血流量的评价或间接测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及肌肤血流量的水平评价或间接测定方法。
【背景技术】
[0002]作为肌肤老化现象的原因之一，可列举血液循环不良所导致的肤色红润度的降低。该肌肤红润度的降低现象在明显时作为“肌肤暗沉”出现，是通过化妆难以弥补的现象。其次，可以说通过改善肌肤的血流，可期待提高透明性及明亮度且促进皮肤组织的代谢活性、激活细胞，作为其结果，可应对以暗沉的原因为主的肌肤各种老化现象的原因。
[0003]肌肤组织因血流量增加而代谢被促进从而除去废物。例如，开发了通过照射根据化学发光的包含近红外线的光来改善肌肤血流的技术(专利文献1:W02005/077458号公报)。在专利文献I中使用激光多普勒血流仪来测定肌肤血流量的变化。
[0004]这样，为了评价肌肤的健康状态，需要测定皮肤的血流量。与所述的激光多普勒式血流仪同样，使用激光的多通道式血流仪(专利文献2:日本专利第3783491号公报)、力口压式血流仪(专利文献3:日本特开平11-285476号公报)也被用于肌肤的血流测定。然而，在测定时需要直接用血流量计测定受试者，为了测定远方受试者的肌肤血流量，除非将测定装置设置在受试者的住处附近或者受试者直接借调到测定装置的设置场所，否则就不可能测定。
[0005]现有技术文献
[0006]专利文献
[0007]专利文献1W02005/077458号公报
[0008]专利文献2日本专利第3783491号公报
[0009]专利文献3日本特开平11-285476号公报
【发明内容】
[0010]如上所述，为了能够间接地评价远方受试者的血流状态，期望使用从受试者采集的角质层来间接地测定或评价血流量。
[0011]本发明的课题在于提供不是外科摘取皮肤而对皮肤带来刺激等的方法，而是可简便且确实地测定或评价血流状态的使用生物化学指标的新颖的测定或评价方法。
[0012]本发明为以下的构成。
[0013](I) 一种皮肤血流量的间接测定或评价方法，其特征在于，以皮肤角质层中的白细胞介素-1受体拮抗剂及/或白细胞介素-1 α的表达量作为指标。
[0014](2)根据(I)所述的方法，其特征在于，用于测定或评价方法的皮肤角质层通过胶带剥离法进行采集。
[0015](3) 一种方法，其特征在于，从基于预先测定的血流量与皮肤角质层中的白细胞介素-1受体拮抗剂及/或白细胞介素-1 α的表达量的相关性制作的相关式来间接测定皮肤的血流量。
[0016](4) 一种皮肤血流量的间接测定法，其特征在于，由以下工序构成:采集角质层的采集工序、测定所述采集工序中所采集的角质层中的白细胞介素-1受体拮抗剂、白细胞介素-1 α的表达量的测定工序和将所述测定工序中所测定的白细胞介素-1受体拮抗剂、白细胞介素-1a的表达量通过下述回归式换算成皮肤血流量的工序，所述回归式为从预先测定的集体角质层中的白细胞介素-1受体拮抗剂、白细胞介素-1 α的表达量分布求出的得到血流量相关的回归式。
[0017](5) 一种皮肤血流量的评价方法，其特征在于，与基于预先测定的血流量与皮肤角质层中的白细胞介素-1受体拮抗剂及/或白细胞介素-1 α的表达量的相关性制作的散点图进行对比来评价。
[0018](6) 一种皮肤血流的评价方法，其特征在于，由以下工序构成:采集角质层的采集工序、测定所述采集工序中所采集的角质层中的白细胞介素-1受体拮抗剂、白细胞介素-1 α的表达量的测定工序和将所述测定工序中所测定的白细胞介素-1受体拮抗剂、白细胞介素-1a的表达量与预先测定的集体角质层中的白细胞介素-1受体拮抗剂、白细胞介素-1a的表达量分布进行对比的对比工序。
[0019]根据本发明的方法，皮肤血流的测定或评价可通过测定角质层中的白细胞介素-1受体拮抗剂或白细胞介素-1 α的表达量来间接地测定或评价。
[0020]此外，由于本发明的方法可通过胶带剥离法等简便的操作方法来采集评价试样，所以受试者的负担少，无论谁均可简单地进行评价。
[0021]由于特别是使用从远方受试者采集的样品，例如，通过胶带剥离法的角质层可简便间接地评价肌肤血流量或者血流的状态，所以不需要受试者直接来试验场所。这样的话，成为血流量测定对象的适用范围广，可简便地诊断或评价皮肤的状态。
[0022]进而，不需要用血流量计直接测定受试者，即使为远方的受试者只要可得到角质层就可简便地测定或评价皮肤血流量。
[0023]进而，根据本发明的方法可客观地评价肌肤状态、化妆品等的效果。
【附图说明】
[0024]图1为将皮肤角质层中的白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1RA)和与皮肤血流量成比例的相对输出量(relative output amount) (V)的测定结果制成散点图并求出了回归直线的图。
[0025]图2为将皮肤角质层中的白细胞介素-1 a (IL_1 α )和与皮肤血流量成比例的相对输出量(V)的测定结果制成散点图并求出了回归直线的图。
【具体实施方式】
[0026]本发明为涉及皮肤血流量的间接测定或评价方法的发明，其特征在于，以皮肤角质层中的白细胞介素-1受体拮抗剂及/或白细胞介素-1 α的表达量作为指标。
[0027]以下，关于本发明进行详细说明。
[0028]本发明的血流量的测定或评价方法的特征在于，以皮肤角质层中的白细胞介素-1受体拮抗剂(以下，叫做IL-1RA。)或白细胞介素-1a (以下，叫做IL-1a。)的表达量作为指标。
[0029]本发明中的血流量是指用激光多普勒血流量计测定的皮肤毛细血管内的血流量。发现用激光多普勒血流量计测定的血流量与皮肤角质层中的IL-1RA或IL-1 α的表达量相关。因此，通过测定IL-1RA或IL-1a的皮肤角质层中的表达量，可间接地对皮肤血流量或皮肤血流状态进行评价。
[0030]IL-1RA是单核细胞、巨噬细胞等产生的抗炎症性的细胞因子，炎症时增加并使皮肤正常化。IL-1RA拮抗性地阻碍白细胞介素-1的功能。在细胞水平IL-1RA增加时，作为分解并片段化胶原蛋白的酶的基质金属蛋白酶-1减少。
[0031]IL-1a是单核细胞、巨噬细胞等产生的促炎症性的细胞因子，活化淋巴细胞、巨噬细胞并引起炎症。IL-1RA拮抗性地阻碍白细胞介素-1的功能。已知IL-1a增加时，作为分解并片段化胶原蛋白的酶的基质金属蛋白酶-1增加。
[0032]角质层是位于皮肤最上层的组织，具有保护皮肤不受来自体外的异物、刺激的功倉泛。
[0033]本发明中的测定或评价对象部位只要是可取得角质层的部分，则还可包含任意部位，作为主要的部位，可列举面部、颈部、上臂部。可根据以往的方法得到来自上述部位皮肤的角质层。然而，如前所述，由于外科摘取皮肤等的方法会给使用者带来负担，所以优选胶带剥离法、刮擦等可简便地得到角质层的方法。特别优选胶带剥离法。
[0034]这样准备的各试样中的IL-1RA或IL_1 α的表达量可用以往已知的方法进行测定。例如，可使用基于与IL-1RA或IL-1 α的抗体进行反应的酶联免疫测定法、放射免疫测定法、蛋白质印迹测定法等的方法。这样的测定手段已有市售，作为代表性的IL-1RA的酶联免疫测定试剂盒，可例不 R&D Systems 制的 Human IL-lRA/IL_lF3Quantikine ELISAKit、Life Technologies 公司制的 IL-1RA Human ELISA Kit。
[0035]另外，作为代表性的IL-1a的酶联免疫测定试剂盒，可例示R&D Systems制的 Human IL-1 a /IL-1FlQuantikine ELISA Kit、Thermo Scientific 公司制的 HumanIL-1alpha ELISA Kit。
[0036]从各试样中将IL-1RA、IL-1 α经过其自身已知的生物化学方法，例如冻融法、超声波破碎法、均质法等作为可溶性组分进行提取。提取后迅速地进行测定。
[0037]由于皮肤血流量多的人的角质层中的IL-1RA表达量高于皮肤血流量少的人的角质层中的IL-1RA表达量，所以可将角质层中的IL-1RA表达量的多寡作为指标，简便地测定或评价皮肤血流量的多寡。
[0038]另外，由于皮肤血流量多的人的角质层中的IL-1 α表达量低于皮肤血流量少的人的角质层中的IL-1 α表达量，所以可将角质层中的IL-1 α表达量的多寡作为指标，简便地评价皮肤血流量的多寡。
[0039]本发明所使用的角质层可通过胶带剥离法这样的用角质层胶带仅采集角质层的表层部分的简单方法进行采集。因此不会给受试者带来负担，可测定受试者的皮肤血流量或评价皮肤的血流状态。
[0040]本发明的皮肤血流量的测定方法由以下工序构成:采集角质层的采集工序、测定所述采集工序中所采集的角质层中的IL-1RA、IL-1a的表达量的测定工序和将所述测定工序中所测定的IL-1RA、IL-1a的表达量通过下述回归式换算成皮肤血流量的工序，即从预先测定的集体角质层中的IL-1RA、IL-1a的表达量分布求出的得到血流量相关的回归式。
[0041]本发明的皮肤血流量的评价方法由以下工序构成:采集角质层的采集工序、测定所述采集工序中所采集的角质层中的IL-1RA、IL-1a的表达量的测定工序和将所述测定工序中所测定的IL-lRA、I