专利名称：木霉在提高药剂对西瓜枯萎病菌的抑制效果中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种木霉在提高药剂对西瓜枯萎病菌的抑制效果中的应用。
背景技术：
木霉(Trichoderma)分类地位为木霉属(Trichoderma)，是真菌门、半知菌亚门、 丝孢纲、丛梗孢目的一属。形态特征菌丝透明有隔，分枝丰茂，分生孢子梗有对生或互生 分枝，分枝上可再分枝，分枝顶端为小梗，瓶状，束生、对生、互生或单生，由小梗生出分生孢 子，多个分生孢子粘聚成球形的孢子头。木霉俗称绿霉。属于真菌门，半知菌亚门。在自 然界中分布极广，对各种食用菌的致病力强，不仅危害菌丝体生长阶段，也危害食用菌子实 体，它是生产中发生最普遍、危害性最严重的杂菌之一，不论制种还是栽培，也不论生料、熟 料、发酵料、发菌期间均可发生，甚至在出菇阶段也有发生，个别品种如草菇的菌种在完成 发菌后亦可发生该种杂菌，并且发生的温度范围也越来越广，不少地区的银耳、香菇，近年 的平菇、鸡腿菇等生产中曾发生毁灭性的污染，木霉就是主要杂菌之一。木霉能生产纤维素 酶，合成核黄素，生产抗生素，转化留族化合物。木霉也常寄生于某些真菌的子实体上，因此 是栽培蘑菇的劲敌。木霉的特征是产生大量的暗绿色孢子，已发现了许多木霉品种，如多孢木霉、康氏 木霉、绿色木霉等。木霉菌丝纤细，白色透明，有分枝，分隔。菌落初期呈白色斑块，棉絮状， 产生孢子后逐渐变为绿色。木霉的孢子梗呈松塔状，长在菌丝的短侧枝上，常作2-3级分 枝。木霉主要生存在朽木、枯枝落叶、土壤、有机肥、植物残体上和空气中。木霉广泛分 布于各种腐木、枯枝落叶、植物残体、土壤和空气中，自然界到处都可以找到它的家族成员。目前，没有发现木霉具有抑制农业病菌的作用。
发明创造内容本发明的目的是提供一种木霉在提高药剂对西瓜枯萎病菌的抑制效果中的应用。本发明提供的应用为木霉在提高抗菌药剂对西瓜枯萎病菌的抑制效果中的应用。所述抗菌药剂为对西瓜枯萎病菌具有杀菌或抑菌效果的药剂。所述西瓜枯萎病菌 优选为尖孢镰刀菌西瓜专化型，购自中国农业微生物菌种保藏管理中心(accc)，保藏号 为:30024o所述抗菌药剂优选自代森锰锌原药、代森锰锌制剂、百菌清原药、百菌清制剂、五 氯硝基苯原药、五氯硝基苯制剂、多菌灵原药、多菌灵制剂、扑海因原药、扑海因制剂、咪鲜 胺原药和咪鲜胺制剂中的一种或两种以上任意混合。所述代森锰锌制剂优选为代森锰锌可湿性粉剂，所述百菌清制剂优选为百菌清可 湿性粉剂，所述五氯硝基苯制剂优选为五氯硝基苯可湿性粉剂，所述多菌灵制剂优选为多 菌灵可湿性粉剂；所述扑海因制剂优选为扑海因可湿性粉剂，所述咪鲜胺制剂优选为咪鲜 胺水乳剂。
所述代森锰锌制剂优选为80%代森锰锌可湿性粉剂，所述百菌清制剂优选为 75%百菌清可湿性粉剂，所述五氯硝基苯制剂优选为20%五氯硝基苯可湿性粉剂，所述多 菌灵制剂优选为50%多菌灵可湿性粉剂；所述扑海因制剂为50%扑海因可湿性粉剂，所述 咪鲜胺制剂优选为45%咪鲜胺水乳剂；所述百分含量为质量百分含量。所述木霉优选为保藏于中国农业科学院微生物菌种保藏管理中心的木霉菌株，保 藏号为30121。所述木霉在提高抗菌药剂对西瓜枯萎病菌的抑制效果的方法是将木霉与所述抗 菌药剂混合使用。本发明还提供一种西瓜枯萎病菌抑制剂，由抑菌药剂和木霉组成；所述抗菌药剂 选自代森锰锌原药、代森锰锌制剂、百菌清原药、百菌清制剂、五氯硝基苯原药、五氯硝基苯 制剂、多菌灵原药、多菌灵制剂、扑海因原药、扑海因制剂、咪鲜胺原药和咪鲜胺制剂中的一 种或两种以上任意混合。所述代森锰锌制剂为代森锰锌可湿性粉剂，所述百菌清制剂为百菌清可湿性粉 剂，所述五氯硝基苯制剂为五氯硝基苯可湿性粉剂，所述多菌灵制剂为多菌灵可湿性粉剂； 所述扑海因制剂为扑海因可湿性粉剂，所述咪鲜胺制剂为咪鲜胺水乳剂。所述代森锰锌制剂为80%代森锰锌可湿性粉剂，所述百菌清制剂为75%百菌清 可湿性粉剂，所述五氯硝基苯制剂为20%五氯硝基苯可湿性粉剂，所述多菌灵制剂为50% 多菌灵可湿性粉剂；所述扑海因制剂为50%扑海因可湿性粉剂，所述咪鲜胺制剂为45%咪 鲜胺水乳剂；所述百分含量为质量百分含量。实验证明本发明的应用可以大大提高药剂的防治效果，提高药剂对西瓜枯萎病的 抑菌效果，减少化学药剂的使用量，大大降低杀菌防病的成本，对环境保护作出贡献。下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。
图1为咪酰胺及木霉对西瓜枯萎菌的抑制效果(左，对照；中，咪酰胺；右，咪酰胺 +木霉)图2为多菌灵及木霉对西瓜枯萎菌的抑制效果(左，对照；中，多菌灵；右，多菌灵 +木霉)
具体实施例方式实施例1、木霉在提高药剂对西瓜枯萎病菌的抑制效果中的应用1、使用材料菌株西瓜枯萎病病原菌(镰刀菌(Fusarium oxysporumf sp. Melonis)，下简称 FW，尖孢镰刀菌西瓜专化型，购自中国农业微生物菌种保藏管理中心(accc)，保藏号为 30024 ；木霉菌(Trichoderma. sp) (V)中国农业科学院微生物菌种保藏管理中心(accc)， 保藏号30121。药剂①75%百菌清可湿性粉剂(商品名达科宁，先正达公司)②20%五氯硝基 苯可湿性粉剂(商品名五洲，山西省临汾有机化工厂)③50%多菌灵可湿性粉剂(商品 名多菌灵，上海诺尔化工有限公司)④50%扑海因可湿性粉剂(通用名异菌脲，拜耳作
4物科学公司)⑤45%咪鲜胺水乳剂(商品名滴翠，青岛阳光农药有限公司)。2、木霉和药剂混合使用对西瓜枯萎病菌的抑制作用将西瓜枯萎病菌接种于涂有步骤1所述的药剂的培养基上，然后接种木霉菌 (Trichoderma. sp) (V)，检测药剂对西瓜枯萎病菌的抑制作用，以步骤1所述的药剂单独使 用和无药剂培养基作为对照，具体方法如下所示用培养在PDA培养基上生长5天的西瓜枯萎病菌，用直径0. 5cm的打孔器沿菌落 边缘打取菌饼，菌面朝下，接种涂有步骤1所述的药剂(用无菌水配制一定浓度的药剂，加 到20毫升溶化的PDA培养基中，制成含下述药剂终浓度的PDA平板。各种药剂的终浓度 为75%百菌清一终浓度1. 25% ；50%多菌灵一终浓度0. 83% ；20%五氯硝基苯一终浓 度0. 4%0 ；50%扑海因一终浓度0. 5%0 ；45%咪鲜胺一终浓度0. 23%。，上述％。均表示质量 含量)的直径9cm PDA平板中央，用同样方法，取0.5cm直径的木霉菌饼，接种在西瓜枯萎 病菌的周围以正三角形状放置，每个木霉菌饼与病原菌饼两者相距3cm，以病原菌单独放置 在含有上述药剂和不含药剂的PDA平板上培养作为对照；每个处理设置3个重复，28°C恒温 培养，采用十字交叉法测量对峙培养中西瓜枯萎病菌和病原真菌菌落直径以及对照中病原 菌的直径，计算抑菌率。抑菌率(％)=[(对照菌落直径-对峙菌落直径)/对照菌落直 径]X 100。其中，对峙培养菌落为在上述含有药剂并接种木霉菌的平板上培养的病原菌或 者单独在含有药剂的平板上培养的病原菌。对照菌落为以病原菌单独放置在不含上述药剂 的平板中培养的病原菌。PDA培养基马铃薯200克/升，葡萄糖20克/升，琼脂粉20克/升，其余为蒸馏 水。木霉和药剂对西瓜枯萎病菌的抑制作用见下表1所示。由表1可知，咪酰胺单独 使用时的抑制率为最高，可达74. 3%，多菌灵的效果最差，仅有3. 9%，其他处理对FW的抑 制率都不超过50%，而药剂与木霉共同处理大大提高了对FW的抑制率，特别是对多菌灵、 五氯硝基苯和扑海因这三种药剂对FW的抑制率有显著的提高效果。在木霉和药剂共同作 用的处理中以药剂⑤即咪酰胺和木霉共同作用，对FW的抑制效果最好，其抑制率能达到 79.4%，在药剂单独作用和药剂与木霉联合使用两种情况下，联合使用的效果远高于药剂 单独使用的效果，两种处理之间达到极显著。即化学药剂在木霉的作用下，增强了对病原真 菌的抑制作用，增加了对病原菌的防治效果。图1、图2是几种处理对FW的抑制效果照片。 图2咪酰胺及木霉对西瓜枯萎菌的抑制效果(左，对照；中，咪酰胺；右，咪酰胺+木霉)图 3为多菌灵及木霉对西瓜枯萎菌的抑制效果(左，对照；中，多菌灵；右，多菌灵+木霉)。表1绿色木霉和药剂对西瓜枯萎病菌的抑制作用及方差分析
处理平均抑制率(％)显著水平α =0. 05α=0. 01⑤+V79. 3AA⑤74. 3AA①48. 0BB①+V46. 7BB④+V38. 9CC②+V30. 9DD③+V28. 9DDE④22. 1EE②12. 4FFV5. 8GFG③3. 9GG 上述实验证明，可以用木霉菌跟化学抑菌或杀菌的药剂混合使用，达到比单用化 学药剂更好的效果，因此可以减少化学药剂的使用量。并且，木霉菌是对植物和环境无害的 微生物，并且培养成本很低。这种方法通过研究并充分利用生物防治和化学防治西瓜枯萎 病菌的协同作用，可以大大减少化学药剂对环境的影响，提高防治效果，减缓病害对化学药 剂的抗性突变，同时大大降低了防治病菌的成本。
权利要求
木霉在提高抗菌药剂对西瓜枯萎病菌的抑制效果中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述抗菌药剂为对西瓜枯萎病菌具有杀 菌或抑菌效果的药剂。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述抗菌药剂选自代森锰锌原药、代森锰 锌制剂、百菌清原药、百菌清制剂、五氯硝基苯原药、五氯硝基苯制剂、多菌灵原药、多菌灵 制剂、扑海因原药、扑海因制剂、咪鲜胺原药和咪鲜胺制剂中的一种或两种以上任意混合。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述抗菌药剂为百菌清原药、百菌清制 剂、五氯硝基苯原药、五氯硝基苯制剂、多菌灵原药、多菌灵制剂、扑海因原药、扑海因制剂、 咪鲜胺原药和咪鲜胺制剂中的一种或两种以上任意混合。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述代森锰锌制剂为代森锰锌可湿性粉 剂，所述百菌清制剂为百菌清可湿性粉剂，所述五氯硝基苯制剂为五氯硝基苯可湿性粉剂， 所述多菌灵制剂为多菌灵可湿性粉剂；所述扑海因制剂为扑海因可湿性粉剂，所述咪鲜胺 制剂为咪鲜胺水乳剂；所述代森锰锌制剂优选为80%代森锰锌可湿性粉剂，所述百菌清制 剂优选为75%百菌清可湿性粉剂，所述五氯硝基苯制剂优选为20%五氯硝基苯可湿性粉 剂，所述多菌灵制剂优选为50%多菌灵可湿性粉剂；所述扑海因制剂优选为50%扑海因可 湿性粉剂，所述咪鲜胺制剂优选为45%咪鲜胺水乳剂；所述百分含量优选为质量百分含量
6.根据权利要求1-4中任意一项所述的应用，其特征在于所述木霉为保藏于中国农 业科学院微生物菌种保藏管理中心的木霉菌株，保藏号为30121。
7.—种西瓜枯萎病菌抑制剂，由抗菌药剂和木霉组成；所述抗菌药剂选自代森锰锌原 药、代森锰锌制剂、百菌清原药、百菌清制剂、五氯硝基苯原药、五氯硝基苯制剂、多菌灵原 药、多菌灵制剂、扑海因原药、扑海因制剂、咪鲜胺原药和咪鲜胺制剂中的一种或两种以上 任意混合；所述抗菌药剂优选为百菌清原药、百菌清制剂、五氯硝基苯原药、五氯硝基苯制 剂、多菌灵原药、多菌灵制剂、扑海因原药、扑海因制剂、咪鲜胺原药和咪鲜胺制剂中的一种 或两种以上任意混合。
8.根据权利要求8所述的西瓜枯萎病菌抑制剂，其特征在于所述代森锰锌制剂为代 森锰锌可湿性粉剂，所述百菌清制剂为百菌清可湿性粉剂，所述五氯硝基苯制剂为五氯硝 基苯可湿性粉剂，所述多菌灵制剂为多菌灵可湿性粉剂；所述扑海因制剂为扑海因可湿性 粉剂，所述咪鲜胺制剂为咪鲜胺水乳剂。
9.根据权利要求9所述的西瓜枯萎病菌抑制剂，其特征在于所述代森锰锌制剂为 80%代森锰锌可湿性粉剂，所述百菌清制剂为75%百菌清可湿性粉剂，所述五氯硝基苯制 剂为20%五氯硝基苯可湿性粉剂，所述多菌灵制剂为50%多菌灵可湿性粉剂；所述扑海因 制剂为50%扑海因可湿性粉剂，所述咪鲜胺制剂为45%咪鲜胺水乳剂；所述百分含量为质 量百分含量。
10.根据权利要求7-9中任意一项所述的西瓜枯萎病菌抑制剂，其特征在于所述木霉 为保藏于中国农业科学院微生物菌种保藏管理中心的木霉菌株，保藏号为30121。
全文摘要
本发明公开了一种木霉在提高药剂对西瓜枯萎病菌的抑制效果中的应用。使用木霉同药剂混合可大大提高药剂对对西瓜枯萎病菌的抑菌效率。实验证明本发明的应用可以大大提高药剂的利用效率，提高药剂对西瓜枯萎病的抑菌效果，可大大提高杀菌防病的成本，对环境保护作出贡献。
文档编号A01N63/04GK101919414SQ201010244899
公开日2010年12月22日 申请日期2010年8月2日 优先权日2009年12月25日
发明者刘菲菲, 张新春, 王家保 申请人:中国热带农业科学院环境与植物保护研究所