[0088]三种目标物单独检测实验结果如下:
[0089]检测到的光学信号按照磁微粒粒径尺寸从0.1 μ m、0.5 μ m、I μ m、2 μ m、3 μ m、6 μ m依次增强，10 μπι开始减小，信号值最低。
[0090]结果分析:磁微粒尺寸较小时，比表面积较大，表面所负载的生物分子量大，同时能够很好地分散在溶液中，但要保证磁性微球充分被收集所需的磁场强度大。在本实施例中由于磁珠所受的磁场力不能保证其充分被收集，导致部分有效磁珠在清洗过程中流失，从而导致最终检测信号值不高。当磁颗粒粒径较大时，比表面积小，表面生物分子的标记率相对较低，相同条件下，磁性粒子所受磁场力大，分散的磁珠能够得到充分的收集，但其由于极易发生沉降，导致生物分子间反应不充分，从而减弱发光信号。综合考虑，粒径为
0.5?6 μ m磁性微球效果最好。
[0091]实施例4:不同磁微粒颗粒互不干扰尺寸的筛选
[0092]磁颗粒在液体样本中磁颗粒的尺寸与液体流体学阻力关系密切，因此有必要考察几种不同尺寸的磁颗粒混合使用时，尺寸差异对各配体可以被准确的分离出来效果的影响，此时不出现混淆，多种目标分析物同时检测不会出现干扰。
[0093]选用磁含量均为10%，但颗粒尺寸分别为0.5 μπκ? μηι、2.5 μηι、2.7 μηι、3 μπι、5 μπι的6种磁颗粒分别标记肌钙蛋白I(cTnl)、肌红蛋白(Myo)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)抗体，其他试验条件同实施例1或2，试验结果为:
[0094]颗粒尺寸为0.5 μπκ I μπι的两种目标物检测信号有部分重叠，分离度不是很理想，该重叠区可经过一定的修正作用加以消除相互干扰；而颗粒尺寸I μπι和2.5 μπι的两种目标物信号无重叠区域，分离度较好，两种目标物检测出现少量干扰。而颗粒尺寸I μπι和
2.7 μ m的两种目标物信号无重叠区域，分离度最好，两种目标物检测不会出现干扰。颗粒尺寸为2.7 μ m、3 μ m的两种目标物检测信号有部分重叠，颗粒尺寸为3 μ m、5 μ m的两种目标物检测信号有部分重叠，该重叠区无法经过修正作用加以消除相互干扰。
[0095]因此，从试验结果初步判断，在最优选的磁颗粒尺寸范围内，各颗粒尺寸大小比值为2.5-2.7时，可减少检测过程中各物质间的相互干扰，达到在同一样本中同时准确检测各目标分析物的含量。
[0096]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种基于磁微粒化学发光的多目标分析物定量检测的微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片为双层结构，包括盖片(1)和底片(11)，其中盖片(1)上的气栗(3)、气流微通道(5)、加样孔(2)、样本液流通道(6)、第一生物标记物存储池(4)、微混合器(7)以及过渡区(10)依次连接；底片(11)上的过滤器(12)、反应室(13)、清洗区(14)、检测室(15)、溶液释放通道(18)依次连接，检测室(15)通过溶液释放通道(18)分别与清洗液存储池(16)，发光液存储池(17)连接；所述第一生物标记物存储池(4)存储预封装酶或发光剂标记的不同配体溶液，所述反应室(13)包被预封装不同磁颗粒标记的不同配体，所述磁颗粒标记的不同配体使用的磁颗粒按照表面积与内部磁含量的平均比值的不同将磁颗粒进行编码，划分成不同的磁颗粒组，并对各组给出相应的编号；所述盖片(1)和底片(11)用胶带(20和22)密封。2.如权利要求1所述微流控芯片，其特征在于，所述第一生物标记物存储池(4)、清洗液存储池(16)和发光液存储池(17)为液囊或试剂槽，体积为5?500 μ L ;所述微流控芯片的微混合器是宽度为20?300 μm，深度为10?100 μm的蛇形，折线形或方形结构。3.如权利要求1所述微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片的过滤器(12)由腔体和滤血膜组成。4.如权利要求1所述微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片的反应室(13)为毛细管微通道，该毛细管微通道为管状通道或矩形通道。5.如权利要求4所述微流控芯片，其特征在于，所述毛细管微通道为管状通道时直径为0.5?10mm ;所述毛细管微通道为矩形通道时尺寸范围:宽为0.1?5mm，深度为0.01?2mm,长为 5 ?40mm η6.如权利要求1所述微流控芯片，其特征在于，所述磁颗粒组的编码方法包括将具有相同表面积，但内部磁含量不同的一类磁颗粒进行组合，分别编码为不同磁颗粒组；或将表面积不同，而磁含量相同的一类磁颗粒进行组合，分别编码为不同磁颗粒组；或表面积和磁含量均不同的一类磁颗粒进行组合；所述磁颗粒组编码所用磁颗粒为顺磁性核壳结构，其中磁颗粒的磁核为Fe304或γ -Fe 203的化合物，外壳为聚苯乙烯化合物，且磁颗粒表面经过修饰带有功能化基团，如-C00H、-C0H、_順2等，或其他生物分子，如生物素，链霉亲和素等，磁颗粒粒径为0.1?10 μ m ;所述酶标记配体使用的酶包含过氧化氢酶(HRP)和碱性磷酸酶(ALP)，所述发光剂标记配体使用的发光剂包含吖啶酯、B丫啶磺酰胺、鲁米诺及其衍生物和金刚烧等。7.本发明还涉及一种应用所述微流控芯片进行同一样本中多目标物定量检测的方法，具体操作如下: 步骤1)从加样孔加入样本，盖上血液盖，将微流控芯片放入配套仪器中，系统释放酶标抗体，然后按压气栗使样本和酶标抗体混合均匀且发生化学反应，形成一种免疫复合物，然后流入底片过滤器中； 步骤2)样本经过滤器后，到达反应室，复溶固化的磁颗粒标记的抗体，仪器系统相对于反应室位置以一定的速度移动外部磁铁，搅拌液体混合物，使它们充分参与反应，反应结束磁铁收集磁颗粒并移动至清洗区，系统释放清洗液，磁颗粒经充分洗涤，除去未参与反应的液体试剂和其他杂质； 步骤3)在磁铁作用下磁颗粒运动至检测室，系统释放发光基底液，移走磁铁，磁颗粒复合物按照一定的顺序先后释放，并沉降在检测室底部不同位置，采用光探测器以一定的方式采集发光信号，并以一定方式输出检测结果，从而实现同一样本中多目标分析物的定量检测。8.根据权利要求7所述微流控芯片，其特征在于，步骤1)所述配套仪器主要包括磁铁装置和检测装置，磁铁装置对微流控芯片所施加的主要作用包括混合磁颗粒复合物，收集磁颗粒，洗涤二级反应混合物，在某一方向发生相对运动。9.根据权利要求7所述微流控芯片，其特征在于，步骤2)所述磁铁的运动方式包括:匀速直线运动或加速运动，或两种运动方式的交替，运动的速度为0.5mm/s?50mm/s。10.根据权利要求7所述微流控芯片，其特征在于，步骤3)所述磁微粒的释放顺序为在外磁场的影响下根据运动速度的快慢先后沉降在检测室底部的不同位置，且速度大的磁性微粒组首先发生沉降；步骤3)所述光学信号的采集主要是一定的方式排列光学探测器，检测到的发光信号至少为双峰。
【专利摘要】本发明涉及一种基于磁微粒化学发光的多种目标物定量检测的微流控芯片；所述微流控芯片为双层结构，包括盖片(1)和底片(11)，其中盖片(1)上的气泵(3)、气流微通道(5)、加样孔(2)、样本液流通道(6)、第一生物标记物存储池(4)、微混合器(7)以及过渡区(10)依次连接；底片(11)上的过滤器(12)、反应室(13)、清洗区(14)、检测室(15)、溶液释放通道(18)依次连接，检测室(15)通过溶液释放通道(18)分别与发光液存储池(16)，清洗液存储池(17)连接。
【IPC分类】B01L3/00, G01N21/76
【公开号】CN105259164
【申请号】CN201510696729
【发明人】范玉霞, 李泉
【申请人】深圳华迈兴微医疗科技有限公司
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年10月26日