一种用液相色谱法分离测定盐酸维拉佐酮中2-氯-1-甲基吡啶鎓碘化物含量的方法
【专利摘要】本发明属分析化学领域，本发明公开了一种用液相色谱法分离检测盐酸维拉佐酮中2?氯?1?甲基吡啶鎓碘化物的方法，该方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的缓冲盐溶液?有机相为流动相，采用外标法计算2?氯?1?甲基吡啶鎓碘化物的含量。本发明方法专属性强、准确度高、重现性良好、操作简便，可以定性或定量检测出盐酸维拉佐酮中的2?氯?1?甲基吡啶鎓碘化物，保证了盐酸维拉佐酮的质量，从而提高了临床用药的安全性。
【专利说明】
一种用液相色谱法分离测定盐酸维拉佐酮中2-氯-1-甲基吡 啶鐺砩化物含量的方法
技术领域
[0001 ]本发明属于分析化学领域，具体涉及液相色谱法分离测定盐酸维拉佐酮中2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物的方法。
【背景技术】
[0002] 盐酸维拉佐酮是一种新型抗抑郁药物，是第一个吲哚烷基胺类新型治疗成人重度 抑郁症的药物。盐酸维拉佐酮化学名为5-{4-[4-(5_氰基-3-吲哚基)丁基]-1-哌嗪基}苯并 呋喃-2-甲酰胺盐酸盐，分子式为C2 6H27N5〇2 · HClj-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物(CMPI)是药物 合成过程中常用的一种催化剂，对人体眼睛、呼吸道和皮肤均有刺激作用;在药物合成过程 中可能会由于去除不完全而影响药物的纯度和质量，引发临床用药的安全性。2-氯-1-甲基 吡啶鑰碘化物分子式为C 6H7C1 IN，结构式为：
[0003] 在盐酸维拉佐酮的合成过程中，使用2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物作为最终反应的 催化剂。在工艺过程中可能会由于2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物去除不完全而影响药物的纯 度和质量，从而引发临床用药的安全性。因此实现对2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物的分离测 定，在保证盐酸维拉佐酮的质量，提高临床用药的安全性方面具有重要的现实意义。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种分析盐酸维拉佐酮中2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物含量 的方法，从而实现对盐酸维拉佐酮中2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物的控制，以保证盐酸维拉佐 酮的纯度，从而有效控制盐酸维拉佐酮终产品的质量。
[0005] 本发明所述的一种测定维拉佐酮中2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物含量的方法，是采 用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的缓冲盐溶液-有机相为流动相； 上述所说的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，选自Alltima、Kromasil和 Apollo等品牌的色谱柱。
[0006] 上述所说的有机相选自甲醇、乙腈、异丙醇或四氢呋喃中的一种或几种。
[0007] 上述所说的缓冲盐可为磷酸盐、甲酸盐、乙酸盐、高氯酸盐，优选高氯酸盐。
[0008] 本发明所述的分离测定方法，可按照以下方法实现： 1) 取盐酸维拉佐酮样品适量，用甲醇或流动相溶解样品，配制成每lmL含盐酸维拉佐酮 0.1~1.5 mg的溶液； 2) 取盐酸维拉佐酮各有关物质样品适量，用甲醇或流动相溶解样品，配制成每lmL含 盐酸维拉佐酮各有关物质0.1~1.5mg的溶液； 3) 取2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物样品适量，用甲醇或流动相溶解样品，配制成每lmL含 2_氯-1-甲基吡啶鑰碘化物0.1~1.5mg的溶液； 4) 取1)、2)和3)的溶液适量，配制成系统适用性溶液； 5) 设置流动相流速为0.5~1.5mL/min，检测波长205~300nm，柱温箱温度10~45 °C ; 6) 流动相A为10~75mmol/L高氯酸钠溶液，用高氯酸调节pH至2.0~7.0;流动相B为乙腈； 7) 取4)的系统适用性溶液10~50yL注入液相色谱仪，完成盐酸维拉佐酮及其有关物质 与2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物的分离； 8 )精密量取1)和3 )的样品溶液各10~50yL注入液相色谱仪，记录色谱图； 9 )米用外标法计算2_氣-1 -甲基R比啶鐵鹏化物的含量。
[0009] 其中高效液相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的色谱仪为岛津高效液相 色谱仪： LC-20AT，CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-lOASvp 色谱柱：C18(Kromasil，250 X4.6mm，5ym) 流动相:A:50mmol/L高氯酸钠(pH 3.0) B:乙腈 流速：1. OmL/min 检测波长：275nm 柱温：30°C 进样体积：lOyL 洗脱梯度：
本发明采用C18(Kromasil，250 X4.6mm，5ym)色谱柱，能够有效地分离测定盐酸维拉佐 酮中2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物的含量。本发明解决了盐酸维拉佐酮中2-氯-1-甲基吡啶鑰 碘化物的定性和定量检测问题，实现了盐酸维拉佐酮的质量可控，提高了临床用药的安全 性。
【附图说明】
[0010] 图1为实施例1时空白溶剂的液相色谱图； 图2为实施例1时系统适用性溶液的液相色谱图； 图3为实施例1时2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物的液相色谱图； 图4为实施例2时系统适用性溶液的液相色谱图。
[0011]
【具体实施方式】： 以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。以下通过实例形式，对本 发明涉及的盐酸维拉佐酮中2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物含量检测方法作进一步的详细说 明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实例，凡基于本发明所述内容实 现的技术均属于本发明的范围。
[0012] 实施例1 仪器与条件 高效液相色谱仪：岛津:LC-20AT，CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-lOASvp; 色谱柱：C18(Kromasil，250 X4.6mm，5ym) 流动相:A:50mmol/L高氯酸钠(pH 3.0) B:乙腈 流速：1. OmL/min 检测波长：275nm 柱温：30°C 进样体积：lOyL 洗脱梯度：
实验步骤 取盐酸维拉佐酮样品适量，用流动相溶解样品，配制成每lmL含盐酸维拉佐酮0.5mg的 溶液;取盐酸维拉佐酮有关物质及2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物样品适量，用流动相溶解样 品，分别配制成每lmL含盐酸维拉佐酮有关物质及2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物各0.2mg的溶 液。取上述盐酸维拉佐酮、维拉佐酮有关物质及2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物溶液适量，配制 成系统适用性溶液；另取流动相作为空白溶液。按上述色谱条件进行分析，记录色谱图。结 果见附图1~3,图1为空白溶剂色谱图；图2中保留时间5.020min的色谱峰为2-氯-1-甲基吡 啶鑰碘化物，保留时间11.804min的色谱峰为盐酸维拉佐酮，其余色谱峰为盐酸维拉佐酮有 关物质。图3中保留时间4.989min的色谱峰为2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物。图1~图3表明：本 发明的方法可以有效地将2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物与盐酸维拉佐酮及其有关物质分离， 并可以准确进行定量检测，以计算出2-氯-1 -甲基吡啶鑰碘化物的含量。
[0013] 实施例2 仪器与条件 高效液相色谱仪：岛津:LC-20AT，CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-lOASvp; 色谱柱：C18(Kromasil，250 X4.6mm，5ym) 流动相:A:50mmol/L高氯酸钠(pH 3.0) B:乙腈 流速：1. OmL/min 检测波长：275nm 柱温：30°C 进样体积：lOyL 洗脱梯度：
[0014]~实验步骤
取盐酸维拉佐酮样品适量，用流动相溶解样品，配制成每lmL含盐酸维拉佐酮0.5mg的 溶液;取盐酸维拉佐酮有关物质及2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物样品适量，用流动相溶解样 品，分别配制成每lmL含盐酸维拉佐酮有关物质及2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物各0.2mg的溶 液。取上述盐酸维拉佐酮、维拉佐酮有关物质及2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物溶液适量，配制 成系统适用性溶液。按上述色谱条件进行分析，记录色谱图。结果见附图4,图4中保留时间 6.729min的色谱峰为2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物，保留时间12.090min的色谱峰为盐酸维拉 佐酮，其余色谱峰为盐酸维拉佐酮有关物质。
[0015]本发明对所述2-氯-卜甲基吡啶鑰碘化物含量分析方法的以下项目进行了验证： 系统适用性实验 取盐酸维拉佐酮样品适量，用流动相溶解样品，配制成一定浓度的溶液;取盐酸维拉佐 酮有关物质及2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物样品适量，用流动相溶解样品，分别配制成一定浓 度的供试液。取上述盐酸维拉佐酮、维拉佐酮有关物质及2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物溶液适 量，配制成系统适用性溶液。按实施例1的色谱条件进行液相色谱分析，记录色谱图。由图2 可见，在此条件下盐酸维拉佐酮及其有关物质与2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物之间分离度符 合要求； 进样重复性试验 将上述系统适用性溶液，按实施例1的色谱条件，重复进样6次，考察方法的重复性。由 结果可加，该方法进样重复性良好；
溶液稳定性 取上述系统适用性溶液，按实施例1的色谱条件，分别于〇、2、4、6、8、12小时后进样，考 察本品定量测定时溶液稳定性，由结果可见，本样品溶液于12小时内稳定；
耐用性 为了进一步验证方法的稳定性，我们将色谱柱品牌、流速、柱温、缓冲溶液pH值这些条 件进行相应的微调，以考察色谱条件的耐用性。
[0016]结果表明，本方法色谱柱品牌耐用性良好，流速变化在±0.1ml/min范围内，色谱 峰峰型没有变化，仅保留时间有相应的前移和后移。柱温变化在±5°C范围内，缓冲液pH变 化± 0.2范围内对出峰时间也无明显改变。上述考察表明本方法耐用性良好。
【主权项】
1. 一种液相色谱法分离检测盐酸维拉佐酮中2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物含量的方法， 其特征在于:采用反相高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定 比例缓冲盐溶液-有机相为流动相。2. 根据权利要求1所述的分离测定方法，色谱柱选自Al 11 ima、Kromas i 1和Apo 11 〇等品 牌。3. 根据权利要求1所述的分离测定方法，所说的有机相选自甲醇、乙腈、异丙醇和四氢 呋喃中的一种或几种。4. 根据权利要求1所述的分离测定方法，所说的缓冲盐可为磷酸盐、甲酸盐、乙酸盐、高 氯酸盐。5. 根据权利要求4所述的分离测定方法，所说的缓冲盐优选高氯酸盐。6. 根据权利要求1所述的分离测定方法，其特征在于： 1) 取盐酸维拉佐酮样品适量，用甲醇或流动相溶解样品，配制成每ImL含盐酸维拉佐酮 0· 1~1.5mg的溶液； 2) 取盐酸维拉佐酮各有关物质样品适量，用甲醇或流动相溶解样品，配制成每ImL含 盐酸维拉佐酮各有关物质0.1~1.5mg的溶液； 3) 取2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物样品适量，用甲醇或流动相溶解样品，配制成每ImL含 2_氯-1-甲基吡啶鑰碘化物0.1~1.5mg的溶液； 4) 取1)、2)和3)的溶液适量，配制成系统适用性溶液； 5 )设置流动相流速为0.5~1.5mL/min，检测波长205~300nm，柱温箱温度10~45 °C ; 6)流动相A为10~75mmol/L高氯酸钠溶液，用高氯酸调pH至2.0~7.0;流动相B为乙腈;流 动相的洗脱梯度设置如下：_^_ι i ^耿兮^ H、J尔?%姐用'I土枪?仪丄U~OUμL·仕乂义/TtT巴陪'1入，兀P乂：K彡田?ΧHFJ汉丹匀穴'十幻职 与2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物的分离； 8 )精密量取1)和3 )的样品溶液各10~50yL注入液相色谱仪，记录色谱图； 9 )米用外标法计算2_氣-1 -甲基[!比啶鐵鹏化物的含量。7. 根据权利要求6所述的测定盐酸维拉佐酮中2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物的方法，其特 征在于:流动相A为50mmol/L高氯酸钠溶液，用高氯酸调pH至3.0;流动相B为乙腈。8. 根据权利要求6所述的测定盐酸维拉佐酮中2-氯-1-甲基吡啶鑰碘化物的方法，其特 征在于:色谱柱为C18，5μπι，250 X 4.6mm(I.D.)，流速为1.0 mL/min，检测波长为275nm，柱温 箱温度为30 °C。
【文档编号】G01N30/02GK106018617SQ201610510770
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年6月30日
【发明人】贾少华, 王宇杰, 刘秋叶
【申请人】北京万全德众医药生物技术有限公司