一种通过唾液学方法评估葡萄糖代谢的溶液及评估方法
【专利摘要】一种通过唾液学方法评估葡萄糖代谢的溶液及评估方法，其配制包括以下组分：Tris?HCl pH 7.6：60?150mM；蓝色色原物质：0.12?0.4％；葡萄糖氧化酶：1200?2500IU/L；辣根过氧化物酶：120?250IU/L；抗氧化剂：600?1500IU/L。其评估方法包括：1)、采集唾液；2)、将唾液与所述溶液混合；3)、根据唾液与溶液混合后得到混合液的颜色深浅确定机体的葡萄糖代谢水平。本发明通过采用一种与唾液反应后产生颜色深浅的溶液来评估葡萄糖的代谢水平，解决检测血糖带来的诸多不便；而且这种评估方法直观、方便快捷、效率高、准确度高；同时在此溶液中添加抗氧化剂以达到延长此溶液的储存寿命，避免浪费，节约成本。
【专利说明】
-种通过唾液学方法评估葡萄糖代谢的溶液及评估方法
技术领域
[0001] 本发明设及生物学、兽医学和医学研究技术领域，尤其设及一种通过唾液学方法 评估葡萄糖代谢的溶液及评估方法。
【背景技术】
[0002] 随着生活水平的提高，人类罹患糖尿病的人群比例越来越高，检测机体的葡萄糖 代谢水平对于预防糖尿病的发生具有重要的意义。
[0003] 现有的葡萄糖检测方法包括在先的基于化学葡萄糖传感器的检测方法和基于电 学葡萄糖传感器的检测方法，两种方法都无法提供一种更加方便快捷而且成本低的检测方 法。除了 W上两种方法，还有采用血糖检测仪检测，运些成本高，而且操作要求高。
[0004] 而专利号为201480004302.4的发明专利公开了唾液葡萄糖监测系统，此方法是通 过葡萄糖传感器检测唾液中的葡萄糖含量，因此成本高，操作要求高。
[0005] 专利号为201210579953.9的发明专利公开了一种葡萄糖检测试纸，是运种试纸进 行葡萄糖检测的方法。当向试纸上滴加葡萄糖溶液时，葡萄糖氧化酶氧化葡萄糖并产生过 氧化氨，在过氧化物酶的催化作用下将无色的邻-联二茵香胺氧化成为有色的产物，从而使 试纸显色，通过测定试纸颜色深浅进行葡萄糖的定量检测。本申请试纸的制备步骤也比较 复杂，因此无法提供一种更加方便快捷、成本低的检测方法。
[0006] 在现有的文献中，除了通过采血检测人体的葡萄糖代谢水平，现在还有通过唾液 评估葡萄糖代谢水平。许多研究已经证明了血液葡萄糖和唾液葡萄糖水平之间存在关联， 因此直接应用唾液葡萄糖测量来显示个体的健康状况在理论上是可行的并且看来可W实 现，而且通过精确测试唾液中葡萄糖的水平间接评价机体的葡萄糖代谢具有对机体无创性 的特点。而检测血糖水平需要通过繁杂的采血化验过程，而采血本身对机体也是一种伤害。
[0007] 现有通过唾液评估葡萄糖代谢水平均是通过唾液与制备的反应溶液混合反应后 观察颜色深浅评估葡萄糖代谢水平，而现使用的色原物质均是W黄色为主，观看看黄色的 深浅评估葡萄糖代谢，但是由于唾液中含有部分黄色物质，尤其是口腔出血的病人，黄色物 质更多，运样就会影响评估结果的准确性;而且现有的反应溶液的储存寿命低。
【发明内容】
[000引本发明的目的在于现有葡萄糖检测中无法提供一种更加方便快捷、成本低准确性 高、而且反应溶液储存寿命长的检测方法而提出一种通过唾液学方法评估葡萄糖代谢的溶 液及评估方法。
[0009] 为达此目的，本发明采用W下技术方案：
[0010] -种通过唾液学方法评估葡萄糖代谢的溶液，其配制包括W下组分：
[0011] Tris-HCl pH 7.6：6〇-150mM；
[001^ 色原物质：0.12-0.4%;
[0013]葡萄糖氧化酶：1200-2500IU/L;
[0014] 辣根过氧化物酶:120-250IU/L;
[001 引抗氧化剂：600-1500IU/L。
[0016] 优选的，所述蓝色色原物质为2、4、6-S舰-3-?基苯甲酸和4-氨基安替比林的混 合物。
[0017] 优选的，所述2、4、6-;舰-3-径基苯甲酸：0.06-0.2 % ;所述4-氨基安替比林： 0.06-0.2%。
[0018] 优选的，所述抗氧化剂为谷脫甘肤。
[0019] 优选的，其由W下组分配制而成：
[0020] Tris-HCl pH 7.6：IOOmM；
[0021] 2、4、6-S 舰-3-径基苯甲酸:0.1%;
[0022] 4-氨基安替比林:0.1%;
[0023] 葡萄糖氧化酶:2000IU/1;
[0024] 辣根过氧化物酶:200IU/L;
[00巧]谷脫甘肤：1000IU/L。
[0026] 上述所述的一种通过唾液学方法评估葡萄糖代谢水平的评估方法，其包括W下步 骤：
[0027] 1)、采集唾液；
[00%] 2)、将唾液与所述溶液混合；
[0029] 3)、根据唾液与溶液混合后得到混合液的颜色深浅确定机体的葡萄糖代谢水平； 蓝色越深表示葡萄糖含量越高;蓝色越浅表示葡萄糖含量越低。
[0030] 优选的，所述唾液与所述溶液的混合体积比为1:15。
[0031] 优选的，所述唾液与所述溶液置于试验瓶中混合反应。
[0032] 本发明通过采用一种与唾液反应后产生颜色深浅的溶液来评估葡萄糖的代谢水 平，解决检测血糖带来的诸多不便;而且运种评估方法直观、方便快捷、效率高、准确度高； 同时在此溶液中添加抗氧化剂W达到延长此溶液的储存寿命，避免浪费，节约成本。
【具体实施方式】
[0033] 下面并通过【具体实施方式】来进一步说明本发明的技术方案。
[0034] 在此说明，由于口腔中一般不会有蓝色物质的存在，所W本申请选用蓝色色原物 质，就不会受到唾液中的其他颜色的影响，保证检测结果的准确性；同时在溶液中添加抗氧 化剂，延长溶液的储存寿命，避免了浪费，节约成本。当然本申请不仅可W通过唾液与此溶 液混合反应后产生的颜色深浅判断葡萄糖代谢水平，还可W通过分光光度计测定唾液与此 溶液混合后混合液的光密度值作为机体糖度的绝对值(毫摩尔水平），但是运种方法复杂， 没有观察颜色深浅更加直观，而且方便快捷效率高。
[0035] 而唾液与本溶液的混合后反应原理:唾液中含有的葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用 下产生过氧化氨，过氧化氨在辣根过氧化物酶的作用下产生新生态氧，运个新生态氧在有 4-氨基安替比林存在情况下，导致无色的2、4、6-S舰-3-径基苯甲酸变成蓝色，从而使得整 个混合液变成蓝色。从而通过蓝色深浅评估葡萄糖代谢水平;蓝色越深表示葡萄糖含量越 高;蓝色越浅表示葡萄糖含量越低。
[0036] 实施例1
[0037] -种通过唾液学方法评估葡萄糖代谢的溶液，其由W下组分配制而成：
[0038] Tris-HCl pH 7.6：SOmM；
[0039] 2、4、6-^舰-3-径基苯甲酸:0.07%;
[0040] 4-氨基安替比林:0.07%;
[0041 ] 葡萄糖氧化酶：1800IU/1;
[0042] 辣根过氧化物酶:220IU/L;
[0043] 谷脫甘肤:1100IU/L。
[0044] 使用此溶液评估葡萄糖代谢水平的方法，其包括W下步骤：
[0045] 1)、分别采集十人的唾液；
[0046] 2)、将十人的唾液分别与所述溶液混合;其中所述唾液与所述溶液的混合体积比 为1:15;
[0047] 3)、根据唾液与溶液混合后得到混合液的颜色深浅确定机体的葡萄糖代谢水平； 蓝色越深表示葡萄糖含量越高；蓝色越浅表示葡萄糖含量越低。如表1所示，十人葡萄糖代 谢结果，序号1-10分别表示抽取的10人，其中颜色从深到浅分为5级，深蓝为1级，湛蓝为2 级，天蓝3级，浅蓝为4级，接近无色为5级。
[004引表1十人葡萄糖代谢结果 「nn/iol
[0050]从表1可知，3号和10号的葡萄糖代谢水平处于正常，葡萄糖含量较低;而4号和8号 的葡萄糖代谢水平情况非常不乐观，葡萄糖含量非常高，属于罹患糖尿病的人群;2号、5号 和9号的葡萄糖代谢水平情况不乐观，葡萄糖含量也相对较高，处于糖尿病边沿；1号和7号 葡萄糖代谢水平较2号相当好点，但也处于糖尿病边沿;6号的葡萄糖含量处于可接受的范 围。
[0051 ] W上只通过颜色深浅就能评估葡萄糖代谢水平，方法简单，结果观看直观，快捷， 效率高;对人类平时注重自身葡萄糖代谢起到较好的促进作用，同时提前预防糖尿病起到 较好的预防作用。
[0化2]对比实施例1
[0053] -种利用葡萄糖检测的试纸进行葡萄糖浓度的检测的方法，制备步骤包括：
[0054] 1)将一定质量的葡萄糖氧化酶、过氧化物酶溶解于缓冲液中得到组合试剂A溶液； 将该组合试剂A溶液与甘油充分混合，其中溶液与甘油的体积比为10:90- 30:70;将该混合 液作为同轴共纺静电纺丝的内相溶液，加入到微量进样器中；
[0055] 2)将一定质量的邻-联二茵香胺溶于有机溶剂，并将一定质量高分子聚合物溶于 此有机溶剂中充分溶解，得到的透明溶液作为同轴共纺静电纺丝的外相电纺液，加入到另 一微量进样器中。其中外相电纺液是溶于N，N-甲基乙酷胺（内含5-lOmg/ml的邻-联二茵香 胺）的重量百分比为10~30%的聚氨醋溶液、溶于N，N-二甲基乙酷胺（内含5-lOmg/ml的邻- 联二茵香胺)的重量百分比为10~30%的聚偏氣乙締溶液、溶于氯仿（内含5-lOmg/ml的邻- 联二茵香胺）的重量百分比为10~30%的聚乳酸溶液或溶于N，N-二甲基乙酷胺（内含5- lOmg/ml的邻-联二茵香胺)的苯乙締马来酸酢共聚物溶液；
[0056] 3)将内、外相电纺液分别通过管线连接至同轴电纺喷丝头的进液口，将喷丝头的 出液口与高压电源的正极连接，用侣锥纸或不诱钢网连接至高压电源的负极作为接收板；
[0057] 4)利用两台注射累分别控制内、外相电纺液的流速，进行同轴静电纺丝，在接收板 上得到具有中空结构的聚合物纳米纤维，其中用于葡萄糖检测的组合试剂A被原位包埋在 运种中空纳米纤维的空腔中，而显色剂邻-联二茵香胺则均匀分布在中空纤维的壳层中，从 而制备出用于葡萄糖检测的试纸；
[0058] 5)将上述步骤4)中所制备出的用于葡萄糖检测的试纸用打孔器均匀裁剪成直径 为0.5cm左右大小的膜片；配制一系列已知浓度的葡萄糖溶液，用移液器取10-3化1葡萄糖 溶液滴到裁剪好的膜片上，30s左右后观察膜片颜色变化，或用光密度仪读取膜片在440nm 处的反射率，绘制已知葡萄糖浓度和反射率之间的工作曲线，或者将显色后的膜片作为标 准比色卡;在裁剪好的膜片上滴加 10-3化1未知浓度的葡萄糖溶液，30s左右后观察膜片颜 色变化，或用光密度仪读取膜片在440nm处的反射率，即可根据工作曲线计算样品中的葡萄 糖浓度，也可W通过和标准比色卡对照，粗略估计样品中葡萄糖的浓度。
[0059] 此方法需要制备试纸，而且制备试纸的方法比较复杂，导致整个检测方法变得复 杂，因此无法提供一种更加方便快捷、成本低的检测方法。
[0060] 对比实施例2
[0061 ] -种通过唾液学方法评估葡萄糖代谢的溶液，其由W下组分配制而成：
[0062] Tris-HCl pH 7.6：SOmM；
[0063] 4-氨基安替比林:0.07%;
[0064] 葡萄糖氧化酶：1800IU/1;
[00化]辣根过氧化物酶:220IU/L。
[0066] 使用此对比实施例2的溶液评估葡萄糖代谢水平的方法，其方法与实施例1的方法 一致，此反应原理跟本申请的反应原理，只是混合反应后产生的颜色为黄色，且黄色越深表 示葡萄糖含量越高，但是在【背景技术】中提到由于唾液中含有部分黄色物质，尤其是口腔出 血的病人，黄色物质更多，运样就会影响评估结果的准确性，因此使用黄色色原进行评估葡 萄糖代谢的结果存在差异，准确性低。
[0067] 实施例组2
[0068] -种通过唾液学方法评估葡萄糖代谢的溶液，其由W下组分配制而成：
[0069] Tris-HCl pH 7.6：IOOmM；
[0070] 2、4、6-S舰-3-径基苯甲酸：（按下表2的添加量来添加）
[0071] 4-氨基安替比林:0.1%;
[0072] 葡萄糖氧化酶:2000IU/1;
[0073] 辣根过氧化物酶:200IU/L;
[0074] 谷脫甘肤:1000IU/L。
[0075] 使用本实施例组的溶液评估葡萄糖代谢水平的方法，其包括W下步骤：
[0076] 1)、采集1人的唾液；
[0077] 2)、将唾液与本实施例组的溶液混合;所述唾液与所述溶液的混合体积比为1:15;
[0078] 3)、根据唾液与本实施例组的溶液混合后得到混合液的颜色深浅确定机体的葡萄 糖代谢水平。如表2所示，2、4、6-=舰-3-径基苯甲酸添加量对评估结果的影响，其中颜色从 深到浅分为5级，深蓝为I级，湛蓝为2级，天蓝3级，浅蓝为4级，接近无色为5级。
[0079] 表2 2、4、6-S舰-3-径基苯甲酸添加量对评估结果的影响
[0081 ]由表2可知，当2、4、6-S舰-3-径基苯甲酸的添加量超过0.1%后，颜色跟添加量为 0.1%时一样的，而添加量小于0.1%时，颜色深浅是不一致的。由此得出评估葡萄糖代谢水 平的准确性较高，而且考虑成本的情况下，需要2、4、6-S舰-3-径基苯甲酸的添加量为 0.1 %时评估的准确性会提局很多。
[0082] 实施例组3
[0083] -种通过唾液学方法评估葡萄糖代谢的溶液，其由W下组分配制而成：
[0084] Tris-HCl pH 7.6：IOOmM；
[00化]2、4、6-^舰-3-径基苯甲酸:0.1%
[0086] 4-氨基安替比林：（按下表3的添加量来添加）
[0087] 葡萄糖氧化酶:2000IU/1;
[008引辣根过氧化物酶:200IU/L;
[0089] 谷脫甘肤:1000IU/L。
[0090] 使用本实施例组的溶液评估葡萄糖代谢水平的方法，其包括W下步骤：
[0091] 1)、采集1人的唾液；
[0092] 2)、将唾液与本实施例组的溶液混合;所述唾液与所述溶液的混合比例为1微升： 15微升；
[0093] 3)、根据唾液与本实施例组的溶液混合后得到混合液的颜色深浅确定机体的葡萄 糖代谢水平。如表3所示，4-氨基安替比林添加量对评估结果的影响，其中颜色从深到浅分 为5级，深蓝为1级，湛蓝为2级，天蓝3级，浅蓝为4级，接近无色为5级。
[0094] 表3 4-氨基安替比林添加量对评估结果的影响 「000引
[0096] 由表3可知，当4-氨基安替比林的添加量超过0.1 %后，颜色跟添加量为0.1 %时一 样的，而添加量小于0.1 %时，颜色深浅是不一致的。由此得出评估葡萄糖代谢水平的准确 性较高，而且考虑成本的情况下，需要4-氨基安替比林的添加量为0.1%时评估的准确性会 提局很多。
[0097] 实施例组4
[0098] -种通过唾液学方法评估葡萄糖代谢的溶液，其由W下组分配制而成：
[0099] Tris-HCl pH 7.6：IOOmM；
[0100] 2、4、6-^舰-3-径基苯甲酸:0.1%
[0101] 4-氨基安替比林:0.1%
[0102] 葡萄糖氧化酶:2000IU/1;
[0103] 辣根过氧化物酶:200IU/L;
[0104] 抗氧化剂(按下表4的抗氧化剂添加）：1000IU/L。
[0105] 见表4,不同抗氧化剂对溶液的储存寿命影响。
[0106] 表4不同抗氧化剂对溶液的储存寿命影响 「01071
LU I U口」 出T带巧災T 口XIZ、4、D-二U巧-<3壬些不T肖交安L些文/首、LL叩个忙i于'惦化i王T'云-个奴王 气中的氧氧化成蓝色的其他物质，因此为了阻止2、4、6-S舰-3-径基苯甲酸和4-氨基安替 比林被氧化，在溶液中添加了抗氧化剂。从表4可知，使用BHA、BHT、PG、TBHQ、生育酪和和维 生素 C作为抗氧化剂，此溶液的储存时间不超过一个月，最短的有两个周，而使用谷脫甘肤 此溶液的储存寿命达到两年W上，由此可见使用谷脫甘肤作为抗氧化剂是最好的选择。
[0109] 实施例组5
[0110] -种通过唾液学方法评估葡萄糖代谢的溶液，其由W下组分配制而成：
[0111] Tris-HCl pH 7.6：IOOmM；
[0112] 2、4、6-S 舰-3-径基苯甲酸:0.1%
[0113] 4-氨基安替比林:0.1 %
[0114] 葡萄糖氧化酶:2000IU/1;
[0115] 辣根过氧化物酶:200IU/L;
[0116] 谷脫甘肤：（按下表5的添加量添加）。
[0117] 见表5,谷脫甘肤不同添加量对溶液的储存寿命影响。
[0118] 表5谷脫甘肤添加量对溶液的储存寿命影响
[0119]
[0120] 从表5可知，随着谷脫甘肤添加量的添加，溶液的存储寿命在延长，而成本也会添 加;但是当添加量超过1000IU/L后，溶液的存储寿命跟使用1000IU/L的存储寿命是一样的， 因此既要考虑溶液存储寿命问题，也要考虑成本问题，所W谷脫甘肤的最佳添加量为 1000IU/L。
[0121] 综上所述，既要考虑评估结果的准确性，又要考虑成本，由此得出一种最优的通过 唾液学方法评估葡萄糖代谢的溶液，其由W下组分配制而成：
[0122] Tris-HCl pH 7.6：IOOmM；
[0123] 2、4、6-S 舰-3-径基苯甲酸:0.1%
[0124] 4-氨基安替比林:0.1 %
[01巧]葡萄糖氧化酶:2000IU/1;
[01%] 辣根过氧化物酶:200IU/L;
[0127]谷脫甘肤:1000IU/L。
[012引实施例组6
[0129] -种通过唾液学方法评估葡萄糖代谢的溶液，其由W下组分配制而成：
[0130] Tris-HCl pH 7.6：SOmM；
[0131] 2、4、6-S舰-3-径基苯甲酸:0.07 % ;
[0132] 4-氨基安替比林:0.07%;
[0133] 葡萄糖氧化酶：1800IU/1;
[0134] 辣根过氧化物酶:220IU/L;
[01巧]谷脫甘肤：1100IU/L。
[0136] 选择实施例1中的1号唾液作为评估唾液，将此唾液与本实施例的溶液混合;所述 唾液与所述溶液的混合体积比见表6;根据唾液与溶液混合后得到混合液的颜色深浅确定 机体的葡萄糖代谢水平;蓝色越深表示葡萄糖含量越高;蓝色越浅表示葡萄糖含量越低。见 表6所示，唾液与溶液的混合比例对评估结果的影响。颜色从深到浅分为5级，深蓝为1级，湛 蓝为2级，天蓝3级，浅蓝为4级，接近无色为5级。
[0137] 表6唾液与溶液的混合比例对评估结果的影响 r〇i3si
[0139] 从表6可知，随着唾液与溶液的混合比例的增加，混合液的颜色是由浅至深变化， 而且随着溶液添加量的添加，成本也会添加;但是当唾液与溶液的混合比例的比例超过1: 15后，混合液颜色跟唾液与溶液的混合比例为1:15是一样的，因此既要考虑评估准确性，也 要考虑成本问题，所W唾液与溶液的混合最佳比例1:15。在运个比例中，溶液中含有的葡萄 糖氧化酶与唾液中含有的葡萄糖充分反应，得到的评估结果会更为准确。
[0140] 在此说明，W上的颜色的级别可W根据颜色深浅程度进行分级，W上只是举例说 明不仅局限于W上颜色的分级。
[0141] W上结合具体实施例描述了本发明的技术原理。运些描述只是为了解释本发明的 原理，而不能W任何方式解释为对本发明保护范围的限制。基于此处的解释，本领域的技术 人员不需要付出创造性的劳动即可联想到本发明的其它【具体实施方式】，运些方式都将落入 本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种通过唾液学方法评估葡萄糖代谢的溶液，其特征在于:其配制包括以下组分： Tris-HCl pH 7.6：6〇-150mM； 色原物质:0.12-0.4%; 葡萄糖氧化酶：1200-2500IU/L; 辣根过氧化物酶：120-250IU/L; 抗氧化剂:600-1500IU/L。2. 根据权利要求1所述的一种通过唾液学方法评估葡萄糖代谢的溶液，其特征在于:所 述蓝色色原物质为2、4、6_三碘-3-羟基苯甲酸和4-氨基安替比林的混合物。3. 根据权利要求2所述的一种通过唾液学方法评估葡萄糖代谢的溶液，其特征在于:所 述2、4、6-三碘-3-羟基苯甲酸:0.06-0.2 % ;所述4-氨基安替比林:0.06-0.2 %。4. 根据权利要求3所述的一种通过唾液学方法评估葡萄糖代谢的溶液，其特征在于:所 述抗氧化剂为谷胱甘肽。5. 根据权利要求4所述的一种通过唾液学方法评估葡萄糖代谢的溶液，其特征在于:其 由以下组分配制而成： Tris-HCl pH 7.6：IOOmM； 2、4、6-三碘-3-羟基苯甲酸:0.1 % ; 4_氨基安替比林:0.1%; 葡萄糖氧化酶:2000IU/L; 辣根过氧化物酶:200IU/L; 谷胱甘肽：l〇〇〇IU/L。6. 如权利要求1-5任意一项所述的一种通过唾液学方法评估葡萄糖代谢水平的评估方 法，其特征在于:其包括以下步骤： 1)、采集唾液； 2 )、将唾液与所述溶液混合； 3)、根据唾液与溶液混合后得到混合液的颜色深浅确定机体的葡萄糖代谢水平;蓝色 越深表示葡萄糖含量越高;蓝色越浅表示葡萄糖含量越低。7. 根据权利要求6所述的评估方法，其特征在于:所述唾液与所述溶液的混合体积比为 1：15〇8. 根据权利要求6所述的评估方法，其特征在于:所述唾液与所述溶液置于试验瓶中混 合反应。
【文档编号】G01N21/78GK105954270SQ201610274043
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年4月27日
【发明人】樊福好, 樊珉, 杨艳芹
【申请人】樊福好