ph为9.5。进一步的，所述磁微粒缓冲液为每升纯化水中溶解有12.12～15.26mg的tris、5.82～8.58mg的氯化钠，50～60g的甲基纤维醚的溶液。进一步的，所述清洗液为每升双蒸水中溶解有160gnacl、4gkcl、24.2g三羟甲基氨基甲烷和1ml吐温20；所述清洗液的ph为7.4。一种上述任一项所述的甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒的使用方法，包括以下步骤：se1：取三支试管分别加30μl所述校准品、30μl所述质控品、30μl待测样本；se2：向每支试管中加入60μl抗试剂，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，置于37℃下水浴5min；se3：再向每支试管中加入30μl所述磁微粒试剂，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，置37℃下水浴5min；se4：将所有试管在磁分离器上沉淀2min，缓慢地倒转所述试管和所述磁分离器，倒出上清液；把倒转的所述试管连同所述磁分离器一起，放在滤纸上，拍击所述磁分离器底部除去粘在管壁上的所有液滴；se5：向每支试管中加入300μl所述清洗液，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，混匀后缓慢的倒转试管和磁分离器，倒出上清液，把倒转的所述试管连同所述磁分离器一起，放在滤纸上，用力拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴；se6：重复se5的操作0～3次；se7：向每支试管中加入200μl所述发光底物，振荡混匀3s，用化学发光仪检测发光强度。本发明的关键包括：首先，以碱性磷酸酶(ap)为标记酶，通过化学反应标记抗体，并使用凝胶层析分离未反应的酶、抗体或抗原，提高反应的灵敏度；其次，以免疫磁微粒为固相，以羊抗异硫氰酸荧光素抗体偶联磁性微球，作为通用的分离试剂，不仅使免疫反应更容易混匀和分离，而且大大提高了反应速度；再有，以新型化学发光底物alps为底物，该底物是辉光性底物，而且快速达到平台期，有利于信号的检测，提高了最终试剂盒的灵敏度和特异性性能；并进一步优化了化学发光增强体系，保证了终产品的信号灵敏度高和稳定性好、变异小；此外，alps底物的优点在于灵敏度高和平台稳定期长；反应的技术原理为：待测样本、校准品或质控品中的tgab与碱性磷酸酶(ap)标记的tg抗体竞争结合异硫氰酸荧光素(fitc)包被的tgab抗原，随后加入连有抗荧光素抗体的磁微粒，通过抗荧光素抗体与荧光素的特异性结合使抗原抗体复合物连接在磁微粒上，在外加磁场中直接沉淀，将免疫反应形成的复合物与未结合的其他物质分离。清洗沉淀的复合物，加入酶促化学发光底物，底物在酶作用下被催化裂解，形成不稳定的激发态中间体，当激发态中间体回到基态时便发出光子，形成发光反应，利用化学发光测定仪测定反应的发光强度。在测定范围内，发光强度与样本中的tgab浓度成反比，使用改良的四参数logistic方程拟合可定量测算出待测样本中tgab浓度。本发明具有如下优点：1.本发明的竞争法-甲状腺球蛋白抗体(tgab)检测试剂盒(磁微粒分离化学发光法)各试剂组分包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物等稳定性良好，效期可至一年以上，优效降低成本；2.检测灵敏度高，特异性能好、变异小；3.在本发明中，经过大量实验的工艺优化，得到完善统一工艺，并严格按照标准生产操作规程和质量控制规程进行生产；4.用户仅需按照操作说明进行规范操作，就可得到可靠的结果，操作简便。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为竞争法-甲状腺球蛋白抗体(tgab)检测试剂盒(磁微粒分离化学发光法)标准曲线图；图2为竞争法-甲状腺球蛋白抗体(tgab)检测试剂盒(磁微粒分离化学发光法)与进口试剂的性能对比。具体实施方式下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，在以下说明中，省略了对公知结构、技术及操作的描述，以避免不必要地混淆本发明的概念。另外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。本发明的试剂盒中未详细提及的试剂组分(例如清洗液、一些必要的缓冲液等)、试剂盒的外包装以及各试剂组分的独立包装容器等均可以按照所属领域的常规操作进行，符合相关行业规定即可。本发明的方法中未详细提及的操作步骤也可参照所属领域的常规操作进行，例如，在检测前，可将各试剂放至室温(18～25℃)，加样前充分混匀；所用检测仪器设备例如化学发光类测定仪的使用按照说明书操作进行；本发明中，未特别注明单位的比例与含量，固体组分为质量比例与含量，液体组分为体积比例与含量。实施例1一种甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒，包括相互独立包装的校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物和清洗液；校准品和质控品的组分相同，并均通过包括用含蛋白的缓冲液溶解甲状腺球蛋白抗体，并稀释至含新生牛血清的缓冲液中的操作制备而成：其中，含蛋白的缓冲液溶可用含新生牛血清的缓冲液代替，后者中包括防腐剂四环素0.01％和硫酸新霉素0.1％，含新生牛血清的缓冲液经过0.22μm滤膜过滤处理；抗试剂通过包括以下步骤的操作制备而成：sa：异硫氰酸荧光素标记的甲状腺球蛋白包被抗原的制备：sa1：用抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制成浓度为1.0mg/ml的异硫氰酸荧光素溶液；其中，抗试剂缓冲液在纯化水中包括0.1mm的tris盐，还包括按体积百分比计的以下组分：四环素0.01％、绵羊血清1％、新生牛血清3％和马血清1％；抗试剂缓冲液的ph为7；sa2：按照甲状腺球蛋白抗原与异硫氰酸荧光素溶液的质量比为1:1.1的比例在遮光条件下混合；sa3：用ph为8的碳酸盐缓冲液平衡sa2制得的溶液，然后用凝胶层析分离纯化得到异硫氰酸荧光素标记的甲状腺球蛋白包被抗原；sb：碱性磷酸酶标记的甲状腺球蛋白标记抗体的制备：sb1：用抗试剂缓冲液将碱性磷酸酶配制成浓度为1.0mg/ml的碱性磷酸酶溶液；sb2：将碱性磷酸酶和甲状腺球蛋白抗体的反应基团分别活化后按照碱性磷酸酶与甲状腺球蛋白抗体的摩尔比为1:1的比例在催化剂的催化下充分混匀进行偶联反应；sb3：使用ph为8的碳酸盐缓冲液平衡sb2制得的溶液，然后用凝胶柱进行不同分子大小片度的分离纯化，得到碱性磷酸酶标记的甲状腺球蛋白标记抗体；sc：将异硫氰酸荧光素标记的甲状腺球蛋白包被抗原与碱性磷酸酶标记的甲状腺球蛋白标记抗体加入含有表面活性剂的抗试剂缓冲液中，即得；其中，表面活性剂为tween20，表面活性剂在抗试剂缓冲液中的体积百分比为0.01％；磁微粒试剂通过包括以下步骤的操作制备而成：sd1：将羧基磁珠浓缩液充分混匀置于磁场中15min，待羧基磁珠全部沉降后去除上清；sd2：向羧基磁珠中加入羧基磁珠体积2倍的磁微粒缓冲液，震荡清洗20min；再置于磁场中15min后吸去上清；sd4：用磁微粒缓冲液将羧基磁珠定容到10mg/ml，混匀制得羧基磁珠缓冲液；其中，磁微粒缓冲液为每升纯化水中溶解有12.12mg的tris、5.82mg的氯化钠，50g的甲基纤维醚的溶液；sd5：按照羧基磁珠与抗异硫氰酸荧光素抗体的质量比为90：1的比例，向羧基磁珠缓冲液中加入抗异硫氰酸荧光素抗体，在混匀状态下2℃反应16h；sd6：用磷酸缓冲液将sd5制得的产物定容至9mg/ml即得；发光底物通过将试剂alps加入试剂alps体积4倍的发光底缓冲液中制备而成；其中，发光底缓冲液中包括tris0.1m，还包括按以下浓度的组分：亚硫酸钠0.1％、sds1％、光泽精0.3％、牛血清白蛋白0.15％；发光底缓冲液的ph为9.5；清洗液为每升双蒸水中溶解有160gnacl、4gkcl、24.2g三羟甲基氨基甲烷和1ml吐温20；清洗液的ph为7.4。实施例2一种甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒，包括相互独立包装的校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物和清洗液；校准品和质控品的组分相同，并均通过包括用含蛋白的缓冲液溶解甲状腺球蛋白抗体，并稀释至含新生牛血清的缓冲液中的操作制备而成：其中，含蛋白的缓冲液溶可用含新生牛血清的缓冲液代替，后者中包括防腐剂四环素0.03％和硫酸新霉素0.3％，含新生牛血清的缓冲液经过0.22μm滤膜过滤处理；抗试剂通过包括以下步骤的操作制备而成：sa：异硫氰酸荧光素标记的甲状腺球蛋白包被抗原的制备：sa1：用抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制成浓度为3.0mg/ml的异硫氰酸荧光素溶液；其中，抗试剂缓冲液在纯化水中包括0.3mm的tris盐，还包括按体积百分比计的以下组分：四环素0.03％、绵羊血清3％、新生牛血清6％和马血清3％；抗试剂缓冲液的ph为7.5；sa2：按照甲状腺球蛋白抗原与异硫氰酸荧光素溶液的质量比为1:1.3的比例在遮光条件下混合；sa3：用ph为8.5的碳酸盐缓冲液平衡sa2制得的溶液，然后用凝胶层析分离纯化得到异硫氰酸荧光素标记的甲状腺球蛋白包被抗原；sb：碱性磷酸酶标记的甲状腺球蛋白标记抗体的制备：sb1：用抗试剂缓冲液将碱性磷酸酶配制成浓度为3.0mg/ml的碱性磷酸酶溶液；sb2：将碱性磷酸酶和甲状腺球蛋白抗体的反应基团分别活化后按照碱性磷酸酶与甲状腺球蛋白抗体的摩尔比为1:2的比例在催化剂的催化下充分混匀进行偶联反应；sb3：使用ph为8.5的碳酸盐缓冲液平衡sb2制得的溶液，然后用凝胶柱进行不同分子大小片度的分离纯化，得到碱性磷酸酶标记的甲状腺球蛋白标记抗体；sc：将异硫氰酸荧光素标记的甲状腺球蛋白包被抗原与碱性磷酸酶标记的甲状腺球蛋白标记抗体加入含有表面活性剂的抗试剂缓冲液中，即得；其中，表面活性剂为tritonx-100，表面活性剂在抗试剂缓冲液中的体积百分比为0.25％；磁微粒试剂通过包括以下步骤的操作制备而成：sd1：将羧基磁珠浓缩液充分混置于磁场中18min，待羧基磁珠全部沉降后去除上清；sd2：向羧基磁珠中加入羧基磁珠体积4倍的磁微粒缓冲液，震荡清洗25min；再置于磁场中18min后吸去上清；sd3：将sd2的操作重复2遍；sd4：用磁微粒缓冲液将羧基磁珠定容到30mg/ml，混匀制得羧基磁珠缓冲液；其中，磁微粒缓冲液为每升纯化水中溶解有14.26mg的tris、6.58mg的氯化钠，55g的甲基纤维醚的溶液；sd5：按照羧基磁珠与抗异硫氰酸荧光素抗体的质量比为100：1的比例，向羧基磁珠缓冲液中加入抗异硫氰酸荧光素抗体，在混匀状态下4℃反应18h；sd6：用磷酸缓冲液将sd5制得的产物清洗2遍后定容至10mg/ml即得；发光底物通过将试剂alps加入试剂alps体积7倍的发光底缓冲液中制备而成；其中，发光底缓冲液中包括tris0.5m，还包括按以下浓度的组分：亚硫酸钠0.1％、sds1％、光泽精0.3％、牛血清白蛋白0.15％；发光底缓冲液的ph为9.5；清洗液为每升双蒸水中溶解有160gnacl、4gkcl、24.2g三羟甲基氨基甲烷和1ml吐温20；清洗液的ph为7.4。实施例3一种甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒，包括相互独立包装的校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物和清洗液；校准品和质控品的组分相同，并均通过包括用含蛋白的缓冲液溶解甲状腺球蛋白抗体，并稀释至含新生牛血清的缓冲液中的操作制备而成：其中，含蛋白的缓冲液溶可用含新生牛血清的缓冲液代替，后者中包括防腐剂四环素0.05％和硫酸新霉素0.5％，含新生牛血清的缓冲液经过0.22μm滤膜过滤处理；抗试剂通过包括以下步骤的操作制备而成：sa：异硫氰酸荧光素标记的甲状腺球蛋白包被抗原的制备：sa1：用抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制成浓度为5.0mg/ml的异硫氰酸荧光素溶液；其中，抗试剂缓冲液在纯化水中包括0.4mm的tris盐，还包括按体积百分比计的以下组分：四环素0.05％、绵羊血清5％、新生牛血清10％和马血清5％；抗试剂缓冲液的ph为8；sa2：按照甲状腺球蛋白抗原与异硫氰酸荧光素溶液的质量比为1:1.5的比例在遮光条件下混合；sa3：用ph为9的碳酸盐缓冲液平衡sa2制得的溶液，然后用凝胶层析分离纯化得到异硫氰酸荧光素标记的甲状腺球蛋白包被抗原；sb：碱性磷酸酶标记的甲状腺球蛋白标记抗体的制备：sb1：用抗试剂缓冲液将碱性磷酸酶配制成浓度为5.0mg/ml的碱性磷酸酶溶液；sb2：将碱性磷酸酶和甲状腺球蛋白抗体的反应基团分别活化后按照碱性磷酸酶与甲状腺球蛋白抗体的摩尔比为1:3的比例在催化剂的催化下充分混匀进行偶联反应；sb3：使用ph为9的碳酸盐缓冲液平衡sb2制得的溶液，然后用凝胶柱进行不同分子大小片度的分离纯化，得到碱性磷酸酶标记的甲状腺球蛋白标记抗体；sc：将异硫氰酸荧光素标记的甲状腺球蛋白包被抗原与碱性磷酸酶标记的甲状腺球蛋白标记抗体加入含有表面活性剂的抗试剂缓冲液中，即得；其中，表面活性剂为bronidox，表面活性剂在抗试剂缓冲液中的体积百分比为0.5％；磁微粒试剂通过包括以下步骤的操作制备而成：sd1：将羧基磁珠浓缩液充分混匀后置于磁场中20min，待羧基磁珠全部沉降后去除上清；sd2：向羧基磁珠中加入羧基磁珠体积5倍的磁微粒缓冲液，震荡清洗30min；再置于磁场中20min后吸去上清；sd3：将sd2的操作重复3遍；sd4：用磁微粒缓冲液将羧基磁珠定容到50mg/ml，混匀制得羧基磁珠缓冲液；其中，磁微粒缓冲液为每升纯化水中溶解有15.26mg的tris、8.58mg的氯化钠，60g的甲基纤维醚的溶液；sd5：按照羧基磁珠与抗异硫氰酸荧光素抗体的质量比为110：1的比例，向羧基磁珠缓冲液中加入抗异硫氰酸荧光素抗体，在混匀状态下8℃反应20h；sd6：用磷酸缓冲液将sd5制得的产物清洗3遍后定容至11mg/ml即得；发光底物通过将试剂alps加入试剂alps体积10倍的发光底缓冲液中制备而成；其中，发光底缓冲液中包括tris1m，还包括按以下浓度的组分：亚硫酸钠0.1％、sds1％、光泽精0.3％、牛血清白蛋白0.15％；发光底缓冲液的ph为9.5；清洗液为每升双蒸水中溶解有160gnacl、4gkcl、24.2g三羟甲基氨基甲烷和1ml吐温20；清洗液的ph为7.4。本发明中，包被抗原为能与人体内甲状腺球蛋白抗体(tgab)特异结合的抗原，标记抗体为能与甲状腺球蛋白抗体(tgab)抗原特异结合的单克隆抗体。标记抗体能与甲状腺球蛋白抗体(tgab)竞争特异性结合包被抗原。实施例4为进一步说明实施例1～3制备的试剂盒的使用，进一步细化相关内容如下：1、实施例所用的甲状腺球蛋白抗体(tgab)抗原采购自国内外知名厂家fitzgerald公司，本实施例所用的甲状腺球蛋白抗体(tgab)包被抗原和标记抗体采购自国内外知名厂家fitzgerald公司。本实施例中各种缓冲液的配方如下：【抗试剂缓冲液(tris盐ph7.5缓冲液)】试剂名称生产商浓度1l缓冲液用量trissigma0.1m12.12氯化钠sigma0.9％5.82绵羊血清广州蕊特5％50ml新生牛血清广州蕊特10％100ml马血清广州蕊特5％50ml4m盐酸sigmaph7.5约20ml【校准品缓冲液】试剂名称生产商浓度1l缓冲液用量新生牛血清sigma100％1000ml四环素sigma0.01％10mg硫酸新霉素sigma0.1％100mg【磁微粒缓冲液】试剂名称生产商浓度1l缓冲液用量trissigma0.1m12.12氯化钠sigma0.9％5.82甲基纤维醚sigma5％50g【发光底物缓冲液】试剂名称生产商浓度1l缓冲液用量trissigma0.1m12.12氯化钠sigma0.9％5.82光泽精sigma0.3％30mg实施例的竞争法-甲状腺球蛋白抗体(tgab)检测试剂盒(磁微粒分离化学发光法)的主要试剂组分包括：1)用校准品缓冲液稀释甲状腺球蛋白抗体(tgab)抗原的校准品(a，b，...，f)。2)用校准品缓冲液稀释甲状腺球蛋白抗体(tgab)抗原的质控品(q1，q2)。质控品浓度范围每批标定。3)用抗试剂缓冲液稀释异硫氰酸荧光素(fitc)标记的甲状腺球蛋白包被抗原与碱性磷酸酶(ap)标记的甲状腺球蛋白标记抗体。4)用磁微粒缓冲液稀释抗异硫氰酸荧光素抗体磁微粒。5)浓缩洗液，适当稀释后使用。6)用发光缓冲液稀释的alps发光底物。3、本实施例的竞争法-甲状腺球蛋白抗体(tgab)检测试剂盒(磁微粒分离化学发光法)的各试剂组分的制备过程为：校准品和质控品的制备：将甲状腺球蛋白抗体(tgab)抗原溶解于含蛋白的缓冲液中至0.5mg/ml溶液处理30min。将上述反应物，按不同浓度用【校准品缓冲液】稀释成不同浓度点，并定标。校准品和质控品的目标浓度为：试剂名称目标浓度(iu/ml)校准品a0校准品b7校准品c25校准品d100校准品e500校准品f1500质控品q125质控品q2500清洗浓缩液的配制，按以下配方配制：试剂名称生产商规格1l缓冲液用量trissigma0.1m12.12氯化钠sigma0.9％5.82tween-20sigma5％50ml曲拉通-100sigma5％50ml上述校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物、浓缩清洗液各试剂组分配制好后，独立地置于一个包装容器内，以组成本实施例的竞争法-甲状腺球蛋白抗体(tgab)检测试剂盒(磁微粒分离化学发光法)套组。利用本实施例的磁微粒化学发光检测试剂盒检测甲状腺球蛋白抗体(tgab)时的具体操作方法见试剂盒说明书用甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒进行甲状腺球蛋白抗体检测试的操作，包括以下步骤：设定好37℃水浴锅；准备好化学发光类测定仪；se1：每组浓度的校准品和质控品，取三支试管分别加30μl校准品、30μl质控品、30μl待测样本；se2：向每支试管中加入60μl抗试剂，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，置于37℃下水浴5min；se3：再向每支试管中加入30μl磁微粒试剂，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，置37℃下水浴5min；se4：将所有试管在磁分离器上沉淀2min，缓慢地倒转试管和磁分离器，倒出上清液；把倒转的试管连同磁分离器一起，放在滤纸上，拍击磁分离器底部除去粘在管壁上的所有液滴；se5：向每支试管中加入300μl清洗液，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，混匀后缓慢的倒转试管和磁分离器，倒出上清液，把倒转的试管连同磁分离器一起，放在滤纸上，用力拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴；se6：重复se5的操作0～3次；se7：向每支试管中加入200μl发光底物，振荡混匀3s，用化学发光仪检测发光强度。结果计算参阅仪器的相关说明；如使用全自动检测仪器，则上述手动操作步骤将由仪器自动操作所代替，请严格按照仪器使用说明书进行检测。数据的处理：通过校准品的浓度值和检测到的发光值，通过四参数非线性拟合获得标准曲线，将样本的发光值代入上述标准曲线获得相应的浓度值。图1显示了按照本实施例的方法所制作的竞争法-甲状腺球蛋白抗体(tgab)检测试剂盒(磁微粒分离化学发光法)标准曲线。表1是本实施例的竞争法-甲状腺球蛋白抗体(tgab)检测试剂盒(磁微粒分离化学发光法)分析性能和稳定性表。图2显示了利用本实施例的竞争法-甲状腺球蛋白抗体(tgab)检测试剂盒(磁微粒分离化学发光法)与利用进口检测试剂的检测性能对比。100份标本，将低中高值样本分离后，对低中高值样本进行单独的线性回归分析，将结果进行分析，线性回归方程y＝0.8299x+2.2591，r2＝0.9879。可以看出，本发明的试剂盒性能可靠，灵敏度高，线性范围宽，可配合全自动仪器使用。表1：竞争法-甲状腺球蛋白抗体(tgab)检测试剂盒(磁微粒分离化学发光法)分析性能和稳定性表。表2竞争法-甲状腺球蛋白抗体(tgab)检测试剂盒(磁微粒分离化学发光法)与进口tgab检测试剂盒(磁微粒分离化学发光法)检测试剂的检测性能对比。以上结合附图对本发明的实施方式作了详细说明，但本发明不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言，在不脱离本发明原理和精神的情况下，在没有做出创造性劳动前提下，对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型，仍落入本发明的保护范围内。当前第1页12