检测T线和C线区域的富集的巧光强度，反映样本中待测物的含 量。
[0027] 本发明所述巧光免疫层析检测试纸具有增强巧光颗粒微球与包被抗体的结合的 效率，提高巧光值，提高精密度，节省材料，简化工艺并弥补了常规试条在检测中的缺陷的 优点。
[0028] 本发明将原本巧光微球分别与抗体1和生物素偶联标记物的混合物喷在玻璃纤 维膜上的方式改为将巧光微球分别与抗体1和生物素偶联标记物的混合物用划膜喷金仪 包被在承载膜预处理过的位置上。
[0029] 本发明的巧光免疫层析检测试纸避免了生产上的W下缺点：
[0030] 1，包被上去的巧光微球分别与抗体1和生物素偶联标记物的混合物比较均匀，包 被工艺简便，损耗量少。
[0031] 2,在包被巧光微球分别与抗体1和生物素偶联标记物的混合物前，先包被宽度为 该结合物划的宽度的2倍的预处理液，该预处理液能起到封闭抗体承载膜的微孔，平滑膜 面，形成保护膜。待烘干后，再在预处理的区域划上巧光微球分别与抗体1和生物素偶联标 记物的混合物，避免了结合物勾在承载膜里造成损失结合物，使得在层析过程直接从预处 理膜面全部释放。损失量降低到最低，因此本发明克服了因结合物在玻纤上滞留过多，释放 量不足导致的结果不准确的问题，使检测的巧光值拉高，提高灵敏度或检测上限。
[0032] 3,在生产上，将巧光微球分别与抗体1和生物素偶联标记物的混合物包被在抗体 承载膜上，可同时将标记物的混合物结合线、T线、C线包被上，省时省工艺。提高生产效率。
【附图说明】
[0033] 图1是本发明巧光免疫层析检测试纸的水平剖面图。
[0034] 图2是本发明巧光免疫层析检测试纸的俯视平面图。
【具体实施方式】
[0035]下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终 相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附 图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例 中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明 书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可w通过市购获得的常规产品。
[0036] W下实施例结合图1和图2的结构。
[0037] 实施例1:巧光免疫层析检测试纸的制备
[0038]-种巧光免疫层析检测试纸，由样品垫（1)、抗体承载膜（2)、吸水纸（3)依次通过 带有粘合剂的底板（4)依次互相搭接而成，其中所述样品垫（1)是玻璃纤维素膜；带有粘合 剂的底板（4)是带粘合剂的衬板（PVC板）。
[0039] 制备方法如下步骤：
[0040] 预处理液制备：配制PH为7. 4的0. 01MPBS溶液，备用。取部分配好的PBS加入 20质量体积％薦糖，加入2质量体积比％BSA和0. 02质量体积％胞吨，充分混匀后，2-8°C 备用。
[0041] 标记物的混合物的制备：选用巧光微球的氨基和葡聚糖的醒基偶联后，按质量比 1:1加入抗体1混合，葡聚糖上其他醒基可与抗体1上的氨基偶联，形成巧光微球与抗体 1偶联标记物的混合物；优选的，选用巧光微球和抗体1按质量比1:1混合，形成巧光微球 与抗体1偶联标记物的混合物；W同样方法，用巧光微球的氨基和葡聚糖的醒基偶联后，按 质量比1:1加入生物素混合，葡聚糖上其他醒基可与生物素上的氨基偶联，形成巧光微球 和生物素偶联的标记物；将两者标记物体积比1:1混合，并用含1质量比％BSA的抑7. 4， 0.0謹？85 500倍稀释混合物。1'线包被液的配制：用抑7.4,0.011?85稀释液将鼠抗检测 项目的单克隆抗体稀释至工作浓度化5-5mg/ml据实际实验调整），2-8°C备用。
[0042] C线包被液的配制：用抑7.4,0.011PBS稀释液将亲和素稀释至工作浓度 (0. 5-5mg/ml据实际实验调整），2-8°C备用。
[0043] 抗体承载膜（2)的预处理：选用市售的硝酸纤维膜即NC膜作为抗体承载膜，在靠 近将要贴玻璃纤维膜的一端用划膜喷金仪包被上宽度约2mm的上述制备好的预处理液，该 宽度约2mm的区域称为预处理区域。45°C化烘干。
[0044] 包被线：将上述预处理后的NC膜通过划膜喷金仪将巧光微球分别与抗体1和生物 素偶联标记物的混合物、T线包被液、C线包被液同时包被上去，形成标记物的混合物结合 线、T线、C线，所述3条线，线宽均为1mm。标记物的混合物结合线巧）与T线（检测线6) 距离约10mm，标记物的混合物结合线妨与C线（质控线7)距离约15mm。之后将该包被 后的NC膜于45°C化烘干。所述标记物的混合物结合线（5)位于预处理区域的居中位置；
[0045] 组装成检测卡：按照图1所示将玻璃纤维膜和烘干的包被后的NC膜、吸水纸依次 粘贴组装，组装完成后用切条机切成每条宽度为4mm的试条，装进试条卡，压卡，制备成检 测卡。干燥环境下避光备用。
[0046] 检测方法：取出检测卡，加样后，样品中的待检物层析到结合线，待检物与所述巧 光免疫层析检测试纸的结合线上的抗体1标记物特异性反应后形成复合物，层析至T线，形 成双抗夹屯、或竞争，结合线上的生物素标记物层析至C线与亲和素形成特异性反应，利用 巧光定量检测系统检测T线和C线区域的富集的巧光强度。
[0047] 拟合标准曲线：用国家或国际标准品用0. 01MpH7. 4的PBS稀释到所需的线性浓 度，用巧光免疫层析检测试纸测试各浓度相应的巧光强度值，标准品浓度和巧光强度值比 值拟合得到相关趋势线。
[0048] 样本检测及结果：按上述检测方法检测，所得巧光强度值带入拟合曲线中，即可得 到相应的样本浓度值。
[0049] 对比试纸的制备
[0050] 巧光微球分别与抗体1和生物素偶联标记物的混合物是喷在玻璃纤维膜上，其他 均同实施例1，不再详细说明。
[005。 实施例2:效果验证
[0052] 标准曲线拟合：取所购买的孕酬标准品用0. 01MpH7. 4PBS稀释成线性浓度，并用 孕酬检测试纸测试对应的巧光强度。
[0053] 表1对照组和本发明实验组定量检测标准曲线数据表
[0054]
[0055] 注：对照组为实施例对比试纸；本发明实验组为本发明实施例所得的巧光免疫层 析检测试纸。
[0056] 用浓度和T/C拟合出趋势线对照组y= -0. 131n(X)+0. 638,r2= 0. 994 > 0. 9801 相关性符合标准；本发明实验组y= -0. 151n(X)+0. 747,R2= 0. 997 > 0. 9801相关性符合 标准。
[0057] 样本：孕酬浓度值分别为50ng/ml、25ng/ml、5ng/ml和Ong/ml的4份不同血清作 为样本；
[0058] 制备孕酬检测试剂盒，与实施例1巧光免疫层析检测试纸的制备方法一致，其T线 包被物为孕酬抗原。
[0059] 方法：每个浓度分别利用试剂盒测试10次，检测得出巧光值及测试浓度，并求出 变异系数做对比。检测结果如表1-4所示。其中实验组为采用实施例1所得巧光免疫层析 检测试纸。对照组为采用对比试纸的制备得到的对比试纸。
[0060] 表2Ong/ml时对照组与实验组的结果对比表
[0061]
[0064]
[0069]
[0070] W上所述CV计算：测定10个结果的平均浓度（Mean,采）、标准差（SD)，变异系数