1.一种基于aupb@aunps荧光检测酪氨酸酶的方法,其特征在于,包括以下步骤:
s1、制备aupb@aunps基底;
s2、制备不同浓度的酪氨酸酶标准溶液,加入多巴胺进行共培养,接着加入aupb@aunps基底混匀后,得aupb@aunps荧光检测基底;
s3、将步骤s2制备的aupb@aunps荧光检测基底进行荧光光谱检测;记录在318nm处的荧光强度,酪氨酸酶活性为横坐标作出相对应的荧光工作曲线;
s4、将待测物质进行荧光光谱检测后,并通过荧光工作曲线计算出待测物质中酪氨酸酶的浓度。
2.根据权利要求1所述一种检测酪氨酸酶的方法,其特征在于:所述工作曲线为y=−10.93x+5183,其中y为318nm处的荧光强度;x为酪氨酸酶的浓度,r2=0.981。
3.根据权利要求2所述一种检测酪氨酸酶的方法,其特征在于,步骤s2的具体步骤为:将多巴胺溶液与等体积的酪氨酸酶标准溶液混合的标准混合溶液,接着将aupb@au-fe(nta)溶液和等体积的标准混合溶液混合,在室温下,轻微振荡3-15min,使溶液分散均匀,得aupb@aunps荧光检测基底。
4.根据权利要求3所述一种检测酪氨酸酶的方法,其特征在于,所述aupb@aunps基底的制备方法如下:
aupb@aunps的合成
取10ml纳米金胶溶液,加入10-20μl浓度为0.1mol/l的普鲁士蓝溶液作为拉曼信号分子,搅拌混合均匀后离心,重新悬浮于10ml超纯水中,得au@pb胶体;往10ml的制备好的au@pb胶体中加入250μl浓度为6*10-2mol/l的柠檬酸钠溶液,磁力搅拌加热至沸腾后,加入2.5ml浓度为1mmol/l氯金酸溶液后停止加热,继续磁力搅拌1h后,将胶体离心洗涤2次,重新分散于5ml超纯水中,得到aupb@au胶体;
(2)fe(nta)溶液的合成
首先取浓度为10−3m的九水硝酸铁溶液和浓度为10−3m的氨三乙酸三钠溶液按体积1:1混合后,往溶液中添加ph调节剂调节fe(nta)溶液的ph为7.0,混合液静置,得fe(nta)溶液;
(3)aupb@aunps荧光检测基底的制备
将步骤(1)制备好的aupb@au胶体与步骤(2)制备的fe(nta)溶液按体积1:1混合后,搅拌混合后,离心洗涤除去未反应的fe(nta),去除上清液,剩下aupb@au-fe(nta)胶体备用。
5.根据权利要求4所述一种检测酪氨酸酶的方法,其特征在于,所述纳米金胶溶液的制备方法如下:取100ml质量分数为0.01%的氯金酸溶液在磁力搅拌下加热至沸腾;然后取1-1.5ml质量分数为1%柠檬酸钠溶液,加入到沸腾的上述氯金酸溶液中,待沸腾15min后,反应结束,冷却至室温,制成纳米金溶胶。
6.根据权利要求5所述一种检测酪氨酸酶的方法,其特征在于:所述步骤(2)的ph调节剂为浓度为0.1mol/l的氢氧化钠溶液。
7.根据权利要求6所述一种检测酪氨酸酶的方法,其特征在于:步骤(3)的搅拌时间为至少30min。
8.根据权利要求7所述一种检测酪氨酸酶的方法,其特征在于:步骤s2中所述多巴胺溶液和酪氨酸酶标准溶液使用体积均为500μl。
9.根据权利要求8所述一种检测酪氨酸酶的方法,其特征在于:所述多巴胺溶液的浓度为10-3m。