专利名称:用指纹图谱技术检测中国劲酒质量的方法
技术领域：
:本发明涉及一种中药保健酒质量检测的方法，具体涉及用高效液相-气相色谱指纹图谱技术检测由多种中药原料制备的中国劲酒质量的方法。
(二)现有技术中国劲酒是湖北劲牌公司生产的具有补气、补肾、滋阴作用的保健酒，主要由黄芪、肉苁蓉、仙茅、淫羊藿、枸杞、山药、当归、丁香、肉桂等几种中药材制备而成。在产品质量控制方面，2000年以前，主要控制指标是颜色、固形物、酒精度、口感，2000年以后，在原有基础上增加了淫羊藿苷、总黄酮、总皂甙、生物碱等定性或定量指标。但作为一个中药复方保健酒，其保健功能作用机理及功能因子非常复杂，不可能通过控制几个指标来完全控制产品质量，而必须对它的物质群整体予以控制。所以除了微观分析外，还需要用某种宏观分析方法，从整体上有效的来表征产品的内在质量。中药指纹图谱系指某种或某产地的中药材或中成药经适当处理后，采用一定的分析手段得到的能够标示该中药材或中成药特征的色谱、光谱等图谱。作为中药质量控制方法，国内外对指纹图谱的研究方兴未艾。在国际上，图谱作为中成药、草药提取物等含有混合物质群的质量控制方法，已经成为医药界共识。美国FDA(美国食品药物管理局)对植物药的质量检测要求必须制订指纹图谱的检测标准，所以在申报IND(Investigational New Drug)的CMC(Chemistry，Manufacture and Control)资料时，植物物质(Botanical DrugSubstance)和植物药产品(Botanical Drug product)的质量控制要采用指纹图谱。欧共体对草药的质量控制也采用了指纹图谱技术。日本把地道药材饮片配方煎煮得到的煎汁作为标准提取物，标准提取物的指纹图谱即为标准指纹图谱，以此对生产的原料、配方和工艺作严格控制，使成品指纹图谱与标准指纹图谱一致。此外，法国、德国、英国、印度以及WHO等都采用指纹图谱技术进行植物药(草药)的质量评价。国家药监局于2000年下发《中药注射剂的指纹图谱研究的技术要求》，要求对中药注射剂推行指纹图谱质控办法。而其他中成药制剂采用中药指纹图谱质控技术作为质量检测标准也是中药发展的必然趋势。因此，采用指纹图谱质控技术，在中药及相关产品的真伪鉴别、质量控制、产品创优以及生产过程控制等方面将发挥重要作用。
(三)技术内容本发明的目的就是利用中药指纹图谱的整体性、特征性和可量化性，提出一种能从宏观上、整体上检测中国劲酒质量的方法。同时，也为我国保健酒产业产品质量控制提供示范。
本发明包括下述步骤第一步，建立中国劲酒对照指纹图谱1.中国劲酒的制备取下述重量份的中药原料黄芪10-15、肉苁蓉10-15、仙茅10-15、淫羊藿10-15、枸杞10-15、山药10-15、当归10-15、丁香3-5、肉桂3-5以总药材量50倍的30-50°小曲白酒渗漉12-15天得渗漉液，取渗漉液70-75份，分别加入40％糖浆20份、纯净水5-10份、焦糖色适量，调配，过滤，置常温下陈酿3-6个月，过滤除杂，滤膜精滤，灌装，即得；2.中国劲酒液相部分对照品溶液的制备a.乙醚部位取中国劲酒100ml，以大孔吸附色谱柱去糖，用水饱和乙醚萃取3次，每次20ml，合并萃取液，蒸干，用四氢呋喃定容至2ml，滤膜过滤，即得；b.5％异戊醇的乙酸乙酯部位将乙醚部位供试品溶液用水饱和的5％异戊醇的乙酸乙酯萃取3次，每次20ml，合并萃取液，蒸干，用四氢呋喃定容至2ml，滤膜过滤，即得；3.中国劲酒气相部分对照品溶液的制备直接取中国劲酒5ml于10ml顶空进样瓶中，加盖密封，即得；4.标准品溶液的制备a.液相部分取阿魏酸标准品适量，用50％甲醇制成1mg/ml的溶液；取淫羊藿苷标准品适量，用50％甲醇制成1mg/ml的溶液；b.气相部分用玻璃毛细管蘸取乙酸龙脑酯、丁香酚标准品适量于顶空进样瓶中，密封，即得；5.色谱条件a.液相部分色谱柱乙醚部位Hypersil C18柱，5％异戊醇的乙酸乙酯部位Aichrombond AQ C18，流动相乙醚部位乙腈-0.01％磷酸水溶液为流动相梯度洗脱；5％异戊醇的乙酸乙酯部位乙腈-0.01％磷酸水溶液为流动相梯度洗脱；流速0.8ml/分钟检测波长280nm柱温30℃b.气相部分色谱柱Agilent HP-5载气为N2进样器G1888A顶空自动进样器；
6.对照品检测a.液相部分乙醚部位分别精密吸取中国劲酒液相部分乙醚部位对照品溶液与标准品溶液各4μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，即得中国劲酒乙醚部位对照指纹图谱和相应的标准品指纹图谱；5％异戊醇的乙酸乙酯部位分别精密吸取中国劲酒液相部分5％异戊醇的乙酸乙酯部位对照品溶液与标准品溶液各4μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，即得5％戊醇的乙酸乙酯部位对照异指纹图谱和相应的标准品指纹图谱；b.气相部分分别将气相部分对照品溶液和标准品溶液按顶空进样器自动进样进行分析测定，即得气相部分对照指纹图谱和相应的标准品指纹图谱；所述中国劲酒对照指纹图谱中，液相部分乙醚部位的对照指纹图谱中共有特征峰10个，其中7号峰为阿魏酸，5％戊醇的乙酸乙酯部位对照指纹图谱中共有特征峰9个，其中11号峰为淫羊藿苷，与标准品指纹图谱一致；所述气相部分对照指纹图谱中共有特征峰8个，其中7号峰为乙酸龙脑酯，8号峰为丁香酚，与标准品指纹图谱一致；所述中国劲酒液相部分乙醚部位和5％异戊醇的乙酸乙酯部位对照品溶液制备的具体方法是，取中国劲酒100ml，40℃水浴旋转蒸发至近干，上样于装有AB-8的大孔吸附层析柱上(12mm×300mm)，用水洗脱至无糖反应，(即Molish反应为阴性)，后用80ml95％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压蒸干。加入20ml水，超声使溶解，并转移至分液漏斗中。先用水饱和乙醚萃取3次，每次20ml，合并萃取液，水浴蒸干，用四氢呋喃定容至2ml，摇匀，用0.45μ微孔滤膜过滤，即得乙醚部位对照品溶液；再将此溶液用水饱和的5％异戊醇的乙酸乙酯萃取3次，每次20ml，合并萃取液，减压蒸干，用四氢呋喃定容至2ml，摇匀，用0.45μ微孔滤膜过滤，即得5％异戊醇的乙酸乙酯部位对照品溶液；所述液相部分乙醚部位以乙腈-0.01％磷酸水溶液为流动相梯度洗脱，其洗脱梯度为在保留时间为0min、45min、80min、90min、105min时，乙腈与0.01％磷酸水溶液的体积比分别为8∶92，30∶70，50∶50，80∶20，80∶20；5％异戊醇的乙酸乙酯部位乙腈-0.01％磷酸水溶液为流动相梯度洗脱，其洗脱梯度为在保留时间为0min、50min、80min、100min、110min时，乙腈与0.01％磷酸水溶液的体积比分别为15∶85，30∶70，55∶45，100∶0，100∶0；所述计算机辅助相似性评价系统系指药典委员会推荐的由湖南中南大学中药现代化研究中心开发的计算机辅助相似性评价系统；中国劲酒对照指纹图谱的建立，使产品的质量控制有了非常明确、直观、易于操作的标准，使用时只需将检测结果与之进行比较即可。
第二步，建立中国劲酒指纹图谱共有模式图谱按中国劲酒的制备方法、中国劲酒液相部分和气相部分对照品溶液的制备方法、标准品溶液的制备方法制备10个批次的中国劲酒和标准品、供试品溶液，并逐一按相同方法检测，分别得到各批次中国劲酒乙醚部位指纹图谱、5％异戊醇的乙酸乙酯部位指纹图谱、气相部分指纹图谱和相应的标准品指纹图谱；分别输入计算机辅助相似性评价系统进行计算，即可得出中国劲酒乙醚部位、5％异戊醇的乙酸乙酯部位及气相部分的指纹图谱共有模式图谱；建立共有模式图谱的作用一是可以将检测结果输入计算机计算供试品与共有模式图谱之间的相关系数，从理论上考察供试品与共有模式图谱之间的相似度，从而达到控制产品质量的目的；二是方便多个批次的产品之间进行比较，以考察生产工艺的稳定性，产品的稳定性，以确保为消费者提供优质的产品。
第三步，供试品检测1.供试品溶液的制备以上述相同方法分别制备液相部分乙醚部位和5％异戊醇的乙酸乙酯供试品溶液及气相部分供试品溶液；2.以上述相同方法分别制备液相部分和气相部分标准品溶液；3.以上述相同方法测定待测的标准品和供试品；4.结果分析判定乙醚部位供试品指纹图谱中应检出与对照指纹图谱相同的10个特征峰，其中7号峰为阿魏酸，应与标准品指纹图谱一致；5％异戊醇的乙酸乙酯部位供试品指纹图谱中应检出与对照指纹图谱相同的9个特征峰；其中11号峰为淫羊藿苷，应与标准品指纹图谱一致；两个部分的指纹图谱与相应的共有模式图谱经计算机辅助相似性评价系统进行计算，相关系数应大于0.9000；气相部分供试品指纹图谱中应检出与对照指纹图谱相同的8个特征峰；其中7号峰为乙酸龙脑酯，8号峰为丁香酚，应与标准品指纹图谱一致；其指纹图谱与相应的共有模式图谱经计算机辅助相似性评价系统进行计算，相关系数应大于0.9000；本发明的原理是基于中国劲酒中含有大量非挥发性成分和部分原料中含有挥发性成分，而且非挥发性成分在紫外区有较强的吸收，由于中国劲酒是由多位药材制备而成，化学成分复杂，根据其主要化学成分的性质，将成品分离成乙醚部位和5％异戊醇的乙酸乙酯部位，分别采用液相和气相色谱对非挥发性成分和挥发性成分进行检测；在研究过程中还分别对提取方法、检测方法、色谱条件与系统适应性、精密性、稳定性、重现性等进行考察，根据10批以上中试产品的检测结果，建立了产品对照指纹图谱和共有模式图谱；并确定供试品指纹图谱与相应的共有模式图谱之间的相关系数为0.9000；因此，从色谱的整体面貌特征上能把握中国劲酒的质量情况。
下面是对本方法进行考察的部分结果(1)重现性试验取同一样品溶液，按供试品制备方法及检测方法操作6次，计算相似度，结果表明，中国劲酒乙醚部位和5％异戊醇的乙酸乙酯部位的液相指纹图谱和气相部分指纹图谱6次检测结果的相似度均大于0.9000，方法重现性较好；(2)十批样品指纹图谱相似度考察对随机收集的10个批次中国劲酒指纹图谱进行相似度考察，计算结果显示，10个批次的相似度均大于0.9000，提示本方法不仅能从整体上控制劲酒产品的内在质量，还能对生产工艺的稳定性和产品的稳定性进行有效的监控；(3)市售同类产品比较用本方法对市售8种同类产品进行检测，比较各产品指纹图谱，可以明显的看出这8种保健酒的乙醚部位和5％异戊醇的乙酸乙酯部位的液相指纹图谱与本公司生产的中国劲酒均有很大的差异，说明本发明的检测方法具有较好的专属性和特征性；不仅能控制产品质量，还能对本公司产品进行有效识别；图1是中国劲酒乙醚部位对照指纹图谱图2是中国劲酒5％异戊醇的乙酸乙酯部位对照指纹图谱图3是中国劲酒成品气相部分对照指纹图谱图4是中国劲酒乙醚部位共有模式图谱图5是中国劲酒5％异戊醇的乙酸乙酯部位共有模式图谱图6是中国劲酒气相部分共有模式图谱图7是批号为20041220中国劲酒乙醚部位指纹图谱图8是批号为20041220中国劲酒5％异戊醇的乙酸乙酯部位指纹图谱
图9是批号为20041220中国劲酒气相部分指纹图谱图10是批号为20050425中国劲酒乙醚部位指纹图谱图11是批号为20050425中国劲酒5％异戊醇的乙酸乙酯部位指纹图谱图12是批号为20050425中国劲酒气相部分指纹图谱图13是批号为20050723中国劲酒乙醚部位指纹图谱图14是批号为20050723中国劲酒5％异戊醇的乙酸乙酯部位指纹图谱图15是批号为20050723中国劲酒气相部分指纹图谱图16是20041220、20050425、20050723三个批号中国劲酒乙醚部位指纹图谱相似度评价结果图图17是20041220、20050425、20050723三个批号中国劲酒5％异戊醇的乙酸乙酯部位指纹图谱相似度评价结果图图18是20041220、20050425、20050723三个批号中国劲酒气相部分指纹图谱相似度评价结果图图19是阿魏酸标准品指纹图谱图20是淫羊藿苷标准品指纹图谱图21是乙酸龙脑酯标准品指纹图谱图22是丁香酚标准品指纹图谱具体实施方式
实施例1批号为20041220中国劲酒的质量检测1、样品来源 劲牌公司仓库2、样品批号 200412203、标准品溶液的制备a.液相部分取阿魏酸标准品适量，用50％甲醇制成1mg/ml的溶液；取淫羊藿苷标准品适量，用50％甲醇制成1mg/ml的溶液；b.气相部分用玻璃毛细管蘸取乙酸龙脑酯、丁香酚标准品适量于顶空进样瓶中，密封，即得；4、供试品溶液的制备取批号为20041220的中国劲酒100ml，40℃水浴旋转蒸发至近干，上样于装有AB-8的大孔吸附层析柱上(12mm×300mm)，用水洗脱至无糖反应，(即Molish反应为阴性)，后用80ml 95％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压蒸干。加入20ml水，超声使溶解，并转移至分液漏斗中。先用水饱和乙醚萃取3次，每次20ml，合并萃取液，水浴蒸干，用四氢呋喃定容至2ml，摇匀，用0.45μ微孔滤膜过滤，即得乙醚部位供试品溶液；再将此溶液用水饱和的5％异戊醇的乙酸乙酯萃取3次，每次20ml，合并萃取液，减压蒸干，用四氢呋喃定容至2ml，摇匀，用0.45μ微孔滤膜过滤，即得5％异戊醇的乙酸乙酯部位供试品溶液；5、主要仪器与试药a.仪器色谱仪 瓦里安公司仪器(230泵330检测器7725i手动进样器AT-830柱温箱)及Agilent6890日本EYELA1000型旋转蒸发仪b.试药乙醚 天津产 分析纯异戊醇 天津产 分析纯乙酸乙酯 北京产 分析纯乙腈USAJ.T.Baker色谱纯磷酸 北京产 分析纯水乐百氏纯净水一次蒸馏N2高纯氮气，纯度99.999％中国劲酒样品 湖北劲牌公司生产
6.色谱条件a.液相部分色谱柱乙醚部位Hypersil BDS C18，4.6×250mm，5μm5％异戊醇的乙酸乙酯部位Aichrombond AQ C18，4.6×250mm，5um流动相乙醚部位乙腈-0.01％磷酸水溶液为流动相梯度洗脱，在保留时间为0min、45min、80min、90min、105min时，乙腈与0.01％磷酸水溶液的体积比分别为8∶92，30∶70，50∶50，80∶20，80∶20；5％异戊醇的乙酸乙酯部位乙腈-0.01％磷酸水溶液为流动相梯度洗脱，在保留时间为0min、50min、80min、100min、110min时，乙腈与0.01％磷酸水溶液的体积比分别为15∶85，30∶70，55∶45，100∶0，100∶0；流速0.8ml/分钟检测波长280nm柱温30℃b.气相部分色谱柱Agilent HP-5，30m×320m×0.25μm进样口温度230℃FID检测器温度260℃升温程序初始60℃，保持12min，6℃/min升至210℃，保持3min载气为N2，流速1.0ml/min，恒流方式，分流比5∶1进样器G1888A顶空自动进样器，顶空瓶温度85℃，进样阀温度100℃，传输线温度115℃，顶空瓶平衡时间15min，顶空瓶充压时间0.5min，定量环填充时间0.2min，定量环平衡时间0.5min，进样时间1.0min；7、检测
a.液相部分乙醚部位分别精密吸取乙醚部位供试品溶液及标准品溶液各4μl注入液相色谱仪，照《中国药典》2000版一部附录高效液相色谱法测定，得乙醚部位指纹图谱及标准品指纹图谱5％异戊醇的乙酸乙酯部位分别精密吸取5％异戊醇的乙酸乙酯部位供试品及标准品溶液各4μ1，注入液相色谱仪，照《中国药典》2000版一部附录高效液相色谱法测定，得5％异戊醇的乙酸乙酯部位指纹图谱及标准品指纹图谱；b.气相部分直接取上述批号的中国劲酒于顶空进样瓶中，加盖密封；按顶空进样器自动进样进行分析测定，得气相部分指纹图谱及标准品指纹图谱；8、结果分析判定a.所得批号为20041220中国劲酒乙醚部位供试品指纹图谱中检出了与相照指纹图谱相同的10个特征峰；其中7号峰为阿魏酸，与标准品指纹图谱一致；供试品指纹图谱与相应的共有模式图谱经计算机辅助相似性评价系统进行计算，相关系数为0.9899，大于0.9000，符合本公司制定的相关质量标准规定。
b.所得批号为20041220中国劲酒5％异戊醇的乙酸乙酯部位供试品指纹图谱中检出了与对照指纹图谱相同的9个特征峰；其中11号峰为淫羊藿苷，与标准品指纹图谱一致，供试品指纹图谱与相应的共有模式图谱经计算机辅助相似性评价系统进行计算，相关系数应为0.9617，大于0.9000；符合本公司制定的相关质量标准规定。
c.所得批号为20041220中国劲酒气相部分供试品指纹图谱中检出了与对照指纹图谱相同的8个特征峰；其中7号峰为乙酸龙脑脂，8号峰为丁香酚，与标准品指纹图谱一致；供试品指纹图谱与相应的共有模式图谱经计算机辅助相似性评价系统进行计算，相关系数为0.9746，大于0.9000；符合本公司制定的相关质量标准规定。
实施例2批号为20050425中国劲酒的质量检测1、样品来源 劲牌公司仓库2、样品批号 200504253、标准品溶液的制备 同实施例14、供试品溶液的制备 同实施例15、主要仪器与试药 同实施例16、色谱条件 同实施例17、检测 按实施例1相同步骤和方法分别对标准品溶液、本批号供试品溶液的液相部分和气相部分进行检测，分别得到相应的标准品、乙醚部位、5％异戊醇的乙酸乙酯部位、气相部分指纹图谱；8、结果分析判定a.所得批号为20050425中国劲酒乙醚部位供试品指纹图谱中检出了与对照指纹图谱相同的10个特征峰；其中7号峰为阿魏酸，与标准品指纹图谱一致；供试品指纹图谱与相应的共有模式图谱经计算机辅助相似性评价系统进行计算，相关系数为0.9890，大于0.9000，符合本公司制定的相关质量标准规定。
b.所得批号为20050425中国劲酒5％异戊醇的乙酸乙酯部位供试品指纹图谱中检出了与对照指纹图谱相同的9个特征峰；其中11号峰为淫洋藿苷，与标准品指纹图谱一致；供试品指纹图谱与相应的共有模式图谱经计算机辅助相似性评价系统进行计算，相关系数为0.9837，大于0.9000；符合本公司制定的相关质量标准规定。
c.所得批号为20050425中国劲酒气相部分供试品指纹图谱中检出了与对照指纹图谱相同的8个特征峰；其中7号峰为乙酸龙脑脂，8号峰为丁香酚，与标准品指纹图谱一致；供试品指纹图谱与相应的共有模式图谱经计算机辅助相似性评价系统进行计算，相关系数为0.9953，大于0.9000；符合本公司制定的相关质量标准规定。
实施例3批号为20050723中国劲酒的质量检测1、样品来源 劲牌公司仓库2、样品批号 200507233、标准品溶液的制备 同实施例14、供试品溶液的制备 同实施例15、主要仪器与试药 同实施例16、色谱条件 同实施例17、检测 按实施例1相同步骤和方法分别对标准品溶液、本批号供试品溶液的液相部分和气相部分进行检测，分别得到相应的标准品、乙醚部位、5％异戊醇的乙酸乙酯部位、气相部分指纹图谱；8、结果分析判定a.所得批号为20050723中国劲酒乙醚部位供试品指纹图谱中检出了与对照指纹图谱相同的10个特征峰；其中7号峰为阿魏酸，与标准品指纹图谱一致；供试品指纹图谱与相应的共有模式图谱经计算机辅助相似性评价系统进行计算，相关系数为0.9972，大于0.9000，符合本公司制定的相关质量标准规定。
b.所得批号为20050723中国劲酒5％异戊醇的乙酸乙酯部位供试品指纹图谱中检出了与对照指纹图谱相同的9个特征峰；其中11号峰为淫洋藿苷，与标准品指纹图谱一致；供试品指纹图谱与相应的共有模式图谱经计算机辅助相似性评价系统进行计算，相关系数为0.9427，大于0.9000；符合本公司制定的相关质量标准规定。
c.所得批号为20050723中国劲酒气相部分供试品指纹图谱中检出了与对照指纹图谱相同的8个特征峰；其中7号峰为乙酸龙脑脂，8号峰为丁香酚，与标准品指纹图谱一致；供试品指纹图谱与相应的共有模式图谱经计算机辅助相似性评价系统进行计算，相关系数为0.9930，大于0.9000；符合本公司制定的相关质量标准规定。
实施例4三批中国劲酒(批号20041220、20050425、20050723)指纹图谱相似度评价将实施例1、实施例2、实施例3所测得的20041220、20050425、20050723三个批号的各部位指纹图谱分别输入计算机辅助相似性评价系统进行计算，其相关系数分别为乙醚部位0.9899 0.9890 0.9972，5％异戊醇的乙酸乙酯部位0.9617 0.9837 0.9427气相部分0.9746 0.9953 0.9930，均大于0.9000，说明三个批次之间质量差异不大，产品质量稳定。
权利要求
1.用指纹图谱技术检测中国劲酒质量的方法，包括以下步骤第一步，建立中国劲酒对照指纹图谱(1)中国劲酒的制备取下述重量份的中药原料黄芪10-15、肉苁蓉10-15、仙茅10-15、淫羊藿10-15、枸杞10-15、山药10-15、当归10-15、丁香3-5、肉桂3-5，以总药材量50倍的30-50°小曲白酒渗漉12-15天得渗漉液，取渗漉液70-75份，分别加入40％糖浆20份、纯净水5-10份、焦糖色适量，调配，过滤，置常温下陈酿3-6个月，过滤除杂，滤膜精滤，灌装，即得；(2)中国劲酒液相部分对照品溶液的制备a.乙醚部位取中国劲酒100ml，以大孔吸附色谱柱去糖，用水饱和乙醚萃取3次，每次20ml，合并萃取液，蒸干，用四氢呋喃定容至2ml，滤膜过滤，即得；b.5％异戊醇的乙酸乙酯部位将乙醚部位对照品溶液用水饱和的5％异戊醇的乙酸乙酯萃取3次，每次20ml，合并萃取液，蒸干，用四氢呋喃定容至2ml，滤膜过滤，即得；(3)中国劲酒气相部分对照品溶液的制备直接取中国劲酒5ml于10ml顶空进样瓶中，加盖密封，即得；(4)标准品溶液的制备a.液相部分取阿魏酸标准品适量，用50％甲醇制成1mg/ml的溶液；取淫羊藿苷标准品适量，用50％甲醇制成1mg/ml的溶液；b.气相部分用玻璃毛细管蘸取乙酸龙脑酯、丁香酚标准品适量于顶空进样瓶中，密封，即得；(5)色谱条件a.液相部分色谱柱乙醚部位Hypersil C18柱，5％异戊醇的乙酸乙酯部位Aichrombond AQ C18，流动相乙醚部位乙腈-0.01％磷酸水溶液为流动相梯度洗脱；5％异戊醇的乙酸乙酯部位乙腈-0.01％磷酸水溶液为流动相梯度洗脱；流速0.8ml/分钟检测波长280nm柱温30℃b.气相部分色谱柱Agilent HP-5载气为N2进样器G1888A顶空自动进样器；(6)对照品检测a.液相部分乙醚部位分别精密吸取中国劲酒液相部分乙醚部位对照品溶液与标准品溶液各4μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，即得中国劲酒乙醚部位对照指纹图谱和相应的标准品指纹图谱；5％异戊醇的乙酸乙酯部位分别精密吸取中国劲酒液相部分5％异戊醇的乙酸乙酯部位对照品溶液与标准品溶液各4μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，即得5％异戊醇的乙酸乙酯部位对照指纹图谱和相应的标准品指纹图谱；b.气相部分分别将气相部分对照品溶液和标准品溶液按顶空进样器自动进样进行分析测定，即得气相部分对照指纹图谱和相应的标准品指纹图谱；第二步，建立中国劲酒指纹图谱共有模式图谱按中国劲酒的制备方法、中国劲酒液相部分和气相部分对照品溶液的制备方法、标准品溶液的制备方法分别制备10个批次的中国劲酒和待测的标准品、供试品溶液，并逐一按相同方法检测，分别得到各批次中国劲酒乙醚部位指纹图谱、5％异戊醇的乙酸乙酯部位指纹图谱、气相部分指纹图谱和相应的标准品指纹图谱；分别输入计算机辅助相似性评价系统进行计算，即可得出中国劲酒乙醚部位、5％异戊醇的乙酸乙酯部位及气相部分的指纹图谱共有模式图谱；第三步，供试品检测1.供试品溶液的制备以上述相同方法分别制备液相部分乙醚部位和5％异戊醇的乙酸乙酯供试品溶液及气相部分供试品溶液；2.以上述相同方法分别制备液相部分和气相部分标准品溶液；3.以上述相同方法测定待测的标准品和供试品；4、结果分析判定乙醚部位供试品指纹图谱中应检出与对照指纹图谱相同的10个特征峰，其中7号峰为阿魏酸，应与标准品指纹图谱一致；5％异戊醇的乙酸乙酯部位供试品指纹图谱中应检出与对照指纹图谱相同的9个特征峰；其中11号峰为淫洋藿苷，应与标准品指纹图谱一致；两个部分的指纹图谱与相应的共有模式图谱经计算机辅助相似性评价系统进行计算，相关系数应大于0.9000；气相部分供试品指纹图谱中应检出与对照指纹图谱相同的8个特征峰；其中7号峰为乙酸龙脑脂，8号峰为丁香酚，应与标准品指纹图谱一致；其指纹图谱与相应的共有模式图谱经计算机辅助相似性评价系统进行计算，相关系数应大于0.9000；
2.根据权利要求
1所述的用指纹图谱技术检测中国劲酒质量的方法，其特征在于所述中国劲酒液相部分乙醚部位和5％异戊醇的乙酸乙酯部位对照品溶液制备的具体方法是，取中国劲酒100ml，40℃水浴旋转蒸发至近干，上样于装有AB-8的大孔吸附层析柱上(12mm×300mm)，用水洗脱至无糖反应，(即M0lish反应为阴性)，后用80ml95％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压蒸干。加入20ml水，超声使溶解，并转移至分液漏斗中。先用水饱和乙醚萃取3次，每次20ml，合并萃取液，水浴蒸干，用四氢呋喃定容至2ml，摇匀，用0.45微孔滤膜过滤，即得乙醚部位对照品溶液；再将此溶液用水饱和的5％异戊醇的乙酸乙酯萃取3次，每次20ml，合并萃取液，减压蒸干，用四氢呋喃定容至2ml，摇匀，用0.45微孔滤膜过滤，即得5％异戊醇的乙酸乙酯部位对照品溶液。
3.根据权利要求
1所述的用指纹图谱技术检测中国劲酒质量的方法，其特征在于所述液相部分乙醚部位以乙腈-0.01％磷酸水溶液为流动相梯度洗脱，其洗脱梯度为在保留时间为0min、45min、80min、90min、105min时，乙腈与0.01％磷酸水溶液的体积比分别为8∶92，30∶70，50∶50，80∶20，80∶20；5％异戊醇的乙酸乙酯部位乙腈-0.01％磷酸水溶液为流动相梯度洗脱，其洗脱梯度为在保留时间为0min、50min、80min、100min、110min时，乙腈与0.01％磷酸水溶液的体积比分别为15∶85，30∶70，55∶45，100∶0，100∶0。
4.根据权利要求
1所述的用指纹图谱技术检测中国劲酒质量的方法，其特征在于所述计算机辅助相似性评价系统系指药典委员会推荐的由湖南中南大学中药现代化研究中心开发的计算机辅助相似性评价系统。
专利摘要
本发明公开了一种用指纹图谱技术检测中国劲酒质量的方法，该方法包括下述步骤第一步，建立中国劲酒对照指纹图谱；第二步，建立中国劲酒指纹图谱共有模式图谱；第三步，供试品检测；将所测得的供试品图谱与对照指纹图谱进行比较，并输入计算机辅助相似性评价系统进行相似度计算，得出相关系数，便可作出检测结论；本方法具有以下特点(1)可以从整体上、宏观上控制中国劲酒的质量；(2)明确、直观，具有较好的专属性和特征性，重现性好；可操作性强；(3)可用于生产工艺稳定性和产品稳定性的考察；(4)可用于鉴别中国劲酒的真伪；(5)为我国保健酒行业产品质量的监控提供示范。
文档编号G01N1/28GK1991361SQ200510120579
公开日2007年7月4日 申请日期2005年12月28日
发明者刘胜华, 李波, 李先芝, 屠鹏飞, 鲍忠 申请人:劲牌有限公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan