器（昆山市超声仪器有限公司）；石英亚沸高纯水提取器 (江苏金城教学仪器厂）。
[0027] 试剂：齐墩果酸、熊果酸对照品（110709-200505、110742-200516,供含量测定用） 由中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯，菜籽油（岳西县光圣茶油有限公司菊盛 牌菜籽油）其他试剂均为分析纯。
[0028] 流动相配制：分别按照265mL甲醇、35mL水、0. 05mL冰乙酸和0. 05mL三乙胺比例 配置流动相。
[0029] 齐墩果酸、熊果酸标准溶液：精密称取齐墩果酸对照品10. 20mg、熊果酸对照品 8. 54mg，分别置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得齐墩果酸、熊果酸对照 品备液。
[0030] 样品溶液的处理：取菜籽油样品约0. 5-1. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加 甲醇25ml，密塞，称定重量，60-90°C水浴提取l_2h，超声5-20min，再称定重量，用甲醇补足 减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，过〇. 45ym微孔滤膜后，在实验设定条件下进行 HPLC测定。
[0031] 2含量测定方法的建立
[0032] 2. 1波长选择
[0033] 齐墩果酸与熊果酸在206nm处有最大吸收，本实验采用DAD检测器，对同一菜籽油 供试液在205、210、215和220nm处进行多波长同时检测，结果显示除205nm有溶剂干扰和 末端吸收外，其它波长处分离均较为理想，但215nm和220nm均较210nm波长处响应强度 低，检测灵敏度低，故本实验采用210nm为检测波长。
[0034] 2. 2流动相的选择
[0035] 对甲醇-水、甲醇-水-磷酸、甲醇-水-冰乙酸、甲醇-乙腈-水、甲醇_水-冰 乙酸-三乙胺等多个流动相系统进行考察，通过配比调整，发现甲醇-水-冰乙酸-三乙胺 (265 : 35 : 0.1 : 0.05)在确定的色谱系统中容易获得满意且稳定的分离结果；流速减 慢利于分离，本实验流速为0. 6ml/min。
[0036] 2. 3定性试验
[0037] 利用相对保留时间法及添加标准物质法定性。对照标准溶液、加标样品溶液和样 品溶液在相同的色谱条件下的色谱图和相对保留时间。实验结果表明，三种溶液中齐墩果 酸、熊果酸的出峰时间是一致的。
[0038] 2. 4标准曲线和相关系数
[0039] 精密量取齐墩果酸对照品贮备液0. 04ml、0. 22ml、0. 42ml、0. 62ml、0. 82ml，熊果酸 对照品贮备液0. 05ml、0. 28ml、0. 52ml、0. 80ml、l. 00ml，分别置5个10ml量瓶中，加甲醇稀 释至刻度，摇匀，即得齐墩果酸和熊果酸混合对照品溶液系列。分别精密吸取各混合对照 品溶液20yl，注入液相色谱仪，按色谱条件下的方法测定。数据见表2、3。以色谱峰面积 (y)为纵坐标，对照品浓度（x，mg/ml)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为齐墩果酸：y =16782. 3x+2. 17(r= 0? 9998);熊果酸：y= 15682.Ox+11. 58(r= 0? 9994)。由表可见， 齐墩果酸进样量在〇. 162~3. 31yg，熊果酸进样量在0. 195~3. 91yg之间呈现良好的线 性关系。线性见图1、2。
[0040] 2. 5对照品、样品的测定及重复性试验
[0041] 取上述经处理的对照品溶液及样品溶液，依照上述的色谱条件，将样品打入高效 液相色谱仪中，其色谱图见附图3、4。
[0042] 进样6次后，根据色谱图，记录实验数据，其进样结果：菜籽油中齐墩果酸、熊果酸 的平均含量分别为：〇. 070%，0. 184% ;RSD分别为1.05%，1. 12%。
[0043] 2. 6稳定性试验
[0044] 取同一菜籽油样品依照上述处理方法，制取样品溶液，分别在0,4,8,12, 24h进样 测定，峰面积的RSD为1. 05 %，结果表明样品溶液中齐墩果酸、熊果酸在24H内含量稳定。
[0045] 实验结果表明：本发明对测定齐墩果酸、熊果酸准确可靠，重现性好，可用于菜籽 油中齐墩果酸、熊果酸含量的测定。
[0046] 表2齐墩果酸对照品标准曲线数据表
[0048] 表3熊果酸对照品标准曲线数据表
[0049]
【主权项】
1. 一种高效液相色谱法测定菜籽油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法，其特征在于包括 以下步骤： (1) 对照品溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品10. 20mg、熊果酸对照品8. 54mg，分 别置IOml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得齐墩果酸、熊果酸对照品贮备液。 (2) 样品溶液的处理：取茶油样品约0. 5-1. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲 醇25ml，密塞，称定重量，浸渍2h，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤 液，即得； (3) 将滤液过0. 40-0. 50ym微孔滤膜后，在实验色谱条件下进行高效液相色谱法测 定，得测定数值；所述的实验色谱条件为：色谱柱：C18柱，250X4. 6mm，5ym;流动相：265% 甲醇-35 %水-0. 1 %冰乙酸-0. 05 %三乙胺，其中，流动相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸 0. 05mL和三乙胺0. 05mL配置；紫外检测器的检测波长：210nm;流动相流速为0. 6mL/min， 柱温20°C，进样体积为20yL; (4) 按照外标法计算茶油中齐墩果酸、熊果酸的含量。
【专利摘要】本发明公开了一种菜籽油中齐墩果酸和熊果酸的含量测定方法，其主要是通过采用反相高效液相色谱法，其色谱条件为：a.色谱柱：C18柱，250×4.6mm，5μm；b.流动相组成：265％甲醇-35％水-0.1％冰乙酸-0.05％三乙胺，其中，流动相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸0.05mL和三乙胺0.05mL配置；c.所用紫外检测器的检测波长：210nm；d.流速：0.6mL/min，进样体积：20μL，柱温：20℃；样品溶液的处理：取菜籽油样品约2.0-3.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25ml，密塞，称定重量，60-90℃水浴提取1-2h，超声5-20min，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。为有效控制其质量，本发明方法灵敏、高效、准确、稳定，可有效控制菜籽油中齐墩果酸和熊果酸的含量。
【IPC分类】G01N30/06, G01N30/88
【公开号】CN104897829
【申请号】CN201510189016
【发明人】查孝柱
【申请人】查孝柱
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年4月6日