一种从南极磷虾中提取及检测己二酸二辛酯的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种从南极磷虾中提取及检测己二酸二辛酯的方法。
【背景技术】
[0002]己二酸二辛酯(DOA)是一种聚氯乙烯的耐寒性增塑剂，其良好的耐寒功能使得南极磷虾可以适应南极寒冷的气候；D0A具有一定的耐热、耐光和耐水性，尤其它的毒性很低，对皮肤和眼睛的刺激小，可用于制造冷冻食品的包装薄膜、耐寒农用薄膜；此外DOA常用于塑料和橡胶制品加工和合成树脂的增塑剂，是重要的化工中间体。
[0003]目前，通常己二酸二辛酸是由化学合成方法进行合成制得，比如由己二酸和正辛醇在酸催化下直接酯化制得，目前多以浓硫酸和对甲苯磺酸为催化剂，这些化学方法合成己二酸二辛酸方法普遍存在以下缺陷:产品质量差、对设备腐蚀严重、副反应多、后处理复杂、对环境污染严重(产生各种废水、废渣)等问题。
[0004]因此，针对以上问题亟需探索一种清洁提取己二酸二辛酯的方法。
[0005]南极磷4下(学名Euphausia superba),是一种生活在南极洲水域的磷好，体形似小好，它们以微小的浮游植物作为食物，身长大约6厘米，重约2克，最长寿命可达6年。南极磷虾是海洋哺乳动物、鸟类和鱼类等南极生物主要的食物来源，是南极生态系统的关键物种。南极磷虾含有丰富的蛋白质；磷虾脂类所含的脂肪酸种类多，且多为不饱和脂肪酸；南极磷虾还含有丰富的矿物质元素，包括钙、磷、铁、锌、砸等。除此之外，磷虾还含有多种活性物质，如酶类、虾青素等。据统计，生活在南冰洋的南极洲水域的磷虾的数量可以达到2 X 19吨，可能的捕获量估计在5 X 10 6到7 X 10 6吨。南极磷虾的寿命一般为5_7年，2龄以后即成熟，体长最大可达到60nm以上。南极磷虾有结群的习性，经常在200m左右的浅水层形成密集的群体。由于南极磷虾具有生物量大、分布广等特点，越来越多的研究者开始关注磷虾的开发利用价值。
[0006]目前并没有从南极磷虾中提取己二酸二辛酯的相关报道，更没有从南极磷虾中提取及检测己二酸二辛酯的方法。
【发明内容】
[0007]本发明的目的是提供一种操作简单、准确、可靠的南极磷虾己二酸二辛酯的提取及检测方法。
[0008]本发明是通过以下技术方案实现的:
[0009].一种从南极磷虾中提取己二酸二辛酯的方法，包括以下步骤:
[0010](I)以南极磷虾为原料，采用乙醇为溶剂，在20?40°C、300?400W、20?40Hz的条件下超声提取，过滤提取液，得滤液；
[0011](2)将滤液蒸干，得到己二酸二辛酯的粗提物；
[0012](3)利用柱层析对己二酸二辛脂的粗提物进行精制；
[0013]①制备硅胶层析柱；
[0014]②将己二酸二辛脂的粗提物加入到硅胶床上；
[0015]③洗脱:洗脱剂为二氯甲烷和甲醇的混合溶液，控制洗脱体积，收集900?1500mL的洗脱液，并对洗脱液进行浓缩、干燥，得到己二酸二辛脂。
[0016]一种从南极磷虾中检测己二酸二辛酯的方法，包括以下步骤:
[0017](I)以南极磷虾为原料，采用乙醇为溶剂，在20?40°C、300?400W、20?40Hz条件下超声提取，过滤提取液，得滤液；
[0018](2)将滤液蒸干，得到己二酸二辛酯的粗提物；
[0019](3)利用柱层析对己二酸二辛脂的粗提物进行精制；
[0020]①制备硅胶层析柱；
[0021]②将己二酸二辛脂的粗提物加入到硅胶床上；
[0022]③洗脱:洗脱剂为二氯甲烷和甲醇的混合溶液，控制洗脱体积，分段收集洗脱液，收集若干次，并对洗脱液进行浓缩、干燥，得到若干份样品液；
[0023](4)初步检测己二酸二辛脂:
[0024]取若干份样品液进行TLC初步检测，将若干份样品液点于高效薄层硅胶板上，以体积比为二氯甲烷:甲醇=3?4:1为展开剂，在展缸内展开，展距为8?1cm(优选为9cm)，展完后晾干展板，用茴香醛染色剂染色，然后置于100-105Γ下烘烤6_10分钟，根据颜色，选择颜色变化为蓝紫色的样品液，即为己二酸二辛脂；
[0025](5)采用气相色谱-质谱检进一步检测己二酸二辛脂:
[0026]气相色谱-质谱检测条件:
[0027]①气相色谱柱型号:DB-1，长度:30m，内径:0.25mm，膜厚度:0.25 μ m，载气:He，流速:1mT,/mi η ；
[0028]②进样:进气温度:250°C，模式:分流，分流比:50:1，注射方式:手动；
[0029]③升温程序:初始温度50°C，以2°C /min升至60°C，再以30°C /min升至250°C，保持8min ；
[0030]④进样量:0.2 μ L，溶剂:ΕΑ ；
[0031]⑤电离方式:电子轰击源(ΕΙ)，四级杆温度150°C，离子源温度200°C ;监测方式:全扫面(40-400amu单位)；选择离子扫描模式(SM);电离能量:70eV ;溶剂延迟:2.06min ；
[0032]得到样品质谱图，确定蓝紫色的样品液为己二酸二辛酯，并计算己二酸二辛酯的含量。
[0033]步骤(I)中，所述南极磷虾含水量为7?8%，南极磷虾与乙醇的添加量比例为:Ig: (5?10)mL。经过大量的实验证明，当南极磷4下与乙醇的质量体积比为Ig: (5?10)mL时，己二酸二辛酯样品的提取效果最好。
[0034]步骤(I)中，所述乙醇是质量分数为95%的乙醇溶液。
[0035]步骤(2)中，具体的操作步骤为:将步骤(I)中的滤液置于旋蒸仪中，为了防止己二酸二辛脂水解，在20°C条件下蒸干，得到己二酸二辛酯的粗提物。
[0036]步骤(3)①中，制备硅胶层析柱的具体方法是:
[0037]取60_70g、200-300目硅胶在100_110°C下活化8-10小时，冷却到室温；加入2-3
倍体积二氯甲烷搅拌，使硅胶悬浮成糊状匀浆；将层析柱旋塞打开，将硅胶-二氯甲烷混合物沿玻璃棒缓缓地倒入层析柱中，用洗耳球轻轻敲击层析柱管壁驱赶气泡，边敲击边滴加二氯甲烷直至硅胶柱完全沉降；当二氯甲烷液面恰好到达硅胶床面时，关闭旋塞。
[0038]步骤(3)②中，具体方法是:用胶头滴管沿层析柱管壁将己二酸二辛脂粗提物缓慢滴加在硅胶床面上，注意减少对床面的扰动。打开旋塞，使样品慢慢进入顶面，再用l_2mL二氯甲烷洗涤上部柱壁。
[0039]步骤(3)③中，所述二氯甲烷和甲醇体积比为8:1。采用此比例的洗脱剂洗脱效率高，洗脱时间短。
[0040]控制洗脱体积，每250?300mL收集一次洗脱液，收集若干次，收集次数大于5次，并对洗脱液进行浓缩、干燥，得到若干份样品液。采用此种方法，使洗脱液的收集和后续的检测效率都得到提尚。
[0041]一种较佳的洗脱方法是:当样品液面恰好到达硅胶床层顶面时，加入洗脱剂开始洗脱；用体积比为二氯甲烷:甲醇=8:1的洗脱液进行洗脱，控制洗脱体积，每300mL收集一次洗脱液，收集5次，编号1-5，并对洗脱液进行浓缩、干燥。
[0042]步骤(4)中，所述高效薄层硅胶板的型号为GF254，对不同型号的高效薄层硅胶板进行考察，得到型号为GF254的高效薄层硅胶板分离效果最好。
[0043]本发明的有益效果是:
[0044]本发明的方法操作简单、准确、可靠和环保，为南极磷虾提取及检测己二酸二辛脂提供了完整方法。
[0045]本发明从南极磷虾中提取及检测己二酸二辛脂，进一步开发了南极磷虾的利用价值，同时也为清洁的可再生能源利用提供方向。
【附图说明】
[0046]图1:A为实施例1中样品的气相色谱保留时间图像为实施例1中标准品的气相色谱保留时间图像。
[0047]图2:A为实施例1中样品的质谱图为实施例1中标准品的质谱图。
[0048]图3:A为实施例2中样品的气相色谱保留时间图像为实施例2中标准品的气相色谱保留时间图像。
[0049]图4:A为实施例2中样品的质谱图为实施例2中标准品的质谱图。
[0050]图5:A为实施例3中样品的气相色谱保留时间图像为实施例3中标准品的气相色谱保留时间图像。
[0051]图6:A为实施例3中样品的质谱图为实施例3中标准品的质谱图。
【具体实施方式】
[0052]下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。
[0053]实施例1
[0054]取干燥南极磷虾2g，置于200mL、直径为6cm的烧杯中，加入质量分数为95%乙醇10mL，在室温、350w、40kHz超声提取，提取10分钟，过滤提取液，将滤液置于旋蒸仪中20°C
蒸干，得到己二酸二辛酯的粗提物。
[0055]取60g、200-300目硅胶在100°C下活化10小时，冷却至室温；加入2倍体积二氯甲烷搅拌，使硅胶悬浮成糊状匀浆；将层析柱旋塞打开，将硅胶-二氯甲烷混合物沿玻璃棒缓缓地倒入层析柱中，用洗耳球轻轻敲击层析柱管壁驱赶气泡，边敲击边滴加