专利名称：一种培养金毛狗孢子的方法
技术领域：
本发明涉及金毛狗孢子的培养方法。
背景技术：
金毛狗(Cibotium barometz(L.)J.Sm)为水龙骨目蚌壳蕨科金毛狗属的一种，分布于亚洲热带及亚热带地区，在中国主要分布于南部和西南地区，如广西、贵州、广东、云南、四川、重庆、海南、西藏、湖南、浙江、江西省的亚热带地区，因其根状茎粗大，木质，平卧或斜升，连同叶柄基部密被金黄色的长茸毛，形如金毛狗而得名，具有极高的观赏价值。其根状茎又称“狗脊”，具有补肝肾、强腰膝、除风湿等功效，是治疗风湿骨痛、足膝无力、老人尿频、半身不遂、小便失禁等症的理想药材，根状茎上的鳞毛还可外敷，治外伤出血，在中国及亚洲其他地区长期作为中药使用(Zhang，X.-C；Jia，J.-S；Zhang，G.M.Survey and evaluation of the natural resources of Cibotiumbarometz(L.)Smith in China，with reference to the implementation of the cites convention.Fern Gazette.16(6-8).2002.383-387.)。
虽然我国是世界上“狗脊”资源最丰富的国家，但由于近年来人们对金毛狗药用、保健、美食、营养等价值的进一步认识，开发之风盛行，“狗脊”的交易日趋增多，野生金毛狗资源被过度开采，金毛狗人工繁殖与栽培又相对滞后，使我国的金毛狗资源连年锐减，有些地区已经枯竭，因此，金毛狗已被列入CITES附录∏中。
进行金毛狗孢子培养可以加快金毛狗的繁殖速度。目前，金毛狗孢子繁殖技术一般是将金毛狗孢子播种于蛭石、泥炭土、珍珠石构成的培养基上进行培养(《台湾林业科学》，行政院农业委员会林业试验所出版社2003年163)，但是采用该方法进行培养时，金毛狗的繁殖速度相当慢，金毛狗幼孢子体大约自播种后的第12-16周才出现。
发明内容
本发明的目的是提供一种培养效率高的金毛狗孢子的培养方法。
本发明所提供的金毛狗孢子的培养方法，是先将无菌金毛狗孢子悬浊液接种于固体MS基本培养基上，然后在23-27℃温度下先避光保存24-36h，接着在光照强度2000-2300Lux，光照时间12-14h/天条件下培养。
其中，所述无菌金毛狗孢子悬浊液按如下过程制备将孢子先用无菌水清洗，然后用NaClO溶液浸泡灭菌，灭菌后的孢子用无菌水清洗、分散，得到所述无菌金毛狗孢子悬浮液。
所述NaClO溶液的体积百分浓度为4-6％；所述浸泡灭菌的时间为4-5min。所得到的无菌金毛狗孢子悬浊液中孢子数一般为105个/ml左右；MS基本培养基上的接种量一般为3000-4000个孢子/皿。
孢子接种后进行培养时，培养温度优选为25℃；所述避光保存的时间优选为24h；所述光照时间优选为12h/天。
本发明将无菌金毛狗孢子悬浊液接种到灭菌固体MS培养基上进行无菌培养，使用少量孢子可得到大量金毛狗的孢子体，培养效率高达95％左右；孢子繁殖速度快，约8周即可得到大量的孢子体。本发明为金毛狗的保育提供了条件，具有重要的理论及实践意义。
具体实施例方式
实施例1、金毛狗孢子的培养1、培养基所用培养基为MS基本培养基，其中不加入蔗糖，加入琼脂7g/L作为固化剂，将培养基高温灭菌，分装到培养皿中备用。
2、孢子灭菌取孢子置于1.5ml离心管内，滴加无菌水，用旋涡混合器混合使其成悬浊液，4000rpm/min离心1min，弃去上清液，重复操作4-5遍；然后，离心管内再滴入1ml5％NaClO水溶液，浸泡灭菌4min，4000rpm/min离心，弃上清液，用无菌水冲洗、离心4-5遍；最后，将孢子用无菌水悬浮，获得无菌孢子悬浊液(孢子数为105个/ml)。
3、孢子接种用滴管吸取此悬浊液，滴加在培养基表面，并涂布均匀，接种量一般为3000个/皿。
4、孢子培养接种后的培养皿放入塑料盘中，以玻璃覆盖，塑料盘底部铺有多层纱布，培养过程中始终保持纱布湿润，以保证孢子萌发所需湿度。先将塑料盘置于25℃培养室中避光保存24h，然后在光照强度为2000-2300Lux的荧光灯光源下，每日光照培养12h，避光培养12h。连续培养8周左右，即可得到大量的幼孢子体，培养效率高达95％左右。
权利要求
1.一种培养金毛狗孢子的方法，是先将无菌金毛狗孢子悬浊液接种于固体MS基本培养基上，然后在23-27℃温度下先避光保存24-36h，接着在光照强度2000-2300Lux，光照时间12-14h/天条件下培养。
2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于所述无菌金毛狗孢子悬浊液按如下过程制备将孢子先用无菌水清洗，然后用NaClO溶液浸泡灭菌，灭菌后的孢子用无菌水清洗、分散，得到所述无菌金毛狗孢子悬浮液。
3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于所述NaClO溶液的体积百分浓度为4-6％；所述浸泡灭菌的时间为4-5min。
4.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于所述NaClO溶液的体积百分浓度为5％；所述浸泡灭菌的时间为4min。
5.根据权利要求1-4任一所述的培养方法，其特征在于所述无菌金毛狗孢子悬浊液中孢子数为105个/ml；所述MS基本培养基上的接种量为3000-4000个孢子/皿。
6.根据权利要求1-4任一所述的培养方法，其特征在于所述培养温度为25℃。
7.根据权利要求6所述的培养方法，其特征在于所述避光保存的时间为24h。
8.根据权利要求7所述的培养方法，其特征在于所述光照时间为12h/天。
全文摘要
本发明公开了一种培养金毛狗孢子的方法。本发明所提供的金毛狗孢子的培养方法，是先将无菌金毛狗孢子悬浊液接种于固体MS基本培养基，然后在23－27℃温度下先避光保存24－36h，接着在光照强度2000－2300Lux，光照时间12h/天条件下培养。本发明将无菌金毛狗孢子悬浊液接种到灭菌固体MS培养基上进行无菌培养，使用少量孢子可得到大量金毛狗的孢子体，培养效率高达95％左右；孢子繁殖速度快，约8周即可得到大量的孢子体。本发明为金毛狗的保育提供了条件，具有重要的理论及实践意义。
文档编号A01G7/00GK1788546SQ20041009849
公开日2006年6月21日 申请日期2004年12月13日 优先权日2004年12月13日
发明者石雷, 张开梅 申请人:中国科学院植物研究所