专利名称：一种抗寒粗肋草多倍体的诱导方法
技术领域：
本发明涉及粗肋草育种技术，尤其涉及一种抗寒粗肋草多倍体的诱导方法。
背景技术：
粗肋草是天南星科粗肋草属(Aglaonema)植物的通称，又名广东万年青、亮丝草， 原产于我国广东、广西、云南及东南亚的印度、泰国、越南、菲律宾、马来西亚、印尼和新几内亚等地，为多年生常绿草本植物。其叶片、叶柄和叶脉具有多姿多彩的颜色搭配，具有很强的欣赏价值，深受人们的喜爱，在国际上被列为理想的室内观叶植物。但是，粗肋草普遍在 15°C以下即会出现冻伤现象，影响其冬季生产、销售。为此，通过诱导多倍体，培育出具有抗寒性的粗肋草新品种，对满足市场需要具有重要意义。
发明内容
本发明旨在克服粗肋草普遍在15°C以下即会出现冻伤现象、影响其冬季生产的不足，满足市场需求，提供一种抗寒粗肋草多倍体的诱导方法。本发明一种抗寒粗肋草多倍体的诱导方法的技术方案是 本发明一种抗寒粗肋草多倍体的诱导方法，包括如下步骤
步骤一、丛生芽诱导取无病虫害及健壮的粗肋草植株茎段或顶芽作为外植体，先用洗衣粉溶液擦洗，流水冲洗掉洗衣粉，在超净工作台上将外植体置于含有吐温-20的0. 1%升汞溶液中浸泡15 30min，无菌水冲洗，用灭菌滤纸吸干表面水分，插入丛芽诱导培养基内，置于温度为25士2°C，光照10 12h · d-1，光照强度为60 IOOymol m—Y1的培养室内诱导丛生芽；丛生芽诱导培养基为MS+2-IP1 ;3mg/L+NAA0. 2 0. 5mg/L+白糖25 35g/L+ 卡拉胶 6 7g/L，pH 值为 6 士 0. 5 ；
步骤二、秋水仙素处理将丛芽去顶连同下面的愈伤一起，置于含0. 2% 0. 3%秋水仙素的溶液中黑暗条件下振荡培养48 72h，无菌水冲洗，转入不含秋水仙素的恢复培养基上，置于25士2°C温室内，光照条件下恢复培养；恢复培养基为MS+2-IPl ;3mg/L+6-BA 2 ％ig/L +白糖25 !35g/L+卡拉胶6 7g/L，pH值为6士0. 5 ；
步骤三、低温处理将恢复培养15-20d的处理材料，置于0°C的培养箱内继续培养 M 48 h。将处理材料重新转到25士2°C培养室内恢复培养；
步骤四、变异植株扩繁将外观与对照有变异的新长出的植株，转到继代培养基 MS+2-IP1 3mg/L+NAA0. 2 0. 5mg/L+ 白糖 25 35g/L+卡拉胶 6 7g/L，PH值为 6士0. 5 上进行扩繁；每30d继代一次，继代5次；
步骤五、多倍体鉴定选择外观表现稳定的变异株系，随机挑选5株进行根尖压片，观察染色体数目；在一个根尖上同时观察到5个以上分裂相染色体数目加倍，即可确定该变异株系为多倍体；
步骤六、生根移栽鉴定为多倍体的株系，长到3-4cm长时，从基部切下，转到生根诱导培养基上诱导生根；生根培养基为MS+2IP1 ^ig/L+IAAl ang/L+IBAO. 5 lmg/L+白糖25 35g/L+卡拉胶6 7g/L，PH值为6 士 0. 5 ；生根苗转到日光温室大棚炼苗7_10d ； 把生根苗取出，洗掉培养基后，移栽到泥炭及珍珠岩的基质上，置于温室大棚中，盖上薄膜和阴网，14 16d后掀开阴网和薄膜正常管理。步骤六中的所述基质中泥炭与珍珠岩的体积比为3:1。本发明是一种诱导抗寒性粗肋草多倍体植株的方法，具有突出的特点，其有益效果是其一，将变异植株经过5代繁殖后，再进行多倍体检测，可以有效降低嵌合体的比例； 其二，多倍体植株比对照茎干粗壮，矮化，株型更加美观；其三，多倍体植株具有抗寒性，能耐5°C低温不出现冻伤，降低了冬季温室大棚加温费用，经济效益大大提高。
具体实施例方式下面，介绍本发明的具体实施方式
。实施例一
步骤一、丛生芽诱导取无病虫害及健壮的粗肋草植株茎段或顶芽作为外植体，先用饱和洗衣粉溶液擦洗一遍，流水冲洗掉洗衣粉后，在超净工作台上将外植体置于含有几滴吐温-20的0. 1%升汞溶液中浸泡15-30min，无菌水冲洗4-5次，用灭菌滤纸吸干表面水分后， 插入丛芽诱导培养基内，置于温度为23°C，光照IOh · d-Ι，光照强度为60μπιΟ1 m^s"1的培养室内诱导丛生芽。丛生芽诱导培养基为MS+2-IPlmg/L+NAA0. 2mg/L+白糖25g/L+卡拉胶6g/L，pH5.5。步骤二、秋水仙素处理将丛芽去顶连同下面的愈伤一起，置于含0. 2%秋水仙素的溶液中黑暗条件下振荡培养48h，无菌水冲洗4-5次后，转入不含秋水仙素的恢复培养基上，置于23°C温室内，光照条件下恢复培养。恢复培养基为MS+2-IPlmg/L+6-BA 2mg/L + 白糖 25g/L+ 卡拉胶 6g/L，ρΗ5· 5。步骤三、低温处理将恢复培养15-20d的处理材料，置于0°C的培养箱内继续培养 24 h。将处理材料重新转到23°C培养室内恢复培养。步骤四、变异植株扩繁将外观与对照有变异的新长出的植株，转到继代培养基 MS+2-IPlmg/L+NAA0. 2mg/L+ 白糖 25g/L+ 卡拉胶 6g/L，pH5. 5 上进行扩繁。每 30d 继代一次，继代5次。步骤五、多倍体鉴定选择外观表现稳定的变异株系，随机挑选5株进行根尖压片，观察染色体数目。在一个根尖上同时观察到5个以上分裂相染色体数目加倍，即可确定该变异株系为多倍体。步骤六、生根移栽鉴定为多倍体的株系，长到3_4cm长时，从基部切下，转到生根诱导培养基上诱导生根。生根培养基为MS+2IPlmg/L+IAAlmg/L+IBA0. 5mg/L+白糖25g/ L+卡拉胶6g/L，pH5.5。生根苗转到日光温室大棚炼苗7-10d。把生根苗取出，洗掉培养基后，移栽到泥炭及珍珠岩基质上，置于温室大棚中，盖上薄膜和单层阴网，15d后掀开阴网和
薄膜正常管理。步骤六中的所述基质中泥炭与珍珠岩的体积比为3:1。实施例二
步骤一、丛生芽诱导取无病虫害及健壮的粗肋草植株茎段或顶芽作为外植体，先用饱和洗衣粉溶液擦洗一遍，流水冲洗掉洗衣粉后，在超净工作台上将外植体置于含有几滴吐温-20的0. 1%升汞溶液中浸泡15-30min，无菌水冲洗4-5次，用灭菌滤纸吸干表面水分后， 插入丛芽诱导培养基内，置于温度为25°C，光照Ilh · d-Ι，光照强度为SOymol m^s"1的培养室内诱导丛生芽。丛生芽诱导培养基为MS+2-IPang/L+NAA0. 3mg/L+白糖30g/L+卡拉胶 6. 5g/L, ρΗ5· 8。步骤二、秋水仙素处理将丛芽去顶连同下面的愈伤一起，置于含0. 3%秋水仙素的溶液中黑暗条件下振荡培养60h，无菌水冲洗4-5次后，转入不含秋水仙素的恢复培养基上，置于25°C温室内，光照条件下恢复培养。恢复培养基为MS+2-IPang/L+6-BA;3mg/L +白糖 30g/L+ 卡拉胶 6. 5g/L，ρΗ5· 8。步骤三、低温处理将恢复培养15-20d的处理材料，置于0°C的培养箱内继续培养 36 h。将处理材料重新转到25°C培养室内恢复培养。步骤四、变异植株扩繁将外观与对照有变异的新长出的植株，转到继代培养基 MS+2-IP2mg/L+NAA0. 4mg/L+ 白糖 30g/L+ 卡拉胶 6. 5g/L, pH5. 8 上进行扩繁。每 30d 继代一次，继代5次。步骤五、多倍体鉴定选择外观表现稳定的变异株系，随机挑选5株进行根尖压片，观察染色体数目。在一个根尖上同时观察到5个以上分裂相染色体数目加倍，即可确定该变异株系为多倍体。步骤六、生根移栽鉴定为多倍体的株系，长到3_4cm长时，从基部切下，转到生根诱导培养基上诱导生根。生根培养基为MS+2IP2mg/L+IAAang/L+IBAlmg/L+白糖30g/L+ 卡拉胶6.5g/L，pH5.8。生根苗转到日光温室大棚炼苗7-10d。把生根苗取出，洗掉培养基后，移栽到泥炭及珍珠岩基质上，置于温室大棚中，盖上薄膜和单层阴网，15d后掀开阴网和
薄膜正常管理。步骤六中的所述基质中泥炭与珍珠岩的体积比为3:1。实施例三
步骤一、丛生芽诱导取无病虫害及健壮的粗肋草植株茎段或顶芽作为外植体，先用饱和洗衣粉溶液擦洗一遍，流水冲洗掉洗衣粉后，在超净工作台上将外植体置于含有几滴吐温-20的0. 1%升汞溶液中浸泡15-30min，无菌水冲洗4-5次，用灭菌滤纸吸干表面水分后， 插入丛芽诱导培养基内，置于温度为27°C，光照12h *(1-1，光照强度为lOOymol m^s"1的培养室内诱导丛生芽。丛生芽诱导培养基为MS+2-IP;3mg/L+NAAO. 5mg/L+白糖35g/L+卡拉胶7g/L，pH6. 5。步骤二、秋水仙素处理将丛芽去顶连同下面的愈伤一起，置于含0. 3%秋水仙素的溶液中黑暗条件下振荡培养72h，无菌水冲洗4-5次后，转入不含秋水仙素的恢复培养基上，置于27°C温室内，光照条件下恢复培养。恢复培养基为MS+2-IP;3mg/L+6-BA%ig/L +白糖 30g/L+ 卡拉胶 7g/L，ρΗ6· 5。步骤三、低温处理将恢复培养15-20d的处理材料，置于0°C的培养箱内继续培养 48 h。将处理材料重新转到27°C培养室内恢复培养。步骤四、变异植株扩繁将外观与对照有变异的新长出的植株，转到继代培养基 MS+2-IP3mg/L+NAA0. 5mg/L+ 白糖 350g/L+ 卡拉胶 7g/L，pH6. 5 上进行扩繁。每 30d 继代一次，继代5次。
步骤五、多倍体鉴定选择外观表现稳定的变异株系，随机挑选5株进行根尖压片，观察染色体数目。在一个根尖上同时观察到5个以上分裂相染色体数目加倍，即可确定该变异株系为多倍体。步骤六、生根移栽鉴定为多倍体的株系，长到3-4cm长时，从基部切下，转到生根诱导培养基上诱导生根。生根培养基为MS+2IPang/L+IAAaiig/L+IBAlmg/L+白糖35g/L+卡拉胶7g/L，pH6.5。生根苗转到日光温室大棚炼苗7-10d。把生根苗取出，洗掉培养基后，移栽到泥炭及珍珠岩基质上，置于温室大棚中，盖上薄膜和单层阴网，15d后掀开阴网和薄膜
正常管理。步骤六中的所述基质中泥炭与珍珠岩的体积比为3:1。
权利要求
1.一种抗寒粗肋草多倍体的诱导方法，其特征在于，包括如下步骤步骤一、丛生芽诱导取无病虫害及健壮的粗肋草植株茎段或顶芽作为外植体，先用洗衣粉溶液擦洗，流水冲洗掉洗衣粉，在超净工作台上将外植体置于含有吐温-20的0. 1%升汞溶液中浸泡15 30min，无菌水冲洗，用灭菌滤纸吸干表面水分，插入丛芽诱导培养基内，置于温度为25士2°C，光照10 12h · d-1，光照强度为60 IOOymol m—Y1的培养室内诱导丛生芽；丛生芽诱导培养基为MS+2-IP1 ;3mg/L+NAA0. 2 0. 5mg/L+白糖25 35g/L+ 卡拉胶 6 7g/L，pH 值为 6 士 0. 5 ；步骤二、秋水仙素处理将丛芽去顶连同下面的愈伤一起，置于含0. 2% 0. 3%秋水仙素的溶液中黑暗条件下振荡培养48 72h，无菌水冲洗，转入不含秋水仙素的恢复培养基上，置于25士2°C温室内，光照条件下恢复培养；恢复培养基为MS+2-IPl ;3mg/L+6-BA 2 ％ig/L +白糖25 !35g/L+卡拉胶6 7g/L，pH值为6士0. 5 ；步骤三、低温处理将恢复培养15-20d的处理材料，置于0°C的培养箱内继续培养 M 48 h ；将处理材料重新转到25 士 2°C培养室内恢复培养；步骤四、变异植株扩繁将外观与对照有变异的新长出的植株，转到继代培养基 MS+2-IP1 3mg/L+NAA0. 2 0. 5mg/L+ 白糖 25 35g/L+卡拉胶 6 7g/L，PH值为 6士0. 5 上进行扩繁；每30d继代一次，继代5次；步骤五、多倍体鉴定选择外观表现稳定的变异株系，随机挑选5株进行根尖压片，观察染色体数目；在一个根尖上同时观察到5个以上分裂相染色体数目加倍，即可确定该变异株系为多倍体；步骤六、生根移栽鉴定为多倍体的株系，长到3-4cm长时，从基部切下，转到生根诱导培养基上诱导生根；生根培养基为MS+2IP1 ^ig/L+IAAl ang/L+IBAO. 5 lmg/L+白糖25 35g/L+卡拉胶6 7g/L，PH值为6 士 0. 5 ；生根苗转到日光温室大棚炼苗7_10d ； 把生根苗取出，洗掉培养基后，移栽到泥炭及珍珠岩的基质上，置于温室大棚中，盖上薄膜和阴网，14 16d后掀开阴网和薄膜正常管理。
2.根据权利要求1所述的一种抗寒粗肋草多倍体的诱导方法，其特征在于步骤六中的所述基质中泥炭与珍珠岩的体积比为3:1。
全文摘要
一种抗寒粗肋草多倍体的诱导方法涉及粗肋草育种技术。包括如下步骤丛生芽诱导，秋水仙素处理，低温处理，变异植株扩繁，多倍体鉴定，生根移栽。将变异植株经过5代繁殖后，再进行多倍体检测，可以有效降低嵌合体的比例；多倍体植株比对照茎干粗壮，矮化，株型更加美观；多倍体植株具有抗寒性，能耐5℃低温不出现冻伤，降低了冬季温室大棚加温费用，经济效益大大提高。
文档编号A01H4/00GK102440193SQ201110315590
公开日2012年5月9日 申请日期2011年10月18日 优先权日2011年10月18日
发明者范俊强, 郑贵朝 申请人:东莞市生物技术研究所