数为 93. 38% )加水定容至100ml，之后从中再取Iml加水定容至IOml)，摇匀制得甲酸对照液。 取甲酸对照液，进样20 μ 1检测，重复6次操作，记录甲酸对照液峰面积，结果如下述表1所 不。
[0060] 可见，进样精密度符合要求。
[0061] 3、稳定性：
[0062] 取甲酸试样
（即取甲酸〇· 1142g加水定容至 100ml，之后从中再取Iml加水定容至IOml)，摇勾制得甲酸对照液，分别于Oh、lh、2h、4h、 6h、8h处各进样20 μ 1，记录对应时间点甲酸的峰面积，结果如下述表2所示。
[0065] 由上表可知，RSD < 5%，稳定性符合要求。
[0066] 4、重复性：
[0067] 取甲酸试液（质量分数为93.28% )0· 1056g，折算成甲酸为
(即取甲酸〇. 〇985g加水定容至100ml，之后从中再取Iml 加水定容至IOml)，摇勾作为甲酸对照液，C对=98. 5 μ g/ml。进样20 μ 1，记录甲酸对照液 峰面积。重复操作6次。
[0068] 取取头孢孟多酯钠样品（本申请人生产）约0· 2g加水定容至10ml，进样20 μ 1， 记录头孢孟多酯钠峰面积。重复操作6次。
[0069] 根据相应的数据及记录的峰面积按下述计算公式计算头孢孟多酯钠样品中的甲 酸含量，数据如下述表3所示：
[0070] ω = A*C对 *10/ (Α对 *m)
[0071] 其中，ω为样品中的甲酸含量，单位μ g/g ;
[0072] A为样品中的甲酸峰面积；
[0073] m为样品称样量，单位g。
[0074] 表 3 :
[0075]
[0076] 由上表可知，RSD < 5%，重复性符合要求。
[0077] 5、耐用性：
[0078] 取甲酸试样（质量分数为93. 28% )0· 1060g，折算成甲酸为0· 0989g，加水定容至 100mL，摇匀，作为甲酸IC备液。
[0079] 取甲酸IC备液1ml，水定容至10ml，摇勾，作为甲酸对照液，浓度C对=98. 9 μ g/ml。
[0080] 按相关计算公式计算头孢孟多酯钠样品中的甲酸含量：
[0081] ω = A*C对 *10/(A对 *m)
[0082] 其中，ω为样品中的甲酸含量，单位μ g/g ;
[0083] A为样品中的甲酸峰面积；
[0084] m为样品称样量，单位g。
[0085] a)改变波长：
[0086] 取头孢孟多酯钠
（即取头孢孟多酯钠样品（本申请人生 产）0. 2169g加水定容至IOml)，摇匀作为供试液。分别进样甲酸对照液、供试液20 μ 1，以 水为空白，采用205nm、215nm双波长检测。
[0087] 检测结果：205nm下，测得样品中甲酸含量ω = 1542. 08 μ g/g。
[0088] 215nm下，测定样品中甲酸含量ω = 1538. 88 μ g/g〇
[0089] b)改变流速：
[0090] 0. 9ml/ml流速：称取头孢孟多酯钠
（即取头孢孟多酯钠样 品（本申请人生产）〇.2178g加水定容至10ml)，摇匀，作为供试液。分别进样甲酸对照液、 供试液20 μ 1，以水为空白。测的样品中的甲酸含量ω = 1521. 15 μ g/g。
[0091] I. lml/ml流速：称取头孢孟多酯钥
（即取头孢孟多酯钠样 品（本申请人生产）〇.2165g加水定容至10ml)，摇匀，作为供试液。分别进样甲酸对照液、 供试液20 μ 1，以水为空白。测的样品中的甲酸含量ω = 1526. 15 μ g/g。
[0092] c)改变柱温：
[0093] 柱温25°C :称取头孢孟多酯钠
（即取头孢孟多酯钠样品 (本申请人生产）〇.2145g加水定容至10ml)，摇匀，作为供试液。分别进样甲酸对照液、供 试液20 μ 1，以水为空白。测的样品中的甲酸含量ω = 1518. 25 μ g/g。
[0094] 柱温35°C :称取头孢孟多酯钠
（即取头孢孟多酯钠样品 (本申请人生产）〇.2142g加水定容至10ml)，摇匀，作为供试液。分别进样甲酸对照液、供 试液20 μ 1，以水为空白。测的样品中的甲酸含量ω = 1522. 15 μ g/g。
[0095] d)改变色谱柱：
[0096] 依利特Hypersil 0DS2 :称取头孢孟多酯钠
摇匀，作为 供试液。分别进样甲酸对照液、供试液20 μ 1，以水为空白。测的样品中的甲酸含量ω = 1514.30 μ g/g〇
[0097] 以上所有检测结果的RSD = 0. 69%，符合要求，表明该方法耐用性较好。
[0098] 6、中间精密度试验
[0099] 于不同日期，不同的仪器，不同的检验人员，进行与重复性实验一样的操作。结果 如下：
[0100] 2015-07-05,分析员李某于高效液相色谱仪上检测，实验结果为ω = 1514. 67 μ g/g ；
[0101] 2015-07-07,分析员陈某于高效液相色谱仪上检测，实验结果为ω = 1567. 0 μ g/ g ;RSD = I. 83%。
[0102] 结果表明，该方法中间精密度实验符合要求（RSD < 5% )。
[0103] 7、准确度实验：
[0104] 由于所用的头孢孟多酯钠样品与重复性实验所用为同一份样品，故根据重复性实 验所测结果的平均值可知，头孢孟多酯钠样品中所含的甲酸量M 1= 1514. 71 yg/g。
[0105] 称取甲酸试样（质量分数为93. 28% )0. 1169g，折算成甲酸为0. 1090g，加水定容 至100ml，摇匀作为贮备液。
[0106] 分别取贝士备液 0. 2ml、0. 5ml、I. 0ml、I. 5ml、I. 8ml、2. 0ml，用水定容到 10ml，各进 20 μ I检测，并以甲酸浓度（μ g/ml)为横坐标，甲酸峰面积A为纵坐标作标准曲线，如图6 所示。所得回归方程：Area = I. 1433*Amt+2. 2484,关系数R~2 = 0. 9994。可见，曲线线性 良好，符合要求。
[0107] 称取头孢孟多酯钠样品约0. 2g，分别加入甲酸贮备液0. 5ml、I. 0ml、I. 5ml，加水 溶解，定容至IOml，制得3个梯度的供试液。每个梯度的供试液制备3份。以水为空白，将 所有供试液进样20 μ 1检测。
[0108] 将所测得的甲酸峰面积A结果带入标准曲线计算，回收率=(M3-M1VM 2,
[0109] 其中M3为测定甲酸量，M2为加入甲酸量。
[0110] 测定结果显示，回收率最大值为104. 05%，回收率最小值为101. 14%。回收率结 果符合要求（98. 5%~105. 0% )。
【主权项】
1. 头孢孟多酯钠中甲酸的检测方法，其特征在于：采用液相色谱法进行检测，检测时 所用的流动相为体积浓度为0. 02~0. 1 %的磷酸水溶液。2. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：采用C18色谱柱。3. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：检测波长为205~215nm。4. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：流动相的洗脱流速为0. 9~1.lml/ min〇5. 根据权利要求1~4中任一项所述的检测方法，其特征在于：所述的流动相为体积 浓度为〇. 02~0. 08%的磷酸水溶液。6. 根据权利要求1~4中任一项所述的检测方法，其特征在于：所述的流动相为体积 浓度为〇. 02~0. 05%的磷酸水溶液。7. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：采用液相色谱法进行检测时的色谱 条件为： 色谱柱：C18 ; 流动相：体积浓度为〇. 02 %的磷酸水溶液； 检测波长：210nm; 流速：1· 〇ml/min〇8. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：甲酸保留时间为3. 2~3. 5min，头孢 孟多酯钠的保留时间为13. 0~14. 5min。
【专利摘要】本发明公开了一种头孢孟多酯钠中甲酸的检测方法，该方法采用液相色谱法进行检测，检测时所用的流动相为体积浓度为0.02～0.1％的磷酸水溶液。通过采用体积浓度为0.02～0.1％的磷酸水溶液作为液相色谱法检测头孢孟多酯钠中甲酸的流动相，不仅可以有效抑制甲酸解离，还能很好地改善甲酸的保留时间和分离度，使甲酸与前后相邻杂质峰的分离度分别为3.68和1.78；也不会造成色谱柱的堵塞。此外，本发明所述方法准确度和精密度高，稳定性好，易于在产业化中使用。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105301145
【申请号】CN201510880819
【发明人】张立昭, 欧世强, 黎杏玉, 李永鑫, 罗丽柠, 吴琼, 谭佳, 万阳浴, 程志鹏, 葛均友, 刘思川
【申请人】广西科伦制药有限公司
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年12月4日