一种检测甘油磷酸胆碱中甘油磷酸胆碱含量的方法

文档序号:8556718阅读:813来源:国知局
一种检测甘油磷酸胆碱中甘油磷酸胆碱含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于S类新药甘油磯酸胆碱(Glycero地OS地ocholine,GPC,W下简称 GPC)开发技术领域;具体设及一种利用固体核磁共振内标法测定GPC药物中GPC含量的方 法。
【背景技术】
[0002] 随着世界人口老龄化的速度加快,老年痴呆症已成为危及老年人生命的第四大病 因,严重威胁中老年人的身体健康和生活质量。因此老年性痴呆症的预防和治疗已成为医 药研究的重大课题。甘油磯酸胆碱(简称GPC)是机体内磯脂代谢的产物之一,也是重要 的神经传递介质己酷胆碱(Acetylcholine)的生物合成前体。在体内,GPC最重要的生理 功能在于穿过血脑屏障,为己酷胆碱和磯脂酷胆碱的生物合成提供必要的胆碱。在GPC的 生产和使用方面,国外W大豆磯脂为原料,通过酶解磯脂酷胆碱制备出甘油磯酸胆碱,并将 GPC作为一种脑缺血型中风、阿尔茨海默式痴呆W及多发性脑梗死性痴呆的药物应用于临 床上,同时在保健市场上,50%含量的GPC的产品也已经面世。在我国,目前还没有国家标 准的制剂申请注册。开发S类新药GPC,可W降低其生产成本,减低药价,从而为患者提供更 好的治疗。在新药的研制开发过程中,确定基准物质的含量是该过程的重要环节。赵艳艳 等通过化学鉴别法、薄层色谱法W及红外吸收光谱图建立了GPC的鉴别标准,并建立了测 定其含量的HPLC-ELSD法。利用HPLC测定其含量,前期处理复杂,需要保证GPC从药物中 完全解离出来,测试步骤较多,耗时较长,定量时需要高纯度物质做对照。因此,开发一种简 易可行,能够有效进行GPC含量测定的技术方法对于药物开发及维护消费者利益,促进我 国=类新药行业健康发展,具有十分重要的意义。

【发明内容】

[0003] 针对现有技术中的缺陷,本发明是针对GPC定量分析方面存在的技术难题,提供 一种采用固体核磁共振内标法对GPC药物中GPC含量进行分析的方法。
[0004] 本发明是通过W下技术方案实现的:
[0005] 一种检测甘油磯酸胆碱中甘油磯酸胆碱含量的方法,其包括如下步骤:
[0006] 步骤一、选择内标物;
[0007] 步骤二、对待测物及内标物的各个"C峰进行归属,与有机化合物核磁共振碳谱数 据库中相应的核磁共振碳谱进行比对确认,并明确每个"C峰所对应的原子个数;
[000引步骤=、准确称取待测物及内标物,为保证积分的准确性,待测物中甘油磯酸胆碱 的甲基与内标物的甲基的摩尔比控制在1 ;1,W保证待测物的甲基峰和内标的甲基峰面积 相差不大,减少测定误差;研磨混匀后,进行固体"CNMR检测;
[0009]步骤四、记录试样的固体"CNMR谱,并在傅立叶变换、相位调整、基线校正及化学 位移定标后积分,记录甘油磯酸胆碱甲基基团的峰面积\和内标物六甲基苯的甲基基团的 峰面积Ah。对每一信号进行多次(不少于5次)积分,取平均值或去掉极值后取平均值进 行后面的计算,w提高积分的准确性和重现性;
[0010] 步骤五、利用所记录的固体"CNMR谱,计算甘油磯酸胆碱的含量,公式为:
[0011] 扣'抑c=舞X哉X策X100 ....................................(1)
[0012] 式(1)中:
[0013]Wwc-待测药品中GPC的质量分数;
[0014] 一试样中GPC药品的质量分数;
[0015] Wh-试样中内标物六甲基苯的质量分数;
[0016]Ae- GPC的甲基基团峰面积;
[0017]Ah-六甲基苯的甲基基团峰面积;
[001引 6-六甲基苯中甲基基团数;
[0019]3-GPC中甲基基团数;
[0020]Mg- GPC的摩尔质量,Mg= 257. 5g/mol;
[0021] Mh-六甲基苯的摩尔质量,Mh= 162. 2g/mol;
[0022] 实验结果精确至0. 1% (按质量分数计)。
[0023] 所述内标物的选择标准为;纯度不低于99. 7%,至少含有一个甲基,并在"CNMR 谱图中表现为尖锐的单峰,且与所测样品的谱峰之间不产生干扰。
[0024] 作为优选方案,所述固体"CNMR检测实验条件如下;"C观察频率为100. 62MHz, 谱宽为38265. 30甜z,"C90°脉冲宽度为3.30ys,质子去禪脉冲宽度为100ys,采样时间 为0. 0134s,弛豫延迟时间为25s,转速为5000化,采样次数为1428次,"C化学位移W甘氨 酸幾基碳信号(相对于TMS5 176. 03)为标准设定。
[0025] 作为优选方案,进行固体"CNMR检测前,将样品过800ym筛后备用。
[0026] 作为优选方案,所述内标物为六甲基苯,也可W使用3-(S甲基娃基)-1-丙横酸 钢盐、丙氨酸等。
[0027] 作为优选方案,对于过筛后样品中不能通过筛子的部分先进行研磨后,再次过筛。 [002引核磁共振内标法用于定量分析的基础是各化学环境中不同"C的吸收面积只与所 包含的"C原子数有关,不需要引入任何校正因子就可直接根据各共振峰的积分值推算所 代表的自旋核的数量。由于NMR法测定药品含量时通常无需专用的药品基准物质,而仅W 已知含量的普通化学物质做参比,就可得到药品的绝对含量,所W特别适用于对新药基准 物质的含量测定。
[0029]与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:
[0030] 本发明的方法无需复杂的样品前处理,无需分离,直接固体进样,定量时无需化合 物的纯品作为对照标准,可W对无对照品的药品进行含量分析和质量控制,结构鉴定和定 量分析可同步完成,操作简单,分析速度快,成本低,解决了基准物质含量测定的技术问题, 对于S类新药GPC开发及维护消费者利益,促进我国GPC药业健康发展,具有十分重要的意 义,也可为后续研究核磁定量分析其他药物提供参考。
【附图说明】
[003U图1为实施例1试样的固体"CNMR谱图。
【具体实施方式】
[0032] 下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。W下实施例将有助于本领域的技术 人员进一步理解本发明,但不W任何形式限制本发明。应当指出的是,对本领域的普通技术 人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可W做出若干变形和改进。该些都属于本发明 的保护范围。
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