一种高效液相色谱法测定菜籽油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及一种高效液相色谱法测定菜籽油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法，所 属技术领域：二、生物与新医药技术（七）现代农业技术4、农产品精深加工与现代储运： 农产品质量安全评价、快速检测、全程质量控制等技术。
【背景技术】
[0002] HPLC是一项高压、高效、高灵敏度的分离技术，可用于分离分析高沸点、相对分子 量大、热稳定性差的有机化合物，广泛应用于化学、化工、高分子、生物、食品、医药等领域。
[0003] 齐墩果酸、熊果酸主要存在于菜籽油及其油脚中，为五环三萜类化合物；性质相 近，难以分离；是一种活性成分；有保肝、消炎、抗肿瘤、降血脂、增强免疫和抑制免疫（免疫 双向调解作用）等作用。
[0004] 目前这2种物质还只能从植物中提取，无法化学合成；检测方法有分光光度法、薄 层扫描法和高效液相色谱法，前者通常采用显色剂显色后测定，由于他们性质相近，分光光 度法通常测得其三萜类总量，方法缺乏专属性；而普通的薄层色谱很难使OA和UA分离；相 比较而言，HPLC较容易实施两者的分离，且紫外检测相对于蒸发光散射检测有较好的重现 性。在现有可查范围内，利用HPLC同时测定菜籽油中齐墩果酸、熊果酸未见报道，采用反相 高效液相色谱法二极管阵列检测器测定了菜籽油中的齐墩果酸和熊果酸含量，旨在为评价 菜籽油的质量提供科学依据。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题在于提供一种高效液相色谱法测定菜籽油中齐墩果 酸、熊果酸含量的方法，从而准确测定其含量，方法操作简单、灵敏度高、重现性好。
[0006] 为了实现上述目的本发明采用如下技术方案：
[0007] -种高效液相色谱法测定菜籽油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法，其特征在于包 括以下步骤：
[0008] (1)对照品溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品10. 20mg、熊果酸对照品8. 54mg， 分别置l〇ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得齐墩果酸、熊果酸对照品贮备 液。
[0009] (2)样品溶液的处理：取菜籽油样品约2. 0-3. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精 密加甲醇25ml，密塞，称定重量，60-90°C水浴提取l_2h，超声5-20min，再称定重量，用甲醇 补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
[0010] (3)将滤液过0. 40-0. 50ym微孔滤膜后，在实验色谱条件下进行高效液相色谱 法测定，得测定数值；所述的实验色谱条件为：色谱柱：C18柱，250X4. 6mm，5ym;流动相： 265 %甲醇-35 %水-0. 1 %冰乙酸-0. 05 %三乙胺，其中，流动相由甲醇265mL、水35mL、冰 乙酸0. 05mL和三乙胺0. 05mL配置；紫外检测器的检测波长：210nm;流动相流速为0. 6mL/ min，柱温20°C，进样体积为20yL;
[0011] ⑷按照外标法计算菜籽油中齐墩果酸、熊果酸的含量。
[0012] 所述的高效液相色谱法测定菜籽油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法，其特征在 于：所述的实验色谱条件为：色谱柱：C18柱，250X4. 6mm，5ym;流动相：265%甲醇-35% 水-0. 1 %冰乙酸-0. 05%三乙胺，其中，流动相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸0. 05mL和三 乙胺0. 05mL配置；紫外检测器的检测波长：210nm;流动相流速为0. 6mL/min，柱温20°C，进 样体积为20yL。
[0013] 本发明的有益效果：本发明可准确测定菜籽油中齐墩果酸、熊果酸的含量，方 法操作简单、灵敏度高、重现性好：1、利用超声波辅助提取技术，大大节约了提取时间； 2、流动相中使用三乙胺，改善了目标峰峰型，使峰拖尾情况大大改善；3、三萜分离检测 灵敏度高，稳定性和重现性好，在一定范围内，2种三萜类物质的标准曲线线性关系良好 (r2彡0. 999)，三种物质保留时间相对标准偏差（RSD)均小于0. 06%，2种三萜含量测定相 对标准偏差（RSD)均小于0.4%，因此本发明的检测结果准确。。
【附图说明】
[0014] 图1本发明实施例2齐墩果酸对照品的线性图。
[0015] 图2本发明实施例2熊果酸对照品的线性图。
[0016] 图3本发明实施例2对照品中齐墩果酸、熊果酸的色谱图，a齐墩果酸、b熊果酸。
[0017] 图4本发明实施例2菜籽油中齐墩果酸、熊果酸的色谱图，a齐墩果酸、b熊果酸。
【具体实施方式】
[0018] 实施例1 :高效液相色谱法测定菜籽油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法，包括以下 步骤：
[0019] (1)对照品溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品10. 20mg、熊果酸对照品8. 54mg， 分别置l〇ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得齐墩果酸、熊果酸对照品贮备 液。
[0020] (2)样品溶液的处理：取菜籽油样品约0. 5-1. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精 密加甲醇25ml，密塞，称定重量，60-90°C水浴提取l_2h，超声5-20min，再称定重量，用甲醇 补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
[0021] (3)将滤液过0. 40-0. 50ym微孔滤膜后，在实验色谱条件下进行高效液相色谱 法测定，得测定数值；所述的实验色谱条件为：色谱柱：C18柱，250X4. 6mm，5ym;流动相： 265 %甲醇-35 %水-0. 1 %冰乙酸-0. 05 %三乙胺，其中，流动相由甲醇265mL、水35mL、冰 乙酸0. 05mL和三乙胺0. 05mL配置；紫外检测器的检测波长：210nm;流动相流速为0. 6mL/ min，柱温20°C，进样体积为20yL;
[0022] (4)按照外标法计算菜籽油中齐墩果酸、熊果酸的含量。
[0023]所述的实验色谱条件为：色谱柱：(：18柱，250\4.6111111，5錢；流动相 ：265 %甲 醇-35 %水-0. 1 %冰乙酸-0. 05 %三乙胺，其中，流动相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸 0. 05mL和三乙胺0. 05mL配置；紫外检测器的检测波长：210nm;流动相流速为0. 6mL/min， 柱温20°C，进样体积为20yL。
[0024] 实施例2 :本发明的具体实验数据：
[0025] 1仪器与试剂
[0026] 仪器：1100高效液相色谱仪（包括G1311A泵、G1322脱气机、G1313AZ自动进样 器、G1313A柱温箱、G1315DAD;Agilent1100ChemStation) ;BP221D电子天平（Sartorius 公司）；KQ-250DB数控超声波清洗