一种同时测定比卡鲁胺中6种有关物质的uplc方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种化学药物有关物质的检测，具体涉及一种同时测定比卡鲁胺中6 种有关物质的UPLC方法。
【背景技术】
[0002] 比卡鲁胺（bicalutamide，BCT)是英国AstraZeneca公司开发研制的一种新型非 甾体类抗雄激素药，1995年在英国批准上市，1999年在我国获准进口，化学名为N-[4-氰 基_3_(二氟甲基）苯基]_3_[ (4-氟苯基）横酰基]_2_羟基-2-甲基丙酰胺，商品名为康 士得。比卡鲁胺可阻断肾上腺产生的雄性激素作用，抑制雄性激素在细胞核受体部位的结 合或吸收，导致前列腺肿瘤萎缩，临床上用于治疗晚期前列腺癌。比卡鲁胺在生产和贮存过 程中会产生系列降解产物和相关杂质，美国药典（35版）明确了其中6个已知杂质（见图 1)，其中4-氨基_2_(三氟甲基）苯甲腈是合成比卡鲁胺的原料之一同时也是降解产物，比 卡鲁胺硫化物为合成中间体，杂质A、去氟同系物、2-氟异构体和去羟基同系物为合成过程 中的副产物。本品在英国药典（2013版）中有收载，采用HPLC法仅对少数有关物质进行 测定，美国药典32版至35版均有收载，采用HPLC法对有关物质进行测定，每个样品分析时 间为35分钟，流速为1.0ml?mirT1。但本品未被中国药典（2010版）收载。国内对比卡鲁 胺的研宄很少，主要针对比卡鲁胺HPLC法含量测定的研宄报道，对于比卡鲁胺有关物质的 报道更少，仅有一篇有关比卡鲁胺相关物质B的合成和表征及理化性质的研宄报道，未见 关于比卡鲁胺中其他有关物质测定的报道。而药品中的有关物质往往是引起过敏反应的根 源，所以对于有关物质的检测控制非常重要。
【发明内容】
[0003] 为了弥补国内没有测定比卡鲁胺中6种有关物质方法的空白，本发明采用超高效 液相色谱法（UltraPerformanceLiquidChromatography，UPLC)建立了比卡鲁胺有关物 质的检查测定方法，同时测定了比卡鲁胺及其中6种有关物质，弥补目前国内没有比卡鲁 胺有关物质检测方法的空白，能更好的控制比卡鲁胺及其相关制剂的质量，确保安全用药。 该方法分析比卡鲁胺样品中6种有关物质只需要10分钟，相比美国药典中分析一个样品 需要35分钟分析时间大大缩短，该方法中流速为0. 5ml?mirT1，相比美国药典方法流速为 1.0ml?mirT1，大大的减少了试剂消耗，更为环保、经济、快速和简便。目前国内报道的测定 比卡鲁胺含量的方法不适合同时测定6种有关物质，且流动相中添加有磷酸盐，也不利于 色谱柱的使用和保护。本发明经多次反复试验和优化而建立的超高效液相色谱法测定比卡 鲁胺有关物质的方法专属性强、准确、灵敏度高、快速，能有效控制比卡鲁胺及其相关制剂 的质量。
[0004] 本发明涉及一种同时测定比卡鲁胺中6种有关物质的UPLC方法，该方法包括以下 步骤：
[0005] (1)样品溶液制备：取比卡鲁胺待测样品适量，精密称定，用稀释剂溶解并定量稀 释制成每lmL中约含lmg的溶液，作为供试品溶液。
[0006] ⑵对照品溶液制备：取比卡鲁胺、4-氨基-2-(三氟甲基）苯甲腈、杂质A、去氟 同系物、2-氟异构体、去羟基同系物和比卡鲁胺硫化物对照品各适量，用稀释剂溶解并稀释 制成每lmL中约含比卡鲁胺50yg、其他成分各5yg的混合溶液。
[0007] (3)超高效液相色谱测定：取对照品溶液和样品溶液在以下色谱条件下进行测定 分析，色谱柱为40〇仍1丫诎1^：8￡11(： 18(1.7 11111，2.1111111\50臟）；流动相六为0.01%卜八）三 氟乙酸的水溶液，流动相B为0.01% (v/v)三氟乙酸的乙腈溶液，按下表进行梯度洗脱；流 速0. 5ml?mirT1;柱温25°C;检测波长270nm。取样品溶液和对照品溶液各1. 5yL，注入超 高效液相色谱仪，记录色谱图，杂质A峰与比卡鲁胺峰分离度不小于6. 5,理论塔板数按比 卡鲁胺峰计算不低于5000。
[0008] 表1流动相梯度洗脱程序
[0010] 本发明采用UPLC法同时测定比卡鲁胺及其6种有关物质，比卡鲁胺及其6种有关 物质得到了有效分离，分离度均大于1.5,方法学结果均符合分析测定要求。本发明所建立 的同时测定比卡鲁胺及其6种有关物质的UPLC方法，可快速准确地检测出比卡鲁胺的杂质 及降解产物，操作简单，重现性好，灵敏度高，可更好地控制比卡鲁胺及其制剂的质量，弥补 了国内没有比卡鲁胺有关物质检测方法的空白。
【附图说明】
[0011] 图1比卡鲁胺及其有关物质的化学结构图（A. 4-氨基-2-(三氟甲基）苯甲腈 B.杂质AC.去氟同系物D. 2-氟异构体E.去羟基同系物F.比卡鲁胺硫化物G.比卡鲁 胺）
[0012] 图2混合对照品溶液色谱图（1. 4-氨基_2_(三氟甲基）苯甲腈2.杂质A3.去 氟同系物4. 2-氟异构体5.比卡鲁胺6.去羟基同系物7.比卡鲁胺硫化物）
[0013] 图3比卡鲁胺样品溶液色谱图（1.去氟同系物2. 2-氟异构体3.比卡鲁胺 4?比卡鲁胺硫化物）
【具体实施方式】
[0014] 通过以下实施例，进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。
[0015] 实施例1比卡鲁胺原料药中6种有关物质的测定
[0016] 1仪器与试药
[0017] WatersACQUITY超高效液相色谱仪，所用试药均为色谱纯，水为超纯水。比卡鲁 胺原料药三批，每批46g;比卡鲁胺对照品200mg;4_氨基_2_(三氟甲基）苯甲腈对照品 20mg;杂质A对照品20mg;去氟同系物对照品20mg;2_氟异构体对照品20mg;去羟基同系 物对照品20mg;比卡鲁胺硫化物对照品20mg。
[0018] 2方法与结果
[0019] 2. 1色谱条件与系统适用性
[0020] 色谱柱：ACQMTYUPLCBH1C18(l. 7ym，2.lX50mm);流动相A为 0? 01% (v/v)三 氟乙酸的水溶液，流动相B为0.01% (v/v)三氟乙酸的乙腈溶液，按表1进行梯度洗脱；流 速0. 5ml?mirT1;柱温25°C;检测波长270nm。取比卡鲁胺与杂质A对照品各适量，以流动 相A-流动相B1 : 2作为稀释剂溶解并稀释制成每lmL中约含比卡鲁胺50yg和杂质A 5yg的混合溶液，作为系统适用性溶液。精密量取系统适用性溶液1. 5yL，注入液相色谱 仪，记录色谱图，杂质A峰与比卡鲁胺峰分离度不小于6. 5,理论塔板数按比卡鲁胺峰计算 不低于5000。
[0021] 2. 2专属性考察
[0022] 2. 2. 1各成分的分离情况
[0023] 取比卡鲁胺、4-氨基_2_(三氟甲基）苯甲腈、杂质A、去氟同系物、2-氟异构体、去 羟基同系物和比卡鲁胺硫化物对照品各适量，用稀释剂溶解并稀释制成每lmL中约含比卡 鲁胺50yg、其他成分各5yg的混合溶液，在上述色谱条件下进样1. 5yL，记录色谱图，各 杂质峰均与比卡鲁胺完全分离。
[0024] 2. 2. 2破坏性试验降解产物的检出情况
[0025] 取比卡鲁胺对照品约50mg，共7份，分别置50mL量瓶中进行酸、碱、光照、氧化、还 原、水解和高温破坏，酸、碱破坏溶液用相应溶液中和，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，精密量 取1. 5yL，进入色谱仪分析，结果显示比卡鲁胺在光照、酸、碱、还原和水解降解条件下质量 稳定，未产生明显的降解产物，在高温条件下轻微降解产生4-氨基-2-(三氟甲基）苯甲 腈，在氧化条件下降解明显，降解