液和10 μ g抗cTnl单抗(与HRP标记所用的抗体不同)溶液，混合均匀并于室温下反应4小时，加入Img甘氨酸封闭。以磁铁富集，去除未反应的抗cTnl单抗，得到磁颗粒标记cTnl抗体。Myo和CK-MB标记方法与此相同。
[0059]3.微流控芯片的组装
[0060]将HRP标记的cTn1、Myo、CK-MB抗体溶液按1: 4.5: 2的摩尔比例混合均匀放入盖片的第一生物标记物存储池(4)中，密封。将磁颗粒标记抗体溶液放入底片反应室(13)中，室温干燥30分钟以上。将发光基底液和清洗液分别注入清洗液存储池(16)和发光液存储池(17)中，密封。按图3所示，用胶带将盖片和底片组装形成一个完整的微流控芯片，装入铝箔袋中，密封，于4 °C保存。
[0061]4.检测
[0062]I)用正常人血清作稀释液，将肌钙蛋白I标准品配制系列浓度如下:0ng/mL、0.05ng/mL、0.5ng/mL、5ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL ；
[0063]用正常人血清作稀释液，将肌红蛋白标准品配制系列浓度如下:O、2.0ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、250ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、1500ng/mL、2000ng/mL、2500ng/mL ；
[0064]用正常人血清作稀释液，将肌酸激酶同工酶标准品配制系列浓度如下:0ng/mL、0.25ng/mL、0.5ng/mL、lng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、500ng/mL、1000ng/mLo
[0065]将50 μ I样本滴入加样孔，盖上血液盖。将微流控芯片放入配套仪器中，仪器将对微流控芯片施加一系列操作，检测15分钟后仪器将会显示待测物浓度，每个样本分别测定3次，取平均值，绘制标准曲线。分别滴加不同分析物的标准品，即可获得各分析所物对应的标准曲线。
[0066]将50 μ I全血样本摘入加样孔，15分钟内仪器检测系统检测化学发光信号，依据所获得标准曲线得到样本中cTnl，Myo，CK-MB三种物质的各自浓度。
[0067]2)结果表明，肌钙蛋白I最低检测限可达到0.05ng/ml，肌红蛋白最低检测限为lng/ml，肌酸激酶同工酶的最低检测限为0.2ng/ml，在定量检测范围内，相关系数R2>
0.99，未出现Η00Κ效应，与各标志物单项检测结果相比偏差小于4.2%，且批内与批间重复性较好。
[0068]实施例2.肌钙蛋白I (cTnl)、肌红蛋白(Myo)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)联合检测方法二
[0069]采用本发明所述的方法进行心梗三项，即肌钙蛋白I (cTnl)、肌红蛋白(Myo)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)的同时检测。肌钙蛋白I(cTnl)、肌红蛋白(Myo)和肌酸激酶同工酶(CK-MB) ο要完成该项目测试，具体通过以下步骤:
[0070]1.磁颗粒组的编码
[0071]选择磁含量均为10%，但磁颗粒粒径分别为0.5 μπι、2.0 μπι、5.0 μπι的三种磁颗粒，分别标号1、2、3，分别对应用于cTn1、Myo、CK-MB的检测。
[0072]2.抗体标记:
[0073]I)酶标抗体:称取5mg HRP溶解于Iml蒸馏水中，配成浓度为5mg/ml HRP溶液，向该溶液中加入0.2ml新配制的0.1M Na14溶液，室温下避光搅拌20分钟；将溶液装入透析袋中，用ImM pH 4.4的醋酸钠缓冲液透析，于4°C过夜；加20 μ I 0.2Μ pH 9.5碳酸盐缓冲液，使以上醛基化HRP的pH升高到9.0?9.5，然后立即加入2.3mg cTnl抗体，在Iml
0.0lM碳酸盐缓冲液中，室温避光轻轻搅拌2小时；加0.1ml新配的4mg/ml NaBH4液，混匀，于4°C放置2小时；将上述溶液装入透析袋中，用0.15M pH 7.4PBS透析I小时；回收透析液，在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，于4°C放置I小时；3000rpm离心30分钟，弃上清液；沉淀物用50%饱和硫酸铵洗二次，最后沉淀物溶于少量0.15M pH 7.4的PBS中；将上述溶液装入透析袋中，对0.15M pH 7.4的PB缓冲盐水透析，去除铵离子后，10，OOOrpm离心30分钟去除沉淀，上清液即为HRP-抗体结合物，分装后，冷冻保存。Myo和CK-MB标记方法与此相同。
[0074]2)磁标抗体:向Iml 1mM ρΗ7.4磷酸缓冲液中加入Img磁颗粒、30 μ g EDC和
15μ g NHS溶液和10 μ g抗cTnl单抗(与HRP标记所用的抗体不同)溶液，混合均匀并于室温下反应4小时，加入Img甘氨酸封闭。以磁铁富集，去除未反应的抗cTnl单抗，得到磁颗粒标记cTnl抗体。Myo和CK-MB标记方法与此相同。
[0075]3.微流控芯片的组装
[0076]将HRP标记的cTn1、Myo、CK_MB抗体溶液按1: 4.5: 2的摩尔比例混合均匀放入盖片的第一生物标记物存储池(4)中，密封。将磁颗粒标记抗体溶液放入底片检测室(13)中，室温干燥。将发光基底液和清洗液分别注入清洗液存储池(16)和发光基底液存储池
(17)中，密封。按图3所示，用胶带将盖片和底片组装形成一个完整的微流控芯片，装入铝箔袋中，密封于4°C保存。
[0077]4.检测
[0078]I)用正常人血清作稀释液，将肌钙蛋白I标准品配制系列浓度如下:0ng/mL、
0.05ng/mL、0.5ng/mL、5ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL ；
[0079]用正常人血清作稀释液，将肌红蛋白标准品配制系列浓度如下:O、2.0ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、250ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、1500ng/mL、2000ng/mL、2500ng/mL ；
[0080]用正常人血清作稀释液，将肌酸激酶同工酶标准品配制系列浓度如下:0ng/mL、
0.25ng/mL、0.5ng/mL、lng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、500ng/mL、1000ng/mLo
[0081]将50 μ I样本滴入加样口后，盖上盖子。将微流控芯片放入配套仪器中，仪器将对微流控芯片施加一系列操作，检测15分钟后仪器将会显示待测物浓度，每个样本分别用3个微流控芯片测定3次，取平均值，绘制标准曲线。分别滴加不同分析物的标准品，将获得各分析物对应的标准曲线。
[0082]将50 μ I全血样本滴入加样孔，15min内仪器检测系统检测发光信号强度，依据所获得标准曲线得到样本中cTnl，Myo，CK-MB三种物质的各自浓度。
[0083]2)结果表明，肌钙蛋白I最低检测限可达到0.lng/ml，肌红蛋白最低检测限为5ng/ml，肌酸激酶同工酶的最低检测限为lng/ml，在定量检测范围内，相关系数R2> 0.98，未出现Η00Κ效应。
[0084]实施例3:磁微粒颗粒尺寸筛选
[0085]磁性微球的粒径小，比表面积大，表面含有活性基团，故偶联容量大，但磁颗粒尺寸过小不利于磁铁收集，故进行磁微粒尺寸筛选。
[0086]其他的实验条件参见实施例2，磁微粒颗粒含量均为10%，尺寸按照以下方案进行。
[0087]选择颗粒尺寸分别为0.1 μ m、0.5 μ m、I μ m、2 μ m、3 μ m、10 μ m六种磁颗粒标分别单独记抗肌钙蛋白I (cTnl)、肌红蛋白(Myo)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)抗体，对三种目标物进行单独测定。检测时采用磁性大小经过优选的永磁铁，固定磁铁高度和运动速度。