二氯甲烷直至硅胶柱完全沉降；当二氯甲烷液面恰好到达硅胶床面时，关闭旋塞。用胶头滴管沿层析柱管壁将己二酸二辛脂粗提物缓慢滴加在硅胶床面上，注意减少对床面的扰动。打开旋塞，使样品慢慢进入顶面，再用ImL 二氯甲烷洗涤上部柱壁，当液面恰好到达硅胶床层顶面时，加入洗脱剂开始洗脱；用二氯甲烷:甲醇8:1 (体积比)进行洗脱，控制洗脱体积，每300mL收集一次洗脱液，收集5次，编号1-5，并对洗脱液进行浓缩、干燥；合并4-5号洗脱液，将4、5号样品液5ul点于GF254高效薄层硅胶板上，以体积比为二氯甲烷:甲醇=3:1为展开剂，在展缸内展开，展距为9cm，展完后晾干展板，用茴香醛染色剂染色，然后置于100°C下烘烤10分钟，进行初步检测；采用气相色谱-质谱检测己二酸二辛脂含量，气相色谱-质谱检测条件:1、气相色谱柱型号:DB-1，长度:30m，内径:0.25mm，膜厚度:0.25μπι，载气:He，流速:lmL/min ;2、进样:进气温度:250°C，模式:分流，分流比:50:1，注射方式:手动；3、升温程序:初始温度50°C，以2°C/min升至60°C，再以30°C/min升至250°C，保持8min ;4、进样量:
0.2 μ L，溶剂:EA ;5、电离方式:电子轰击源(ΕΙ)，四级杆温度150°C，离子源温度200°C ;监测方式:全扫面(40-400amu单位)；选择离子扫描模式(SM);电离能量:70eV ;溶剂延迟:2.06mino
[0056]按照以上检测方法进行检测，得检测图，如图1和2。经检测和计算得南极磷虾中己二酸二辛酯含量为0.061mg/go
[0057]实施例2
[0058]取干燥的南极磷虾2g，置于200mL、直径为6cm的烧杯中，加入质量分数为95%乙醇15mL，在室温、350w、20kHz超声提取，提取15分钟，过滤提取液，将滤液置于旋蒸仪中20°C蒸干，得到己二酸二辛酯的粗提物。
[0059]取65g、200_300目硅胶在110°C下活化8小时，冷却至室温；加入2倍体积二氯甲烷搅拌，使硅胶悬浮成糊状匀浆；将层析柱旋塞打开，将硅胶-二氯甲烷混合物沿玻璃棒缓缓地倒入层析柱中，用洗耳球轻轻敲击层析柱管壁驱赶气泡，边敲击边滴加二氯甲烷直至硅胶柱完全沉降；当二氯甲烷液面恰好到达硅胶床面时，关闭旋塞。用胶头滴管沿层析柱管壁将己二酸二辛脂粗提物缓慢滴加在硅胶床面上，注意减少对床面的扰动。打开旋塞，使样品慢慢进入顶面，再用ImL 二氯甲烷洗涤上部柱壁，当液面恰好到达硅胶床层顶面时，加入洗脱剂开始洗脱；用二氯甲烷:甲醇8:1 (体积比)进行洗脱，控制洗脱体积，每300mL收集一次洗脱液，收集5次，编号1-5，并对洗脱液进行浓缩、干燥；合并4-5号洗脱液，将4、5号样品液5ul点于GF254高效薄层硅胶板上，以体积比为二氯甲烷:甲醇=4:1为展开剂，在展缸内展开，展距为9cm，展完后晾干展板，用茴香醛染色剂染色，然后置于105°C下烘烤6分钟，进行初步检测；按照实施例1中的气相色谱-质谱检测方法进行检测，得检测图，如图3和4。经检测和计算得南极磷虾中己二酸二辛酯含量为0.06mg/go
[0060]实施例3
[0061]取干南极磷虾2g，置于200mL、直径为6cm的烧杯中，加入质量分数为95%乙醇20mL，在室温、350w、28kHz超声提取，提取15分钟，过滤提取液，将滤液置于旋蒸仪中20°C
蒸干，得到己二酸二辛酯的粗提物。
[0062]取70g、200_300目硅胶在105°C下活化10小时，冷却至室温；加入2倍体积二氯甲烷搅拌，使硅胶悬浮成糊状匀浆；将层析柱旋塞打开，将硅胶-二氯甲烷混合物沿玻璃棒缓缓地倒入层析柱中，用洗耳球轻轻敲击层析柱管壁驱赶气泡，边敲击边滴加二氯甲烷直至硅胶柱完全沉降；当二氯甲烷液面恰好到达硅胶床面时，关闭旋塞。用胶头滴管沿层析柱管壁将己二酸二辛脂粗提物缓慢滴加在硅胶床面上，注意减少对床面的扰动。打开旋塞，使样品慢慢进入顶面，再用ImL 二氯甲烷洗涤上部柱壁，当液面恰好到达硅胶床层顶面时，加入洗脱剂开始洗脱；用二氯甲烷:甲醇8:1 (体积比)进行洗脱，控制洗脱体积，每300mL收集一次洗脱液，收集5次，编号1-5，并对洗脱液进行浓缩、干燥；合并4-5号洗脱液，将4、5号样品液5ul点于GF254高效薄层硅胶板上，以体积比为二氯甲烷:甲醇=4:1为展开剂，在展缸内展开，展距为9cm，展完后晾干展板，用茴香醛染色剂染色，然后置于105°C下烘烤8分钟，进行初步检测；按照实施例1中的气相色谱-质谱检测方法进行检测，得检测图，如图5和6。经检测和计算得南极磷虾中己二酸二辛酯含量为0.061mg/go
[0063]上述虽然结合附图对本发明的【具体实施方式】进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。
【主权项】
1.一种从南极磷虾中提取己二酸二辛酯的方法，其特征是，包括以下步骤: (1)以南极磷虾为原料，采用乙醇为溶剂，在20?40°C、300?400W、20?40Hz的条件下超声提取，过滤提取液，得滤液； (2)将滤液蒸干，得到己二酸二辛酯的粗提物； (3)利用柱层析对己二酸二辛脂的粗提物进行精制； ①制备硅胶层析柱将己二酸二辛脂的粗提物加入到硅胶床上； ③洗脱:洗脱剂为二氯甲烷和甲醇的混合溶液，控制洗脱体积，收集900?1500mL的洗脱液，并对洗脱液进行浓缩、干燥，得到己二酸二辛脂。2.如权利要求1所述的方法，其特征是:步骤(I)中，南极磷虾与乙醇的添加量比例为:Ig: (5 ?10)mLo3.如权利要求1所述的方法，其特征是:步骤(2)中，在20°C条件下将滤液蒸干，得到己二酸二辛酯的粗提物。4.如权利要求1所述的方法，其特征是:步骤(3)中，所述二氯甲烷和甲醇体积比为8:1。5.一种从南极磷虾中检测己二酸二辛酯的方法，其特征是，包括以下步骤: (1)以南极磷虾为原料，采用乙醇为溶剂，在20?40°C、300?400W、20?40Hz条件下超声提取，过滤提取液，得滤液； (2)将滤液蒸干，得到己二酸二辛酯的粗提物； (3)利用柱层析对己二酸二辛脂的粗提物进行精制； ①制备硅胶层析柱将己二酸二辛脂的粗提物加入到硅胶床上； ③洗脱:洗脱剂为二氯甲烷和甲醇的混合溶液，控制洗脱体积，分段收集洗脱液，收集若干次，并对洗脱液进行浓缩、干燥，得到若干份样品液； (4)初步检测己二酸二辛脂: 取若干份样品液进行TLC初步检测，将若干份样品液点于高效薄层硅胶板上，以体积比为二氯甲烷:甲醇=3?4:1为展开剂，在展缸内展开，展距为8?10cm，展完后晾干展板，用茴香醛染色剂染色，然后置于100-105Γ下烘烤6-10分钟，根据颜色，选择颜色变化为蓝紫色的样品液，即为己二酸二辛脂。6.如权利要求5所述的方法，其特征是:步骤(3)中，控制洗脱体积，每250?300mL收集一次洗脱液，收集若干次，收集次数大于5次，并对洗脱液进行浓缩、干燥，得到若干份样品液。7.如权利要求6所述的方法，其特征是:控制洗脱体积，每300mL收集一次洗脱液，收集5次，并对洗脱液进行浓缩、干燥，得到5份样品液。8.如权利要求5所述的方法，其特征是:所述高效薄层硅胶板的型号为GF254。9.如权利要求5所述的方法，其特征是:还包括采用气相色谱-质谱进一步检测己二酸二辛脂，气相色谱-质谱检测条件: ①气相色谱柱型号:DB-1，长度:30m，内径:0.25mm，膜厚度:0.25 μ m，载气:He，流速:1mT,/mi η ； ②进样:进气温度:250°C，模式:分流，分流比:50:1，注射方式:手动； ③升温程序:初始温度50°C，以2°C/min升至60°C，再以30°C /min升至250°C，保持8min ； ④进样量:0.2 μ L，溶剂:EA; ⑤电离方式:电子轰击源，四级杆温度150°C，离子源温度200°C;监测方式:全扫面，40-400amu单位；选择离子扫描模式；电离能量:70eV ;溶剂延迟:2.06min ； 得到样品质谱图，确定颜色变化为蓝紫色的样品液为己二酸二辛酯，并计算己二酸二辛酯的含量。
【专利摘要】本发明公开了一种从南极磷虾中提取及检测己二酸二辛酯的方法，(1)以南极磷虾为原料，采用乙醇为溶剂，进行超声提取，过滤提取液，得滤液；(2)将滤液蒸干，得到己二酸二辛酯的粗提物；(3)利用柱层析对己二酸二辛酯的粗提物进行精制；(4)进行初步检测得到己二酸二辛酯样品；(5)利用气相色谱-质谱检测己二酸二辛酯含量。本发明的方法操作简单、准确和可靠，为南极磷虾提取及检测己二酸二辛酯提供了完整思路。本发明从南极磷虾中提取及检测己二酸二辛酯，进一步开发了南极磷虾的利用价值，同时也为清洁的可再生能源提供方向。
【IPC分类】G01N30/06, G01N30/88, G01N30/90
【公开号】CN105067735
【申请号】CN201510439198
【发明人】马善利, 刘代成
【申请人】山东师范大学
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2015年7月23日