专利名称：红叶南天竹的组织培养方法
技术领域：
本发明属于植物栽培技术领域，具体为红叶南天竹的组织培养方法。
背景技术：
红叶南天竹为小檗科Berberidaceae南天竹属Nandirm的一个栽培新品种，是浙 江森禾种业股份有限公司从南天竹栽培群体中选育出来的。红叶南天竹为常绿灌木，植株 高约80cm，丛生而少分枝，枝叶浓密，树形紧凑；节间特短，只有普通南天竹的1/10，10个茎 节的长度约5cm，而普通南天竹一节约8-lOcm ；叶片为二回三小叶复叶，叶片先端钝尖，基 部楔形，全缘，薄革质，长3-5cm，宽1. 5-2cm，总叶柄1. 5-3cm。红叶南天竹喜半荫，强光下 也能正常生长，喜温暖气候，肥沃、湿润排水良好的土壤；冬季阳光直射到的叶片全部变红， 秋天稍遇冷空气，叶色便由绿色转为鲜红色，持续至翌年初春。红叶南天竹冬季整株叶色呈现鲜艳的中国红，具兴旺发达之寓意；春、夏、秋三季 叶色深绿色，和谐舒适。是优良的观叶地被和色块树种，观赏效果醒目。适于华东地区应 用，该区域冬季可观赏的露地栽培树种比较少，色彩艳丽的耐寒树种更少，红叶南天竹是理 想的新选择，市场开发潜力巨大。常规的扦插育苗法，繁殖周期长、繁殖率极低，由于株型紧 凑、茎节短缩、枝叶密集，可用的扦插茎段十分有限，繁殖技术成为南天竹广泛应用的巨大 障碍。目前，国内对南天竹组织培养再生植株方面的报道很少，红叶南天竹组培未见报道， 这样在一定程度上限制了红叶南天竹的大面积推广。
发明内容
本发明针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种红叶南天竹 的组织培养方法的技术方案，该培养方法成活率高、繁殖速度快。所述的红叶南天竹的组织培养方法，其特征在于包括以下步骤
1)从红叶南天竹实生苗中选取健康、观赏性状表现典型的植株作为材料；在晴天的上 午，剪取新枝，去除羽状复叶，清洗备用；
2)在超净工作台上，将清洗干净的枝条依次用酒精溶液、升汞溶液浸泡消毒并冲洗；
3)剥出枝条内的茎尖，切下先端部分接入培养基中放在培养室中培养；
4)培养一段时间后，茎尖分化增殖形成若干不定芽，将不定芽转接入增殖培养基中培
养；
5)培养一段时间后，将不定芽生长形成的嫩茎切下，经生根培养基培养后，形成健壮的 组培生根苗。所述的红叶南天竹的组织培养方法，其特征在于步骤1)中采集新生枝条前一个 月每隔7-10d整株喷洒700倍-900倍多菌灵；采集后的枝条，剪除羽状复叶，自来水冲洗干 净，洗洁精溶液浸泡5-lOmin，再用自来水冲洗0. 3-0. 6h备用。所述的红叶南天竹的组织培养方法，其特征在于步骤2)中酒精浓度为70%_80%， 浸泡时间为20-30s，倒掉酒精后无菌水冲洗4-5次，然后加入0. 05%-0. 2%升汞溶液，浸泡8-10 min，其间不断摇动，倒掉升汞溶液用无菌水冲洗7_8次。所述的红叶南天竹的组织培养方法，其特征在于步骤3)中枝条消毒后用无菌刀 片剥取茎尖，切下先端长度为3-6mm的部分，接入配制好的诱导分化培养基中；诱导分化培 养基的配方为MS培养基中添加0. 5-1. Smg-L"1 6-苄氨基嘌呤、0. 05-0. 15 mg·!/1吲哚丁酸、 2-5%蔗糖和0. 5-0. 8%琼脂制成，至培养基pH为5. 8-6. 0止。所述的红叶南天竹的组织培养方法，其特征在于步骤4)中培养室中培养温度 为25士2 °C，光照时间ll_13h/d，光强1500-2000LX ；茎尖接入培养基60d_65d，茎尖分化 形成新芽，并长出幼嫩枝条，将长于0. 4-0. 6 cm幼嫩枝条切割成0. 5-1. Ocm的茎段转接入 增殖培养基，增殖培养基配方为MS培养基中添加0.5-1. 5 mg-r1 6-苄氨基嘌呤、0. 1-0. 2 mg.L—1吲哚丁酸、2-5%蔗糖和0. 5-0. 8%琼脂制成，至培养基pH为5. 8-6. 0止。所述的红叶南天竹的组织培养方法，其特征在于步骤5)中茎段在增殖培养基培 养60d-65d，茎段增殖形成不定芽，并抽生出嫩茎，将茎段分化生长出的长度超过2-4 cm的 嫩茎切下，接入生根培养基；生根培养基的配方为1/2MS培养基中添加0. 1-0. 5 mg·!/1吲哚 丁酸、0. 05-0. 15 mg.L—1萘乙酸、1-3%的蔗糖、0. 5-0. 8%的琼脂和0. 1-0. 3 g.L-1活性炭制 成，至培养基PH为6. 3-6. 7止；培养后60-75d后，形成健壮的生根苗。所述的MS培养基、洗洁精可由市场上直接购得。所述的BA为6-苄氨基嘌呤，IBA 为吲哚丁酸，NAA为萘乙酸。上述红叶南天竹的组织培养方法，成活率高、繁殖速度快，增殖系数达到7. 3，生根 率达到87%，得到的红叶南天竹品质优良，具有广阔的市场前景。本申请文件中涉及的百分含量除另有说明外，均指重量百分含量。
具体实施例方式现结合本发明的实施例，对本发明作进一步说明。实施例1
1)从红叶南天竹实生苗中选取健康、观赏性状表现典型的植株作为材料，采集新生枝 条前一个月每隔8d整株喷洒800倍多菌灵，在每年3-5月里晴天的上午剪取新枝，去除羽 状复叶，用自来水冲洗表面灰尘，然后用洗洁精溶液浸泡7min，再用自来水冲洗0. 5h备用；
2)在超净工作台上，将清洗干净的枝条用75%的酒精溶液浸泡25s，倒掉酒精后用无菌 水冲洗5次，再加入0. 1%升汞溶液浸泡9min，其间不断摇动，然后倒掉升汞溶液用无菌水冲 洗8次备用；
3)用灭菌的刀片剥出枝条上的茎尖，切取长度为5mm茎尖先端，接入配制好的诱导分 化培养基中放置培养室中培养；培养基配方为MS培养基中添加1.0 mg-r1 BA、0. 1 mg-Γ1 IBA、3%的蔗糖和0. 7%的琼脂制成，至培养基pH为6. 0止；
4)培养室中培养温度为25°C，光照时间12h/d，光强1500Lx；茎尖在诱导分化培养基上 培养60d，分化形成若干新芽，并抽生幼嫩枝条，将其中大于0. 5cm的幼嫩枝条切下，分割成 0. 5cm的茎段，转接入增殖培养基中培养；增殖培养基配方为MS培养基中添加1. 5 mg·!/1 ΒΑ、0· 1 mg.L—1 IBA、3%的蔗糖和0. 7%的琼脂制成，至培养基pH为6. 0止；
5)茎段在增殖培养基培养60d，茎段增殖形成不定芽，并抽生出嫩茎，将茎段分化生长 出的长度超过3cm的嫩茎切下，接入生根培养基；生根培养基的配方为1/2MS培养基中添加0. 25 mg.I^IBA、。· 1 mg-L^1NAA,2%的蔗糖、0. 7%的琼脂和0. 2 g-Γ1活性炭制成，至培养基 PH为6. 5止；继续培养后65d后，形成健壮的生根苗。实施例2:
步骤1)中每隔7d整株喷洒700倍多菌灵，洗洁精溶液浸泡5min，自来水冲洗0. 3h ；步 骤2)中酒精浓度为70%，浸泡时间为30s，倒掉酒精后无菌水冲洗4次，然后加入0. 05%升汞 溶液，浸泡时间为10 min，其间不断摇动，倒掉升汞溶液用无菌水冲洗7次；步骤3)中切下 先端长度为3mm的部分，培养基配方为MS培养基，添加0. Smg-L^BA.O. lSmg.I^IBA、〗。/。的蔗 糖和0. 8%的琼脂制成，至培养基pH为5. 8止；步骤4)中培养温度为27°C，光照时间Ilh/ d，光强2000Lx ；将其中大于0. 6cm的幼嫩枝条切下，分割成0. 6cm的茎段；增殖培养基配方 为MS培养基中添加0.5 mg.L—1 ΒΑ、0·15 mg.L—1 IBA、4%的蔗糖和0. 8%的琼脂制成，至培养 基PH为5. 8止；步骤5)中茎段在增殖培养基培养65d，将茎段分化生长出的长度超过2 cm 的嫩茎切下，生根培养基的配方为1/2MS培养基中添加0. 1 mg-L^IBA.O. 05 mg-L^1NAA,3% 的蔗糖、0. 6%的琼脂和0. 3 g.L-1活性炭制成，至培养基pH为6. 3止；继续培养后60d后， 形成健壮的生根苗；其它步骤同实施例1。实施例3 步骤1)中每隔9d整株喷洒900倍多菌灵，洗洁精溶液浸泡lOmin，自来 水冲洗0. 6h ；步骤2)中酒精浓度为80%，浸泡时间为20s，然后加入0. 15%升汞溶液，浸泡 时间为9 min，其间不断摇动，倒掉升汞溶液用无菌水冲洗7次；步骤3)中切下先端长度为 4mm的部分，培养基配方为MS培养基中添加1.5 mg.L—1 ΒΑ、0. 05 mg.L—1 IBA、5%的蔗糖和 0. 5%的琼脂制成，至培养基pH为5. 9止；步骤4)中培养温度为26°C，光照时间llh/d，光 强1600Lx ；将其中大于0. 6cm的幼嫩枝条切下，分割成1. Ocm的茎段；增殖培养基配方为MS 培养基中添加1. Smg-L"1 ΒΑ、0· 05 mg.L—1 IBA、5%的蔗糖和0. 6%的琼脂制成，至培养基pH 为5. 9止；步骤5)中茎段在增殖培养基培养62d，将茎段分化生长出的长度超过4 cm的嫩 茎切下，生根培养基的配方为1/2MS培养基中添加0. 30 mg-L^IBA.O. 15 π^Ι^ΝΑΑΙ/。的蔗 糖、0. 8%的琼脂和0. 1 g-Γ1活性炭制成，至培养基pH为6. 7止；培养后70d后，形成健壮 的生根苗；其它步骤同实施例1。实施例4 步骤1)中洗洁精溶液浸泡9min，自来水冲洗0. 4h ；步骤2)中酒精浓度 为78%，浸泡时间为23s ；步骤3)中培养基配方为MS培养基中添加1.2 mg-Γ1 BA,0. OSmg-L"1 IBA,4%的蔗糖和0. 6%的琼脂制成；步骤4)中培养温度为24°C，光照时间13h/d，光强 1700Lx ；增殖培养基配方为MS培养基中添加1. 2 mg.L—1 ΒΑ、0· 09 mg.L—1 IBA、3%的蔗糖和 0. 5%的琼脂制成；步骤5)中生根培养基的配方为1/2MS培养基中添加0. 5 mg-L^IBA.O. 12 mg.I^NAAJ/o的蔗糖、0. 6%的琼脂和0. 25 g.L-1活性炭制成，至培养基pH为6. 6止；培养 后75d后，形成健壮的生根苗；其它步骤同实施例1。实施例5 步骤1)中每隔IOd整株喷洒650倍多菌灵，洗洁精溶液浸泡6min ；步骤 2)中升汞溶液浓度为0. 2%，浸泡时间为8 min，倒掉升汞溶液用无菌水冲洗8次；步骤4)中 培养温度为23°C，光照时间12h/d，光强2000Lx ；其它步骤同实施例1。采用上述实施例1-5组织培养方法得到的红叶南天竹生根苗，成活率高、繁殖速 度快，增殖系数达到7. 3，生根率达到87%。以下结合相应的试验数据对本发明作进一步说明。试验1.设置增殖培养基中不同的激素配比试验，BA浓度4个梯度0. 5 mg-Γ1、1.0 mg.L-1、1.5 mg.L-1、2· 0 mg·!/1，ΙΒΑ2 个浓度梯度 0. 1 mg·!/1、。. 2mg·!^，并设立对照，
见表1。
权利要求
1.红叶南天竹的组织培养方法，其特征在于包括以下步骤1)从红叶南天竹实生苗中选取健康、观赏性状表现典型的植株作为材料；在晴天的上 午，剪取新枝，去除羽状复叶，清洗备用；2)在超净工作台上，将清洗干净的枝条依次用酒精溶液、升汞溶液浸泡消毒并冲洗；3)剥出枝条内的茎尖，切下先端部分接入培养基中放在培养室中培养；4)培养一段时间后，茎尖分化增殖形成若干不定芽，将不定芽转接入增殖培养基中培养；5)培养一段时间后，将不定芽生长形成的嫩茎切下，经生根培养基培养后，形成健壮的 组培生根苗。
2.如权利要求1所述的红叶南天竹的组织培养方法，其特征在于步骤1)中采集新生 枝条前一个月每隔7-10d整株喷洒700倍-900倍多菌灵；采集后的枝条，剪除羽状复叶，自 来水冲洗干净，洗洁精溶液浸泡5-lOmin，再用自来水冲洗0. 3-0. 6h备用。
3.如权利要求1所述的红叶南天竹的组织培养方法，其特征在于步骤2)中酒精浓度 为70%-80%，浸泡时间为20-30s，倒掉酒精后无菌水冲洗4-5次，然后加入0. 05%-0. 2%升汞 溶液，浸泡8-10 min，其间不断摇动，倒掉升汞溶液用无菌水冲洗7-8次。
4.如权利要求1所述的红叶南天竹的组织培养方法，其特征在于步骤3)中枝条消 毒后用无菌刀片剥取茎尖，切下先端长度为3-6mm的部分，接入配制好的诱导分化培养基 中；诱导分化培养基的配方为MS培养基中添加0. 5-1. Smg-L-1 6-苄氨基嘌呤、0. 05-0. 15 mg.L—1吲哚丁酸、2-5%蔗糖和0. 5-0. 8%琼脂制成，至培养基pH为5. 8-6. 0止。
5.如权利要求1所述的红叶南天竹的组织培养方法，其特征在于步骤4)中培养室中 培养温度为25士2°C，光照时间ll_13h/d，光强1500-2000LX ；茎尖接入培养基60d_65d，茎 尖分化形成新芽，并长出幼嫩枝条，将长于0. 4-0. 6 cm幼嫩枝条切割成0. 5-1. Ocm的茎段 转接入增殖培养基，增殖培养基配方为MS培养基中添加0.5-1. 5 mg-r1 6-苄氨基嘌呤、 0. 1-0. 2 mg.L—1吲哚丁酸、2-5%蔗糖和0. 5-0. 8%琼脂制成，至培养基pH为5. 8-6. 0止。
6.如权利要求1所述的红叶南天竹的组织培养方法，其特征在于步骤5)中茎段在增 殖培养基培养60d-65d，茎段增殖形成不定芽，并抽生出嫩茎，将茎段分化生长出的长度超 过2-4 cm的嫩茎切下，接入生根培养基；生根培养基的配方为1/2MS培养基中添加0. 1-0. 5 mg.L—1 吲哚丁酸、0. 05-0. 15 mg.L—1 萘乙酸、1-3% 的蔗糖、0. 5-0. 8% 的琼脂和 0. 1-0. 3 g-Γ1 活性炭制成，至培养基PH为6. 3-6. 7止；培养后60-75d后，形成健壮的生根苗。
全文摘要
红叶南天竹的组织培养方法，属于植物栽培技术领域。包括以下步骤1)从红叶南天竹实生苗中选取健康、观赏性状表现典型的植株作为材料；在晴天的上午，剪取新枝，去除羽状复叶，清洗备用；2)在超净工作台上，将清洗干净的枝条依次用酒精溶液、升汞溶液浸泡消毒并冲洗；3)剥出枝条内的茎尖，切下先端部分接入培养基中；4)培养一段时间后，茎尖分化增殖形成若干不定芽，将不定芽转接入增殖培养基中培养；5)培养一段时间后，将不定芽生长形成的嫩茎切下，经生根培养基培养后，形成健壮的组培生根苗。该组织培养方法成活率高、繁殖速度快，增殖系数达到7.3，生根率达到87%，得到的红叶南天竹品质优良，具有广阔的市场前景。
文档编号A01H4/00GK102138526SQ20111007220
公开日2011年8月3日 申请日期2011年3月24日 优先权日2011年3月24日
发明者张俊林, 王春, 邵春荣, 郑勇平 申请人:浙江森禾种业股份有限公司