专利名称：一种棉花转基因苗育种方法
技术领域：
本发明属于生物学领域，涉及农作物转基因育种，具体涉及一种棉花转 基因苗育种方法。
背景技术：
目前在棉花转基因育种中，外源基因的受体大多是细胞、组织、器官 等。受体通常需进行组织培养，经体细胞再生形成植株(无菌苗)。这种育 种方法形成的苗一般生长不够健壮，移栽时由于根系发育较差而不易成活， 是棉花转基因育种的限制因素之一。若采用嫁接法可以很好地解决这个问 题，大大地加快了转基因育种的进程。
发明内容
本发明的目的就是针对现有技术的不足，提供一种棉花转基因苗育种方 法，该方法将棉花转基因无菌苗嫁接到健壮棉苗上，克服棉花转基因苗根系 不发达且发育羸弱的现象，大大提高棉花转基因苗的成活率。
本发明的具体步骤如下
步骤(l)在花盆中装入富含有机质的土壤，用水浇透，在土壤中播种棉 种，将长出2 4片真叶时的棉苗作为预备砧木；
步骤(2)用组织培养的方法，将棉花转基因后的受体培养成的根系羸弱
但其它器官发育正常的组培无菌苗作为接穗；
步骤(3)将作为接穗的组培无菌苗嫁接到作为预备砧木的棉苗上，育成
健壮的棉花转基因植株，具体方法是①用手术刀去掉预备砧木的顶端部 分，保留下部1 2片真叶；②从子叶节正中沿下胚轴向下将预备砧木顶部劈
开1 2 cm作为砧木；(D将接穗下端削成和上述砧木切口相吻合的锲形，并
插入砧木中(注意切面要光滑整齐)，用细线绑紧，花盆外面罩一层塑料薄 膜保湿，以防蒸发太快造成接穗萎蔫影响成活率，将花盆置于遮荫棚内，温度保持在20 3(TC，并保持通风；@6 8天后，接穗开始生长时去掉薄膜；
再经过10 20天去除细线，去除细线后3 5天内逐天增加光照时间1 2小 时，完成育种。
本发明方法通过组织培养棉花转基因受体，然后将转基因无菌苗嫁接到 正常发芽的健壮棉苗上，从而育成健壮的棉花转基因植株。这种改良的棉花 转基因育种方法，其优点是利用嫁接技术并借助正常发芽棉苗的健壮根系， 大大加快了棉花转基因育种的进程。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作详细说明。 实施例1
歩骤(l)在花盆中装入富含有机质的土壤，用水浇透，在土壤中播种棉
种，将长出2片真叶时的棉苗作为预备砧木；
步骤(2)用组织培养的方法，将棉花转基因后的受体培养成的根系羸弱 但其它器官发育正常的组培无菌苗作为接穗；
步骤(3)将作为接穗的组培无菌苗嫁接到作为预备砧木的棉苗上，育成 健壮的棉花转基因植株，具体方法是①用手术刀去掉预备砧木的顶端部 分，保留下部1片真叶；②从子叶节正中沿下胚轴向下将预备砧木顶部劈开 1 cm作为砧木；(D将接穗下端削成和上述砧木切口相吻合的锲形，并插入砧
木中(注意切面要光滑整齐)，用细线绑紧，花盆外面罩一层塑料薄膜保
湿，以防蒸发太快造成接穗萎蔫影响成活率，将花盆置于遮荫棚内，温度保
持在2CTC，并保持通风；④8天后，接穗开始生长时去掉薄膜；再经过10 天去除细线，去除细线后5天内逐天增加光照时间1小时，完成育种。 实施例2
步骤(l)在花盆中装入富含有机质的土壤，用水浇透，在土壤中播种棉 种，将长出3片真叶时的棉苗作为预备砧木；
步骤(2)用组织培养的方法，将棉花转基因后的受体培养成的根系羸弱 但其它器官发育正常的组培无菌苗作为接穗；
步骤(3)将作为接穗的组培无菌苗嫁接到作为预备砧木的棉苗上，育成健壮的棉花转基因植株，具体方法是①用手术刀去掉预备砧木的顶端部 分，保留下部2片真叶；②从子叶节正中沿下胚轴向下将预备砧木顶部劈开 1.5cm作为砧木；③将接穗下端削成和上述砧木切口相吻合的锲形，并插入 砧木中(注意切面要光滑整齐)，用细线绑紧，花盆外面罩一层塑料薄膜保 湿，以防蒸发太快造成接穗萎蔫影响成活率，将花盆置于遮荫棚内，温度保 持在25°C，并保持通风； 7天后，接穗开始生长时去掉薄膜；再经过15
天去除细线，去除细线后4天内逐天增加光照时间1.5小时，完成育种。 实施例3
步骤(l)在花盆中装入富含有机质的土壤，用水浇透，在土壤中播种棉
种，将长出4片真叶时的棉苗作为预备砧木；
步骤(2)用组织培养的方法，将棉花转基因后的受体培养成的根系羸弱 但其它器官发育正常的组培无菌苗作为接穗；
步骤(3)将作为接穗的组培无菌苗嫁接到作为预备砧木的棉苗上，育成
健壮的棉花转基因植株，具体方法是①用手术刀去掉预备砧木的顶端部
分，保留下部l片真叶；②从子叶节正中沿下胚轴向下将预备砧木顶部劈开2 cm作为砧木；③将接穗下端削成和上述砧木切口相吻合的锲形，并插入砧木 中(注意切面要光滑整齐)，用细线绑紧，花盆外面罩一层塑料薄膜保湿，
以防蒸发太快造成接穗萎蔫影响成活率，将花盆置于遮荫棚内，温度保持在
30°C，并保持通风；④6天后，接穗开始生长时去掉薄膜；再经过20天去除 细线，去除细线后3天内逐天增加光照时间2小时，完成育种。
权利要求
1、一种棉花转基因苗育种方法，其特征在于该方法的具体步骤是步骤(1)在花盆中装入富含有机质的土壤，用水浇透，在土壤中播种棉种，将长出2～4片真叶时的棉苗作为预备砧木；步骤(2)用组织培养的方法，将棉花转基因后的受体培养成组培无菌苗作为接穗；步骤(3)将作为接穗的组培无菌苗嫁接到作为预备砧木的棉苗上，育成健壮的棉花转基因植株，具体方法是①用手术刀去掉预备砧木的顶端部分，保留下部1～2片真叶；②从子叶节正中沿下胚轴向下将预备砧木顶部劈开1～2cm作为砧木；③将接穗下端削成和上述砧木切口相吻合的锲形，并插入砧木中，用细线绑紧，花盆外面罩一层塑料薄膜保湿；将花盆置于遮荫棚内，温度保持在20～30℃，并保持通风；④6～8天后，接穗开始生长时去掉薄膜；再经过10～20天去除细线，去除细线后3～5天内逐天增加光照时间1～2小时，完成育种。
全文摘要
本发明涉及一种棉花转基因苗育种方法。目前育种方法形成的苗生长不够健壮，移栽时由于根系发育较差而不易成活。本发明是在花盆中装入富含有机质的土壤，用水浇透，在土壤中播种棉种，将长出2～4片真叶时的棉苗作为预备砧木；然后用组织培养的方法，将棉花转基因后的受体培养成的根系羸弱但其它器官发育正常的组培无菌苗作为接穗；再将作为接穗的组培无菌苗嫁接到作为预备砧木的棉苗上，育成健壮的棉花转基因植株。本发明方法将棉花转基因无菌苗嫁接到健壮棉苗上，克服棉花转基因苗根系不发达且发育羸弱的现象，大大提高棉花转基因苗的成活率。
文档编号A01H1/00GK101558736SQ20091009877
公开日2009年10月21日 申请日期2009年5月14日 优先权日2009年5月14日
发明者密 倪, 刘英新, 张海平, 文国吉, 王学德, 袁淑娜, 邵明彦 申请人:浙江大学