源金黄色葡萄球菌isdB蛋白多克隆抗体；
[0036]检测线的制备:采用三维喷膜仪，调整喷液量为53?55dotS/mL/cm，用包被缓冲液稀释兔源金黄色葡萄球菌isdB蛋白多克隆抗体，浓度为60?65 μ g/ml，在NC膜中检测线位置划线，即为检测线，晾干备用；所述的包被缓冲液为经过0.40?0.45 μ I滤膜过滤的0.05Μ、ρΗ9.6 的 CBS 缓冲液；
[0037]质控线的制备:采用三维喷膜仪，调整喷液量为50?55dotS/mL/cm，用包被缓冲液稀释羊抗鼠IgG抗体，浓度为1.6mg/ml，在NC膜上与检测线平行的位置划线，间隔5mm，即为质控线，所述的包被缓冲液为经过0.40?0.45 μ I滤膜过滤的0.03Μ、ρΗ9.4的CBS缓冲液；
[0038]NC膜组装制备:晾干检测线和质控线，得到含有检测线和质控线的NC膜；用封闭工作液将制备的NC膜于室温72h晾干，封存备用；所述的封闭工作液为2.5?2.8% BSA、2.2?2.6%脱脂奶粉和0.01Μ、ρΗ7.0的CBS缓冲液混合后用0.42?0.45 μ I滤膜过滤得到的封闭工作液；
[0039](2)制备涂覆金标抗体垫
[0040]用20mM含质量百分比为1.5% BSA,0.1% NaNjP 3%四硼酸钠的稀释缓冲液，将金标鼠源金黄色葡萄球菌单克隆抗体稀释至终浓度0.08mg/mL ;裁取规格为300 X 7_的玻璃纤维棉，将金标抗体溶液用单向喷点仪，以6 μ L/cm的速度(大约22ng/条)，均匀喷洒于玻璃纤维棉，56°C干燥lh，加入干燥剂真空密封后，室温保存备用。
[0041](3)组装金黄色葡萄球菌胶体金检测试纸卡
[0042]将涂有检测线和质控线的NC膜粘贴在支持板的中部，在NC膜的一侧依次粘贴含有金标抗体的玻璃纤维膜和样品垫，在NC膜的另一侧粘贴吸收垫，得到试纸板，将试纸板切割成不同宽度的试纸条，将试纸条安放于卡槽中即为金黄色葡萄球菌胶体金检测试纸卡。
[0043](4)金黄色葡萄球菌胶体金检测试纸卡使用及判定
[0044]金黄色葡萄球菌胶体金检测试纸卡在诊断畜禽、奶牛养殖场临床样本或食品中的金黄色葡萄球菌中应用，将增菌后的培养液50 μ I加至1.5mlEP管中，加入200 μ I灭菌水混匀即得待检样品，将所得的待检样品100 μ I滴加在本试纸卡的载样垫中，在试纸卡的检测线、质控线位置均出现红色条带时，金黄色葡萄球菌检测为阳性；仅质控线出现一条红色条带时，为阴性结果；在试纸卡的质控线未出现红色条带时为无效结果。
[0045]其中，步骤(I)中检测线和质控线的线宽为1mm，两线相距4mm，位于膜的中间，距NC膜的边距6?7_。
[0046]上述实施例为本发明的有效的实施方式，但本发明实施方式并不局限于上述实施方式的限制，根据每批次的生产实际情况，来调整具体的实施条件，整体没有特别大的改变。其他发明没有背离此发明基本原则和操作方法所作出的替代、组合、优化等均在本发明的有效保护范围内。
【主权项】
1.金黄色葡萄球菌胶体金检测试纸卡，其特征在于:所述金黄色葡萄球菌胶体金检测试纸卡由胶体金试纸条和扣板式卡槽组成；扣板式卡槽具有一个容置胶体金试纸条的内置空腔，且扣板式卡槽上设置有观察区和加样区；胶体金试纸条主要由支持板、NC膜、金标抗体垫、样品垫和吸收垫组成； 所述的NC膜设置在支持板的中部，NC膜一侧的支持板上依次粘贴有金标抗体垫和样品垫，NC膜另一侧的支持板上粘贴有吸收垫；所述NC膜的中部有一条含有金黄色葡萄球菌多克隆抗体的检测线和一条含有羊抗鼠二抗的质控线；胶体金试纸条设置在卡槽的内置空腔内，卡槽的观察区对应胶体金试纸条的显色区，加样孔对应胶体金试纸条的样品垫； 所述样品垫中金标抗体为兔抗金黄色葡萄球菌isdB蛋白单克隆抗体； 所述NC膜中金黄色葡萄球菌抗体为兔源金黄色葡萄球菌isdB蛋白多克隆抗体；所述NC膜中羊抗鼠二抗为羊抗鼠I gG抗体。
2.如权利要求1所述的金黄色葡萄球菌胶体金检测试纸卡的制备方法，其特征在于:包括以下步骤: (1)制备NC膜 兔源金黄色葡萄球菌isdB蛋白多克隆抗体的制备:采用原核表达并纯化的金黄色葡萄球菌isdB蛋白作为免疫原，提取IgG抗体，制备兔源金黄色葡萄球菌isdB蛋白多克隆抗体； 检测线的制备:采用三维喷膜仪，调整喷液量为53?55dotS/mL/cm，用包被缓冲液稀释兔源金黄色葡萄球菌isdB蛋白多克隆抗体，浓度为60?65 μ g/ml，在NC膜中检测线位置划线，即为检测线，晾干备用；所述的包被缓冲液为经过0.40?0.45 μ I滤膜过滤的0.05Μ、ρΗ9.6 的 CBS 缓冲液； 质控线的制备:采用三维喷膜仪，调整喷液量为50?55dotS/mL/cm，用包被缓冲液稀释羊抗鼠IgG抗体，浓度为1.6mg/ml，在NC膜上与检测线平行的位置划线，间隔5mm，即为质控线，所述的包被缓冲液为经过0.40?0.45 μ I滤膜过滤的0.03Μ、ρΗ9.4的CBS缓冲液； NC膜组装制备:晾干检测线和质控线，得到含有检测线和质控线的NC膜；用封闭工作液将制备的NC膜于室温72h晾干，封存备用；所述的封闭工作液为2.5?2.8% BSA,2.2?2.6%脱脂奶粉和0.01M、pH7.0的CBS缓冲液混合后用0.42?0.45 μ I滤膜过滤得到的封闭工作液； (2)制备涂覆金标抗体垫 用20mM含质量百分比为1.5% BSA,0.1% NaNjP 3%四硼酸钠的稀释缓冲液，将金标鼠源金黄色葡萄球菌单克隆抗体稀释至终浓度0.08mg/mL ;裁取规格为300 X 7_的玻璃纤维棉，将金标抗体溶液用单向喷点仪，以6 μ L/cm的速度(大约22ng/条)，均匀喷洒于玻璃纤维棉，56°C干燥lh，加入干燥剂真空密封后，室温保存备用。 (3)组装金黄色葡萄球菌胶体金检测试纸卡 将涂有检测线和质控线的NC膜粘贴在支持板的中部，在NC膜的一侧依次粘贴含有金标抗体的玻璃纤维膜和样品垫，在NC膜的另一侧粘贴吸收垫，得到试纸板，将试纸板切割成不同宽度的试纸条，将试纸条安放于卡槽中即为金黄色葡萄球菌胶体金检测试纸卡。 (4)金黄色葡萄球菌胶体金检测试纸卡使用及判定 金黄色葡萄球菌胶体金检测试纸卡在诊断畜禽、奶牛养殖场临床样本或食品中的金黄色葡萄球菌中应用，将增菌后的培养液50 μ I加至1.5mlEP管中，加入200 μ I灭菌水混匀即得待检样品，将所得的待检样品100 μ I滴加在本试纸卡的载样垫中，在试纸卡的检测线、质控线位置均出现红色条带时，金黄色葡萄球菌检测为阳性；仅质控线出现一条红色条带时，为阴性结果；在试纸卡的质控线未出现红色条带时为无效结果。
3.如权利要求2所述的金黄色葡萄球菌胶体金检测试纸卡的制备方法，其特征在于:步骤⑴中检测线和质控线的线宽为1mm，两线相距4mm，位于膜的中间，距NC膜的边距6?7mm0
【专利摘要】本发明涉及金黄色葡萄球菌胶体金检测试纸卡及其制备方法，所述检测试纸卡由胶体金试纸条和扣板式卡槽组成，胶体金试纸条主要由支持板、NC膜、金标抗体垫、样品垫和吸收垫组成，所述的NC膜设置在支持板的中部，NC膜一侧的支持板上依次粘贴有含有金标金黄色葡萄球菌isdB蛋白单克隆抗体垫，NC膜另一侧的支持板上粘贴有吸收垫，所述NC膜的中部有一条含有金黄色葡萄球菌isdB蛋白多克隆抗体的检测线和一条含有羊抗鼠二抗的质控线，该试纸卡具有特异性强、灵敏度高、检测快速的优点，且不需要使用仪器设备，成本低廉，操作方便，能广泛应用于畜禽、奶牛养殖场及食品业对金黄色葡萄球菌的快速、准确诊断，减少重大经济损失。
【IPC分类】G01N33-68
【公开号】CN104820101
【申请号】CN201510194258
【发明人】张国祖, 王兴涛, 郭振环, 金燕飞, 陈献忠
【申请人】河南省康星药业股份有限公司
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年4月22日