测定牛乳中κ-酪蛋白含量的方法_4

文档序号:9415746阅读:来源:国知局
泳检测条件为:检测波长为200nm,检测温度为25°C,进样方式为压力进样,压力为 0. 5psi,进样时间为15s,工作电压为30kv ;检测频率为5Hz。
[0088] 实施例2
[0089] 在该实施例中,通过下列步骤测定生牛乳中κ -酪蛋白含量:
[0090] (1)生牛乳预处理
[0091] 取30ml待测生牛乳,置于50ml离心管中,于3000r/min条件下,离心30分钟,除去 乳脂肪;然后置于-40°C冰箱中冷冻20分钟后;取出恢复至室温状态,用40mmol/L乙酸水 溶液调节pH至4. 6,于3000r/min条件下离心30分钟,弃上清液,用水洗涤3次,于3000r/ min条件下离心30分钟,弃上清液,然后用40mmol/L硼酸溶液调节pH至6. 6,制得待测储 备液。取IOml待测储备液,添加3. 6g尿素和0. 05g二硫苏糖醇(DTT),振荡混匀制得待测 液。
[0092] (2)未涂层毛细管的活化
[0093] 截取内径为50 μ m,总长度为800mm,有效长度为700mm的未涂层石英毛细管柱,用 甲醇(色谱级)冲洗lOmin,去离子水冲洗lOmin,Imol/LNaOH冲洗lOmin,静置lOmin,去离 子水冲洗IOmin。
[0094] (3)涂层处理
[0095] 1)涂层处理试剂的配制:用去离子水准确配制100mL涂层处理试剂,其中各成分 及其浓度包括:三羟甲基氨基甲烷200mmol/L,戊二胺60mmol/L,十六烷基溴化铵120mmol/ L,聚乙二醇 80mmol/L,用 0· lmol/L NaOH 调节 pH 值至 8. 5 ;
[0096] 2)缓冲溶液的配制:用去离子水准确配制IOOrnl缓冲溶液,其中各成分及其浓度 包括:硼酸50mmol/L,尿素6mol/L,戊二胺60mmol/L,十六烷基溴化铵120mmol/L,轻丙基甲 基纤维素0. 05质量体积%,乙二胺四乙酸二钠80mmol/L,用0.1mol/LNaOH调节pH至8. 5 ;
[0097] 3)涂层的形成:用浓度为0. lmol/L的NaOH冲洗活化后的毛细管内壁5分钟,并 用去离子水冲洗5分钟,接着用涂层处理试剂冲洗5分钟,静置5分钟,再用缓冲溶液冲洗 5分钟,如此循环3次。
[0098] (4)毛细管电泳检测
[0099] 进行毛细管电泳检测,并基于检测结果确定生牛乳中K-酪蛋白含量。其中,毛 细管电泳检测条件为:检测波长为200nm,检测温度为25°C,进样方式为压力进样,压力为 0. 5psi,进样时间为15s,工作电压为30kv ;检测频率为5Hz。
[0100] 实施例3
[0101] 在该实施例中,通过下列步骤测定生牛乳中K-酪蛋白含量:
[0102] (1)生牛乳预处理
[0103] 取30ml待测生牛乳,置于50ml离心管中,于lOOOOr/min条件下,离心10分钟, 除去乳脂肪;然后置于-40°C冰箱中冷冻10分钟后;取出恢复至室温状态,用40mmol/L乙 酸水溶液调节pH至4. 6,于3000r/min条件下离心30分钟,弃上清液,用水洗涤3次,于 10000r/min条件下离心10分钟,弃上清液,然后用40mmol/L硼酸溶液调节pH至6. 6,制得 待测储备液。取IOml待测储备液,添加3. 6g尿素和0. 05g二硫苏糖醇(DTT),振荡混匀制 得待测液。
[0104] (2)未涂层毛细管的活化
[0105] 截取内径为50 μ m,总长度为700mm,有效长度为600mm的未涂层石英毛细管柱,用 甲醇(色谱级)冲洗l〇min,去离子水冲洗10min,Imol/LNaOH冲洗10min,静置10min,去离 子水冲洗IOmin。
[0106] (3)涂层处理
[0107] 1)涂层处理试剂的配制:用去离子水准确配制100mL涂层处理试剂,其中各成分 及其浓度包括:三羟甲基氨基甲烷200mmol/L,戊二胺60mmol/L,十六烷基溴化铵120mmol/ L,聚乙二醇 80mmol/L,用 0· lmol/L NaOH 调节 pH 值至 8. 5 ;
[0108] 2)缓冲溶液的配制:用去离子水准确配制100mL缓冲溶液,其中各成分及其浓度 包括:硼酸50mmol/L,尿素6mol/L,戊二胺60mmol/L,十六烷基溴化铵120mmol/L,轻丙基 甲基纤维素〇. 05质量体积%,乙二胺四乙酸二钠80mmol/L,用0. lmol/L NaOH调节pH至 8. 5 ;
[0109] 3)涂层的形成:用浓度为0. lmol/L的NaOH冲洗活化后的毛细管内壁5分钟,并 用去离子水冲洗5分钟,接着用涂层处理试剂冲洗5分钟,静置5分钟,再用缓冲溶液冲洗 5分钟,如此循环3次。
[0110] (4)毛细管电泳检测
[0111] 进行毛细管电泳检测,并基于检测结果确定生牛乳中K-酪蛋白含量。其中,毛 细管电泳检测条件为:检测波长为200nm,检测温度为30°C,进样方式为压力进样,压力为 0. 5psi,进样时间为15s,工作电压为25kv ;检测频率为5Hz。
[0112] 实施例4
[0113] 在该实施例中,通过下列步骤测定超高温灭菌牛乳中K-酪蛋白含量:
[0114] (1)超高温灭菌牛乳预处理
[0115] 取30ml待测超高温灭菌牛乳,置于50ml离心管中,用40mmol/L乙酸水溶液调节 pH至4. 6,于8000r/min条件下离心30分钟,弃上清液,用水洗涤3次,于8000r/min条件 下离心30分钟,弃上清液,然后用40mmol/L硼酸溶液调节pH至6. 6,制得待测储备液。取 IOml待测储备液,添加3. 6g尿素和0. 05g二硫苏糖醇(DTT),振荡混匀制得待测液。
[0116] (2)未涂层毛细管的活化
[0117] 截取内径为75 μ m,总长度为600mm,有效长度为500mm的未涂层石英毛细管柱,用 甲醇(色谱级)冲洗lOmin,去离子水冲洗lOmin,Imol/LNaOH冲洗lOmin,静置lOmin,去离 子水冲洗IOmin。
[0118] (3)涂层处理
[0119] 按照实施例1的涂层处理步骤进行处理。
[0120] (4)毛细管电泳检测
[0121] 进行毛细管电泳检测,并基于检测结果确定超高温灭菌牛乳中K-酪蛋白含量。 其中,毛细管电泳检测条件为:检测波长为200nm,检测温度为25°C,进样方式为压力进样, 压力为〇. 5psi,进样时间为10s,工作电压为15kv ;检测频率为5Hz。
[0122] 实施例5
[0123] 在该实施例中,通过下列步骤测定巴氏杀菌牛乳中K-酪蛋白含量:
[0124] (1)巴氏杀菌牛乳预处理
[0125] 取30ml待测超高温灭菌牛乳,置于50ml离心管中,用40mmol/L乙酸水溶液调节 pH至4. 6,于6000r/min条件下离心25分钟,弃上清液,用水洗涤3次,于6000r/min条件 下离心25分钟,弃上清液,然后用40mmol/L硼酸溶液调节pH至6. 6,制得待测储备液。取 IOml待测储备液,添加3. 6g尿素,0. 05g二硫苏糖醇(DTT)、振荡、混匀制得待测液。
[0126] (2)未涂层毛细管的活化
[0127] 截取内径为25 μ m,总长度为700mm,有效长度为600mm的未涂层石英毛细管柱,用 甲醇(色谱级)冲洗lOmin,去离子水冲洗lOmin,Imol/LNaOH冲洗lOmin,静置lOmin,去离 子水冲洗IOmin。
[0128] (3)涂层处理
[0129] 按照实施例1的涂层处理步骤进行处理。
[0130] (4)毛细管电泳检测
[0131] 进行毛细管电泳检测,并基于检测结果确定巴氏杀菌牛乳中K-酪蛋白含量。其 中,毛细管电泳检测条件为:检测波长为200nm,检测温度为20°C,进样方式为压力进样,压 力为Ipsi,进样时间为5s,工作电压为20kv ;检测频率为IOHz。
[0132] 实施例6
[0133] 按照实施例1测定生牛乳中K-酪蛋白含量的方法对生牛乳中K-酪蛋白含量进 行测定,区别在于,
[0134] (4)毛细管电泳检测
[0135] 进行毛细管电泳检测,并基于检测结果确定生牛乳中K-酪蛋白含量。其中,毛 细管电泳检测条件为:检测波长为200nm,检测温度为25°C,进样方式为压力进样,压力为 0. 5psi,进样时间为15s,工作电压为30kv ;检测频率为5Hz。
[0136] 对比例1
[0137] 按照实施例1的方法测定生牛乳中κ -酪蛋白含量,区别在于,直接采用未涂层毛 细管进行毛细管电泳检测。
[0138] 对比例2
[0139] 按照实施例1的方法测定生牛乳中κ-酪蛋白含量,区别在于,在步骤(4)中,工 作电压为5kV。
[0140] 对比例3
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